GA9论文蛋白相互作用 转录活性 乳腺癌 组蛋白修饰

1、GA9论文：雌激素受体共调节因子GA9的功能研究【中文摘要】雌激素受体ER是一种核受体类转录因子,主要调节与雌激素有关基因的转录,在乳腺癌的发生发展过程中具有重要作用,是乳腺癌治疗的靶标和预后的指标之一。ER分为ERa和ERp两种,两者在结构和功能上有相似之处,但又不完全相同,都含两个重要的转录激活结构域AF1和AF2。AF1和AF2的有效转录激活作用依赖于与其它蛋白质的相互作用。目前,乳腺癌的内分泌治疗主要是通过降低ER转录活性来实现的,因此ER共调节因子的发现和功能研究对于有效开发治疗乳腺癌的药物具有重大意义。在人类的许多重大疾病包括肿瘤的发生发展过程中,DNA和组蛋白修饰等表观遗传修饰也

2、具有非常重要的作用。多数表观遗传的改变是可逆的,这就为疾病的治疗提供了乐观的前景。其中,组蛋白修饰有丰富的多样性并且在基因表达调控中发挥重要作用,这些修饰可影响组蛋白与DNA的亲和性,进而改变染色质的状态,或者影响转录因子与DNA序列的结合,最终导致下游基因转录激活或抑制。越来越多证据表明,组蛋白修饰与肿瘤的发生发展有关,因此,对组蛋白修饰的进一步研究,对于肿瘤等重大疾病的诊断、防治和预后判断有重要意义,为肿瘤的治疗及相应药物开发研究提供了新的靶标。GA9是一个未.【英文摘要】Estrogen receptor(ER) is a member of a large superfamily of

3、 nuclear receptors that regulate the transcription of estrogen-responsive genes. ER is an effective treatment target as well as a prognostic factor of breast cancer. There are two forms of ER, ERa and ER,which exhibit similar, yet distinct, structural and functional features. Both ERs have two impor

4、tant transcription activation function regions, AF1 and AF2. The effective transactivation of AF1 and AF2 depends on their interaction with other protei.【关键词】GA9 ER 蛋白相互作用 转录活性 乳腺癌 组蛋白修饰【英文关键词】GA9 ER protein interaction transcriptional activity breast cancer histone modification【索购全文】联系Q1：138113721

5、Q2：139938848【目录】雌激素受体共调节因子GA9的功能研究摘要3-4ABSTRACT4-5英文缩写词说明6-10第一部分 前言10-171.1 研究背景10-16 雌激素10 雌激素受体分类及结构域10-11 ER的转录调控机制11-12 ER共调节因子12-13 乳腺癌的治疗13 核心组蛋白修饰13-161.2 研究目的及意义16-17第二部分 GA9在乳腺癌组织细胞中的表达情况17-242.1 实验材料及仪器17-19 细胞株及乳腺癌组织标本切片17 细胞培养试剂17 抗体17 其它分子生物学试剂和化学试剂17 主要实验仪器及试剂盒17-18 主要工作液配方18-192.2 实验

6、方法19-21 细胞培养19-20 Western blot分析20 细胞免疫荧光20 组织免疫20-212.3 实验结果21-23 GA9在乳腺癌细胞系中的表达情况21-22 细胞内源GA9在乳腺癌细胞中的定位22 GA9在乳腺癌患者组织中的表达22-232.4 讨论23-24第三部分 GA9与ER的相互作用及其对ER活性的调节作用24-433.1 实验材料及仪器24-27 引物合成及序列测定24 菌株和细胞系24 质粒24 分子生物学工具酶24 常用试剂盒24-25 细胞培养试剂25 抗体25 其他试剂25 主要实验仪器25 主要工作液配方25-273.2 实验方法27-32 重组质粒的构

7、建27-29 siRNAs表达载体的构建29 哺乳动物细胞的转染29-30 Western blot分析(同前)30 GST融合蛋白在大肠杆菌DH5中的表达鉴定30 GST融合蛋白的纯化30 GST沉淀(pull down)分析30 免疫共沉淀30-31 荧光素酶和-半乳糖苷酶活性测定31 转录激活活性检测31-32 RNA的提取32 实时定量PCR(Real-time PCR)323.3 实验结果32-41 GST-GA9八个缺失突变体的表达鉴定32 GST-pull down实验验证GA9与ER和ER存在体外相互作用32-33 GST-pull down实验确定GA9与ER体外相互作用的区

8、域33 免疫共沉淀实验验证GA9与ER和ER在体内的相互作用33-34 雌激素(E2)对GA9与ER和ER在体内相互作用的影响34 与GA9相互作用的ER和ER区域的定位34-35 内源性免疫共沉淀实验验证GA9与ER在体内的相互作用35-36 过表达GA9能抑制ER的转录活性36-37 GA9对ER转录活性的抑制存在剂量效应37 过表达GA9能抑制ER或ER的转录活性37-38 GA9降低ERE报告基因的活性依赖于ER38-39 GA9 siRNAs的表达鉴定39 敲低GA9升高ER的转录活性39-40 GA9对ER下游基因表达的影响40-413.4 讨论41-43第四部分 GA9与核心组蛋白修饰43-474.1 实验材料及仪器434.2 实验方法434.3 实验结果43-