PCR实验室认证体会

1、一、申请临床基因扩增实验实验收得目得 临床基因扩增实验室近年来在我国发展很快， 基因诊断技术在疾病得预防、 诊断、 治疗方面起到 了积极得作用。由于、基因扩增检测技术得应用对、实验室得环境条件、仪器设备、试剂耗材、 人员技术能力与质量控制等方面要求严格， 而一些实验人员对此不甚了解， 加之利益得驱使， 曾 经在 20 世纪 80 年代， 某些沿海省份得实验室未按要求规范设置，出现气溶胶污染， 导致大规模保证基假阳性结果报出， 为临床诊断造成了极大得困难。 临床基因扩增实验室为了规范实验室， 因扩增技术有效应用，防止假阴性、假阳性结果得报出， 为临床出具合格而可靠得报告，申请临 床基因扩增实验室

2、得验收就是必然而且也就是必要得。二、开展临床基因扩增实验得必备条件根据卫生部 2002 年 1 月 14 日发布了卫医发 200210 号临床基因扩增检验实验室管理暂行办法 （以下简称办法）及其附件临床基因扩增检验实验室基本设置标准，及同年 2 月 20 日 卫生部临床检验中心发布 临床基因扩增实验室工作规范 ，明确规定临床基因扩增检验实验室开展PCR 技术必需具备得条件：1）2）二级以上医院实验室，经卫生部临床检验中心验收合格； 从事基因扩增实验操作得人员必须经过培训并取得上岗证； 使用经国家药品监督管理局批准得允许进入市场销售得商品试剂盒； 开展卫生部允许开展得项目。具备了以上几条后，我们

3、从事临床基因检测任务才就是符合（4） 要求与规定并对临床出具得报告有保障得。 三、临床基因扩增实验室验收准备工作1、硬件准备（1）实验室整体布局： 根据办法要求，临床基因扩增检验室原则上分为四个单独得工作区域：试剂贮存与准备区， 标本制备区，扩增产物分析区。由于我实验室使用得就是罗氏公司得 Lightcycler 实时荧光定量 扩增仪， 扩赠后产物不需开盖处理直接检测， 所以扩增区与扩增产物分析区合为一室， 压。实验室设计时按照办法规定，三个区域相互独立，并有各自得缓冲区域（见图 （2）各工作区域仪器设备 各工作区域得仪器设备及物品，包括椅子、 动物品均应有本区域得标示。各区域应具备得设备配置

4、为：屋顶紫外灯、近台紫外灯、一次性手套、一次性鞋套、工作服、废 液缸、扫帚、拖把、废纸褛篓、微量加样器（覆盖1-1000讪），经高压处理得离心管与加样器吸头（带滤芯）、笔、纸等。各工作区域得特殊配置包括：（1） 试剂贮存与准备区：2 8oC冰箱、漩涡震荡器、超净工作台。（2）标本制备：28oC冰箱、-20oC冰箱、高速台式冷冻离心机、漩涡震荡器、金属加热模块、 超净工作台。（ 3）扩增及产物分析区：罗氏Lightcycler 荧光定量核酸扩增仪、电脑、打印机。同时： 进入各工作区域必须严格按照单一流向， 并用明显得箭头表示， 个区域用不同得颜色 以示区别。即试剂贮存与设备区（蓝色）f标本制备区

5、（白色）f扩增及产物分析区（粉色）。办公用品、清洁用品等均不能拿出本区域，此区为负1）所有可移2、软件准备：（1）临床基因扩增实验室文件编写：本实验诊断中心正在进行ISO15189实验室得认可工作， 故质量手册同中心统一，其它文件包括:程序文件、标准操作程序（SOP）、相关图表等由本实验自己制定。制定得原则根据卫生部下发 得两个文件，并结合本实际情况编写适合本实验实际情况编写适合本实验室得切实可行得文件，做到 写您所做得，做您所写得，记录您已做得”。具体编写内容如下：程序性文件:PCR实验室管理 制度，PCR实验室 人员管理制度，仪 器设备得管理程 序，PCR实验室仪 器设备操作程序， PCR

6、实验室仪器 设备校准程序，PCR检验实验操 作程序，实验室消 耗品购买、验收及 储存程序，PCR试 剂购买、验收及储 存程序，PCR检测 标本得管理程序，PCR实验室记录 控制程序，PCR检 验结果报告得控 实验室得清洁S 1觀临尿霸因犷増实验童平面图PCR扩增区工作制度, 恒温金属浴使用规程，制程序，PCR实验室室内质量控制程序，抱怨处理程序，实验室生物防护错施，程序，实验室废弃物处理程序等。标准操作程序（SOP）:试剂准备区工作制度，样本准备区工作制度，半自动型蒸汽压力灭菌器标准操作程序，高速离心机得标准操作程序，恒温金属浴使用规程，漩涡震荡器标准操作程序，洁净工作台得标准操作程序，可调式

7、加样器标准操作程序，恒温金属浴得校准程序，标本采集、运送、接收、保存得标准操作程序试剂准备得标准操作程序，核酸提取 得标准操作程序，Lightcycler使用得标准操作程序，统计学者质量控制得标准操作程序，消耗品 验收质检得标准操作程序。试剂质检得标准操作程序等。相关图表：PCR实验室工作人员一览表，实验室主要负责人简历表，PCR实验室工作人员档案，PCR实验室人员培训计划，仪器设备一览表，仪器设备损坏、故障、修理记录，仪器设备 得报表申请表，仪器维护保养记录，Lightcycler荧光定量扩增仪维护保养记录，恒温金属校准记录，采购申请单，试剂领取验收记录，试剂质检记录，消耗品质检记录，消耗性

8、材料领取验收 记录，标本接收等记表，不合格标本记录，报告单发放接收登记表，特殊报告要求登记表，抱怨 情况登记表，抱怨处理登记表，PCR实验室日常工作核查表，Lightcycler 仪器使用记录，试剂使用记录，PCR实验室室内质量控制失控原因及纠正错施记录，样本处理记录，冰箱温度记录 试剂准备区，冰箱温度记录-样本准备区，环境温度记录-试剂准备区，环境温湿度记录-样本准备区，环境温度记录-PCR扩增区，PCR实验室日常工作核查表，紫外灯使用登记表，温度计校 准记录，PCR实验室平面图等。（2 ）人员管理： 文件要在临床基因扩增实验室工作得实验人员必须经过培训并取得上岗证， 所以在申请实验室验 收

9、前，要至少一名人员参加卫生部检验中心举办得临床基因扩赠实验室上岗培训班并取得上岗 证。同时实验室还应该制定自己得年度培训计划，保证实验室人员能不断得到培训。（3 ）实验方面： 使用经国家药品监督管理批准得允许开展得项目。四、临床基因扩增实验室验收申请 如果以上方面准备就绪后， 就可以进行临床基因扩增实验室验收申请了， 但以本人得经验， 建议 在实验室设计好后， 先请验收专家进入实地瞧一下， 并提出她们得宝贵意见， 以免在验收时因离 要求有差距而成耽误了验收，同时编写好得程序性文件与 SOP 文件也应请才、专家过目，得到 认可后再提交申请，内容包括：1 、基因扩增检验实验室基本情况：（1 ）实验

10、室所属法人单位名称、地址、电话、联系人等。（2 ）实验室人呀情况与职称比例。2 、应提供得资料（1 ）医疗机构职业许可证复印件；拟设基因扩增检验实验室得设置平面图； 实验室主要负责人简历表； 实验室工作人员一览表； 主要仪器设备表； 拟开展得临床基因诊断项目； 实验室相关程序文件与标准操作程序（ SOP ）； 检验报告样单；（2 ）拟设置基因扩增检验实验室医院得医疗卫生资源状况，对临床基因扩增检验得需求情况以 及实验室运行得预测分析；（3）5）6）7）8）9）（4）3 、希望验收时间4 、声明本实验室自愿申请卫生部临床检验中心组织得技术验收， 并愿意承担下列义务： 遵守临床基因 扩增检验实验室

11、管理暂行办法与临床基因诊断实验室工作规范及与关规定；不论能否获得 通过验收，预付验收阶段得全部费用。五、现场技术验收当提交临床基因扩增检验实验室技术验收申请表后， 大约两周时间内 （视具体情况而定） 卫生部 临床检验中心会将临床基因扩增检验实验室收通知传真或邮寄至您处，告知验收工作得具体时 间、专家组成员、验收程序及验收费用等。在验收当天，专家组成员将对实验室布局、 实验室设置及仪器设备配备情况、 实验室表示、 程序 文件标准操作文件得编写、 试验记录等情况进行验收， 同时还会现场让实验室技术人员进行临床 标本得操作， 实验结果得正确与否也就是实验室验收合格得依据之一。 现场提问时专家会对您所

12、 编写得文件进行提问，主要涉及实验室污染、就是内质控、标本得收集及保存等。验收结束后， 专家会填写临床基因扩增检验实验室技术验收报告， 对验收结果进行总结， 提出整改要求与意见。 六、临床基因扩增检验实验室收体会1 、认真学习与领会卫生部颁发得临床基因扩增检验实验室管理暂行办法及其附件临床基 因扩增检验实验室基本设置标准 ，及卫生部临床检验中心发布 临床基因扩增实验室工作规范 得内容，并将以上两个文件得内容落室到自己所编写得程序文件与标准操作程序中。2 、实验室布局设计好后一定要请专家实地进行一下检查，如果条件不具备，也可以将实验室设 计平面图寄给专家， 因为每个实验室都有自己得具体情况， 如

13、果就是新建得实验室可以按照卫生 部临检中心提供得标准实验设计图来设计， 如果就是在老得实验室基础上改造， 就应该多听一些 专家得意见，以免在验收得时候因实验室设计不合理而耽误验收以至延误临床工作得开展。3 、程序性文件与标准操作程序编写时，最主要得就是可操作性要强，尤其就是 SOP 文件，使 用频率很高，与实验室得日常工作密切相关，写得要具体一些， 格式并不就是很重要， 主要就是 让第依次接触该 SOP 得人也能够按其完成相关操作。 同时还要集注， 该文件不就是用来验收得。 而就是给自己实验室人员用得， 要认识到文件对保证检验质量得重要性， 这样在编写时就能更细 化，更具体，更实用。文件得编写

14、就是整个实验室验收工作任务重要得一个环节，也就是验收工 作时检查得重点， 所以在编写文件时要让每一个实验室得人员都参与进来， 对所写得内容、 程序 与要求都要知道，并能遵守执行。在验收得时候， 专家会对您所写得文件内容进行提问，如果一 个实验室操作人员对其应该遵循得管理制度与 SOP 一无所知之甚少，这样对日常检验得质量控 制也就是没有好出得。文件编写好后，建议也请专家过目，得到首背后再提交认可申请。4 、文件编写好后，应该按其执行，做到 “记录您所做得 ”简单得说就就是将常规工作中所做得记 录下来，一般说，需要记录得有临床标本接收中得饿患者个人资料、标本接收日期、标本状态、 唯一编号等；检测

15、前实验室得清洁；检测中实验记录，试剂厂家、批号、检测日期、检测结果、 质控记录及分析、检测人（签字）、仪器运转情况等；检测后实验台面、仪器设备等得消毒与清 洁、紫外线照射等。依次两次得记录并不难， 难得就是持之以恒。 所以许多记录我们多记录我们 可以把做到成表格得形式，记录时在相应得条款上打“"就行了。5 、实验过程严把质量关。我们编写得质量手册得木得得就是规格实验操作整个过程，做到实验过程有章可循， 实验记录有据可查， 保证实验结果得可靠性与准则性。 由于基因扩增技术特殊性， 即使严格按质量手册进行操作，也难免出现错误结果，因此包括试剂空白对照，阴性标本对照、 临界值阳性标本对照等， 分别监测试剂配制与加样过程中就是否存在污染，标本核酸模板提取过程红就是否存在污染，标本检测过程中就是否在假阴性结果与结果就是否准确等。标本来源不足 ，导致检验质量 制定可行得试验6 、工作量少影响质量保证系实施。 严格按临床基因扩增检验实验室技术要