HPLC法测定复方抗病毒口服液中绿原酸的含量3200字

1、HPLC法测定复方抗病毒口服液中绿原酸的含量3200字 【摘要】 目的 建立HPLC法测定复方抗病毒口服液中绿原酸含量的方法。方法 采用Shim-pack VP-ODS C18反相色谱柱(4.6 mm250 mm,5 m),以乙腈-0.2%磷酸(1288)为流动相;流速为1.0 mL/min;检测波长：327 nm;柱温：30 。结果 绿原酸在0.0510.922 g范围内线性关系 【摘要】 目的 建立HPLC法测定复方抗病毒口服液中绿原酸含量的方法。方法 采用Shim-pack VP-ODS C18反相色谱柱(4.6 mm250 mm,5 m),以乙腈-0.2%磷酸(1288)为流动相;流速

2、为1.0 mL/min;检测波长：327 nm;柱温：30 。结果 绿原酸在0.0510.922 g范围内线性关系良好(r=0.999 9,n=6),平均回收率为99.04%,RSD=1.31%(n=6)。结论 该方法准确、重复性好、简便易行,可作为复方抗病毒口服液的质量控制方法。 【关键词】 复方抗病毒口服液;绿原酸;高效液相色谱法;含量测定 Abstract：Objective To establish a method for detecting chlorogenic acid in compound oral liquid of Kangbingdu with HPLC. Metho

3、ds The chromatographic column of Shim-pack VP-ODS C18 (4.6 mm250 mm, 5 m) was used, the mobile phase was consisted of acetonitrile-0.2% phosphoric acid aqueous solution (1288). The flow rate was 1.0 mL/min, the detective wavelength was 327 nm and column temperature was 30 . Results The linear range

4、of the method was 0.0510.922 g (r=0.999 9, n=6), the average recovery was 99.04%, RSD was 1.31% (n=6). Conclusion The method is accurate, reproducible, simple and easy to do, which can be used in quality control of compound oral liquid of Kangbingdu. Key words：compound oral liquid of Kangbingdu;chlo

5、rogenic acid;HPLC;content determination 复方抗病毒口服液为医院制剂,是由金银花、射干、蒲公英、大青叶、柴胡、佩兰、板蓝根等药材制成的中药复方制剂,具有清热解毒、祛湿、凉血的功效,临床上用于治疗流行性感冒、上呼吸道感染、流行性腮腺炎、急性淋巴结炎、带状疱疹和急性病毒性肝炎、急性黄疸性肝炎等。方中金银花为主药,绿原酸为其主要活性成分之一1。本试验参考文献2,建立高效液相色谱(HPLC)法测定复方抗病毒口服液中绿原酸的含量,用于其质量控制。 1 仪器与试药 LC-2010A HT高效液相色谱仪(日本岛津公司);日本岛津UV-1601紫外分光光度计;KQ-300

6、型超声波清洗器(江苏昆山市超声仪器有限公司)。绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所,供含量测定用,批号110753-200413);复方抗病毒口服液(广西A县人民医院生产)。乙腈为色谱纯,磷酸为色谱纯,水为超纯水。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱：岛津Shim-pack VP-ODS C18(4.6 mm250 mm,5 m);流动相：乙腈-0.2%磷酸(1288);检测波长：327 nm;流速：1.0 mL/min;柱温：30 ;进样量：10 L。 2.2 对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品10.25 mg,置100 mL棕色量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得0.

7、102 5 mg/mL对照品储备溶液。精密量取5 mL置10 mL棕色量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。 2.3 供试品溶液的制备 精密量取复方抗病毒口服液样品3 mL,置50 mL棕色量瓶中,加50%甲醇溶液至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45 m)滤过,取续滤液,即得。 2.4 阴性供试品溶液的制备 取复方抗病毒口服液中处方药材,按制备工艺制成缺金银花的阴性供试品,再按供试品溶液的制备方法制成阴性供试品溶液。 2.5 系统适用性试验 分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性供试品溶液各10 L,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定,记录色谱图,结果见图1。结果显示,阴性供试品的色谱图在

8、绿原酸保留时间的相应位置上无峰出现,表明此方法专属性强,阴性对照无干扰。 2.6 线性关系考察 精密吸?.2”项下对照品储备溶液0.5、1、3、5、7、9 mL,分别置10 mL棕色量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀。分取上述不同浓度对照品溶液10 L注入液相色谱仪,记录峰面积。以进样量为横坐标,色谱峰面 2.6 线性关系考察精密吸取“2.2”项下对照品储备溶液0.5、1、3、5、7、9 mL,分别置10 mL棕色量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀。分取上述不同浓度对照品溶液10 L注入液相色谱仪,记录峰面积。以进样量为横坐标,色谱峰面积为纵坐标,进行线性回归,回归方程为：Y=5.12106X+7

9、.63103,r=0.999 9(n=6)。结果表明,绿原酸进样量在0.0510.922 g范围内与峰面积呈良好的线性关系。 2.7 精密度试验 精密吸取对照品溶液10 L,重复进样6次,测定绿原酸峰面积,结果RSD=0.32%,表明仪器精密度良好。 2.8 稳定性试验 取供试品溶液(批号051025),按上述色谱条件,分别于0、2、4、6、8、10 h进样1次,记录色谱峰面积,RSD=1.46%。表明供试品溶液在10 h内稳定。 2.9 重复性试验 取同一批号样品(批号051025),按供试品溶液的制备方法制备6份供试品溶液,分别测定,计算绿原酸含量,其平均含量为0.736 mg/mL,RS

10、D=0.89%(n=6)。表明方法重复性良好。 2.10 加样回收率试验 精密量取已知含量的供试品(批号051025,绿原酸含量为0.736 mg/mL)溶液1.5 mL(共6份),分别精密加入一定量的绿原酸对照品,照“2.3”项下方法操作,测定并计算回收率。结果绿原酸平均回收率为99.04%,RSD=1.31%,结果见表1。表1 加样回收率试验结果 2.11 样品测定 取3批样品,分别按“2.3”项下的方法处理,取10 L注入液相色谱仪,记录色谱图,另取对照品溶液同法测定,按外标法以峰面积计算样品中绿原酸的含量。结果见表2。表2 绿原酸含量测定结果 3 讨论 金银花味甘性寒,具有清热解毒的功效,为复方抗病毒口服液中君药。绿原酸为金银花中的主要有效成分之一,具有抗菌、抗病毒的生物活性。选择金银花中的绿原酸作为含量测定指标,可反映和控制本制剂的内在质量。 试验中对复方抗病毒口服液提取溶剂进行了研究,分别以70%乙醇、50%甲醇、甲醇作为提取溶剂,制备供试品溶液。结果表明,以50%甲醇作为提取溶剂时样品中绿原酸含量最高,因此选用5O%甲醇为提取溶剂。绿原酸对照品溶液在自然光下稳定性较差,易产生分解,因此操作中应注意闭光,采用棕色量瓶。 取绿原酸对照品溶液在200400 nm波长范围内扫描,结果显示在327 nm波长处有最大吸