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文档简介
线粒体膜势能的检测 4. JC-1单体的最大激发波长为514nm,最大发射波长为529nm;JC-1聚 合物(J-aggregates的最大激发波长为585nm,最大发射波长为 590nm。实际观察时,使用常规的观察红色荧光和绿色荧光的设置即 可。通常可以CCCP作为诱导线粒体膜电位下降的阳性对照。 5. 线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。通过JC-1 从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下 降,同时也可以用JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡 早期的一个检测指标。 实验步骤及注意事项 1. 实验方法 将正常培养的细胞和诱导凋亡的细胞加入使用终浓度为 Rhodamine 123(1mM或终浓度为DiOC6(25nM,JC-1(1mM, TMRM(100nM,37°C平衡30min,流式细胞计检测细胞的荧 光强度。 2. 注意事项 始终保持平衡染液中pH值的一致性,因为pH值的变化将影响 膜电位。 与染料达到平衡的细胞悬液中如果含有蛋白,他们将与部分 染料结合,降低染料的浓度,引起假去极化。
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