青藤碱对膝骨性关节炎兔关节液及血清白细胞介素1β含量的影响

1、青藤碱对膝骨性关节炎兔关节液及血清白细胞介素1含量的影响         09-08-14 11:30:00     作者：杨惠琴, 陈礼荣    编辑：studa20【摘要】  目的：探讨关节腔内注射青藤碱对膝骨关节炎兔关节液及血清中白细胞介素1（interleukin1, IL1）含量的影响。方法：除正常对照组（n=4）外，36只兔采用左后肢膝关节伸直位石膏管型制动法建立兔骨关节炎模型。造模6周后青藤碱组兔关节腔内注射青藤

2、碱，1次/周，连续5周，透明质酸组关节腔内注射透明质酸，模型组关节腔内注射生理盐水，正常组不治疗。分别于治疗前及治疗后采用酶联免疫吸附测定法检测关节液及血清IL1含量，并对软骨组织进行Mankin评分。结果：与模型组比较，青藤碱组骨性关节炎兔血清及关节液中IL1含量下降（P<0.01），且青藤碱组低于透明质酸组（P<0.05）。青藤碱组的软骨Mankin评分明显低于透明质酸组（P<0.05）。结论：青藤碱可能通过抑制关节液及血清中IL1表达降低兔骨性关节炎模型的关节退变程度。 【关键词】  骨性关节炎; 青藤碱; 白细胞介素1; 兔Methods: Degenera

3、tive osteoarthritis in the knee joint of left posterior limb was induced in 36 rabbits by full extension using plaster cast for 6 weeks. Then the rabbits were randomly divided into untreated group, hyaluronic acid group and sinomenine group. Another 4 normal rabbits were selected as normal control g

4、roup. Rabbits in the sinomenine group and the hyaluronic acid group received intraarticular injections of sinomenine and hyaluronic acid once a week for 5 weeks, respectively. The content of IL1 in synovial fluid and serum were measured before and after treatment by enzymelinked immunosorbent assay.

5、 The pathological changes of cartilaginous tissue were analyzed by using Mankin's score.Results: Compared with those in the untreated group, synovial fluid and serum IL1 contents in the sinomenine group and the hyaluronic acid group were significantly decreased (P<0.01). And the synovial flui

6、d and serum IL1 contents in the sinomenine group were lower than those in the hyaluronic acid group (P<0.05). The mean Mankin's score of cartilage in the sinomenine group was significantly lower than that in hyaluronic acid group (P<0.05).Conclusion: Sinomenine may reduce the degree of art

7、icular degeneration in rabbit with OA through decreasing the content of IL1 in synovial fluid and serum.Keywords: osteoarthritis; sinomenine; interleukin1; rabbits骨性关节炎（osteoarthritis, OA）是以关节软骨退变和关节周围形成骨质增生为病理特征的慢性进行性骨关节病，是影响人类健康最常见的关节疾患之一。青藤碱是一种从中药青风藤的茎和根中提取的生物碱单体。研究表明青藤碱具有镇痛、抗炎和免疫调节等作用1。目前对于青藤碱的研

8、究主要集中在治疗类风湿性关节炎的疗效及机制方面，而对于骨性关节炎的治疗则少有报道。本实验在建立兔膝骨关节炎模型的基础上，通过研究青藤碱对关节液及血清白细胞介素1（interleukin1, IL1）的表达及对膝关节软骨超微结构的影响，初步探讨青藤碱治疗骨性关节炎的机制。1  材料与方法1.1  实验动物  健康56月龄日本大耳白兔40只，雄性，体质量2.22.6 kg（平均2.5 kg），由湖北省实验动物研究中心提供，实验动物许可证号为SCXK(鄂)20050016。1.2  实验药物、主要试剂及仪器  IL1酶联免疫吸附测定(enzyme l

9、inked immunosorbent assay, ELISA)试剂盒，上海西唐生物科技有限公司生产；番红O/固绿(safranin' O/fast green, S/F)染色剂，成都科比特生物技术有限公司生产；青藤碱注射剂，50 mg/支（2 ml），湖南正青集团公司生产，批号为050912032；透明质酸（施沛特）注射剂20 mg/支（2 ml），由山东正大福瑞达制药公司生产，批号为051006031。美国Thereto公司酶标仪（Wellwash 4MK2型），德国HERAUS公司台式离心机（B4IBR4I型），上海一恒科技有限公司电热恒温水箱（DK600A型）。1. 3

10、60; 动物模型的制备  按Videman2的管型石膏伸直位制动法建立骨性关节炎模型。取36只实验兔进行造模，将其左后肢腹股沟以下1.5 cm至踝关节下3 cm（趾端）用石膏管型固定于伸直位，踝关节背屈3040度，制动6周。造模期间采用一笼一兔喂养，每天检查石膏固定的情况，并及时进行修复。6周后去除石膏。1.4  实验分组及给药方法  制动6周后，将骨性关节炎模型兔随机分为模型组、透明质酸组和青藤碱组，每组12只，另取4只正常实验兔作为正常组。给药方法为关节腔内注射，注射针头进针约0.40.7 cm，当感到阻力消失且有突破感时表示已进入关节腔。药物根据成人用药剂量

11、（青藤碱和透明质酸均为2 ml/次）按MeehRubner公式3计算人兔等效剂量。青藤碱组给予青藤碱注射剂0.2 ml/次（相当于2 mg/kg），透明质酸组给予透明质酸注射剂0.2 ml/次（相当于0.8 mg/kg），模型组关节腔注入0.2 ml生理盐水，1次/周，连续5周。正常组不给予任何处理。全部动物于末次给药后1周处死并取材。1.5  IL1含量检测  所有实验兔分别于造模成功后及治疗5周后，膝关节注入无菌生理盐水1.0 ml，在关节内混匀后抽取，离心后每膝获取200 l关节液，20 保存。同时留取耳缘静脉血0.5 ml，并分离血清，20 冰箱内保存。实验操作时取

12、血清及关节液各100 l进行检测。IL1含量检测采用ELISA双抗体夹心法，严格按照药盒说明书进行操作。采用酶标仪检测450 nm处的吸光度（optical density, OD）值，并计算IL1含量。1.6  关节软骨病理观察及Mankin评分  取实验动物双侧股骨内髁软骨，10%中性甲醛固定48 h，5%硝酸脱钙，常规乙醇逐级脱水，石蜡包埋。将股骨内髁标本行矢状面平行切片，切片厚约7 m，每个标本贴片两张：一张常规HE染色，一张行S/F染色。行S/F染色时将切片常规脱蜡、水化，魏格特氏铁苏木素溶液（Weigerts iron hematoxylin）染色5 min，蒸

13、馏水流水冲洗10 min，酸性酒精分色15 s，蒸馏水流水冲洗3 min，0.02%固绿染色5 min，1%乙酸洗15 min，0.1%番红O染色5 min，常规酒精脱水，二甲苯透明，树脂封片，光学显微镜下观察。采用Mankin评分方法4，确定关节软骨的受损程度。1.7  统计学方法  本研究采用SPSS 13.0统计软件进行单因素方差分析，行多组间两两比较，所得数据以x±s表示，检验水准=0.05。2  结果2.1  血清和关节液IL1含量  造模结束后，模型组大鼠关节液及血清中IL1含量与正常组比较，差异有统计学意义（P<0.01）。治疗后，与模型组比较，青藤碱组与透明质酸组大鼠关节液及血清中IL1含量下降，差异有统计学意义（P<0.01）；与透明质酸组血清及关节炎中IL1含量比较，青藤碱组明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。表1  各组血清及关节液IL1含量变化（略）Table 1  Changes of IL1 contents in synovial fluid and serum in four groups*P<0.01, vs untreate