桑树根皮的药性成分分析以及提取方法

1、学号：班级：HUBEI UNIVERSITY FOR NATIONALITIES学士学位论文论文题目：桑树根皮的药性成分分析以及提取方法院系：专业：姓名：学号：指导教师：日期： 年 月 日Std.ID: Secret:某 某 NATIONALTIESSynthesis of Benzotrizole and Its Alkyl Derivatives School (department) : Subject:Name: Directed by: XXXXX (Teacher)Date: 郑重声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在老师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引

2、用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本论文的所有研究成果所有权归指导老师，他可以将本论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本论文。未经指导老师同意，本人或他人都无权使用文中的成果本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。特此声明学生签名年 月 日 桑白皮的药性成分分析以及提取方法摘要桑白皮为桑科植物桑MorusalbaL的干燥根皮，系中国药典2005年版收载的常用中药，其性味甘寒, 入肺经、脾经, 有泻肺平喘, 利水消肿之功效, 主要用于肺热咳喘,

3、水肿胀满尿少, 面目肌肤浮肿。古时候是作为经济林木被广泛种植，用来养蚕抽丝制衣等。随着社会大发展人们有发现它的根皮可以治疗一些病症，因此就更加重视桑树的种植。到现在为止世界各地都或多或少的种植了桑树，主要种植大国有印度、日本、巴西、意大利以及保加利亚等。由此可见它从热带、亚热带、温带到冷温带都广泛分布。本课题主要讨论桑白皮的有效药性成分及其有效成分的提取方法和工艺以及黄酮的测定。关键词： 桑根皮 脱氧野尻霉素 水提取 醇提取 黄酮MorusalbaL velamen of Medicinal Composition Analysis and Extraction MethodABSTRACT

4、MorusalbaL velamen is Root dry skin for Moraceae MorusalbaL，Department of Chinese pharmacopoeia 2005 edition contains commonly used traditional Chinese medicine (TCM)，Their sexual flavour gan cold， into the lung、 spleen、 have purging lung、the effect of water swelling。Mainly used for water hot cough

5、asthma、lung swelling filled with urine、 less facial skin dropsy、In ancient times as economic trees have been extensively cultivated，To sericulture reel off raw silk from cocoons clothing etc。Along with the social development， people have found the root bark can treat some diseases。 so they pay more

6、attention to the mulberry planting。So far all over the world are more or less planted mulberry， the main planting large state-owned India、 Japan、 Brazil、 Italy and Bulgaria。Thus it from tropical、 subtropical、temperate to cold temperate zone are widely distributed。 This topic mainly discuss SangShuGe

7、n skin effective medicinal composition and its method and process of extracting effective components。 Key words: MorusalbaL 1-Deoxynojirimycin Water Extract Alcohol Extract Flavonoids 目录一、绪论11 前言12 文献综述1 3 桑白皮提取物中药化学成分1 4 桑提取物中的活性成分.2 4.1生物碱.2 4.2黄酮和多糖.2 4.3其他.2 5桑白皮提取物的作用3 5 .1 桑根提取物的酪氨酸酶抑制活性.3 5.

8、2 降低血糖的作用.3 5.3 利尿作用.3 5.4 对艾滋病病毒HIV的抵抗作用.3 5.5 镇咳平喘作用.4 5.6 抗炎作用.5二、 实验部分51提取5 1.1水提取法5 1.2醇提取法52.实验. 6 2.1实验药品.6 2.2实验仪器.6 3 实验过程.6 3.1实验处理.6 3.1.1药材处理.6 3.1.2水溶液提取法.6 3.1.3醇溶液提取法.6 3.2部分药品的制备.7 4 测定过程.7 4.1紫外-可见分光光度法.8 4.2显色法实验过程.8 4.3实验数据.10 4.4注意事项.12 5.其他成分大概分析.12三、 结论13附图14参考文献17致谢2117一、 绪论1

9、前言 桑树古来就受人们喜爱，在古时候是作为经济林木被广泛种植，用来养蚕抽丝制衣等。随着社会大发展人们有发现它的根皮可以治疗一些病症，因此就更加重视桑树的种植。到现在为止世界各地都或多或少的种植了桑树，主要种植大国有印度、日本、巴西、意大利以及保加利亚等。由此可见它从热带、亚热带、温带到冷温带都广泛分布。2 文献综述 桑白皮为桑科植物桑MorusalbaL的干燥根皮，其作为药物使用，在古书中已有记载。在别录中曾经记载道:“去肺中水皮，硾血，热渴，水肿，腹满肿胀，利水道，可以缝金疮”。本草述钩元中记载道：“利水用生，咳嗽蜜炙或炒”。本草备要记载着：“如恐真泄气，剧蜜炙”。得配本草：”疏散风热用生，

10、入补肺药蜜水炒拌”。又本草图经记载: “桑皮汁主小儿口疮、敷之，涂金刃所伤燥痛，更剥得桑皮裹之，令汁得入疮中。”可见其作为常用中药，性味甘寒, 入肺经、脾经, 有泻肺平喘, 利水消肿之功效, 主要用于肺热咳喘, 水肿胀满尿少, 面目肌肤浮肿等。（-金玲;居明乔 桑白皮历代炮制沿革与功效 2000(02)）。3桑白皮提取物中药化学成分1 经各种文献资料显示。桑白皮中主要含黄酮类成分：桑素（muberrin），桑根皮素（morusin），桑皮色烯素（mulberrochromene），环桑素（cyclomulberrin），环染色烯（cyclomulberrochromene），环桑皮素(cycl

11、omorusin),化合物（compound）A，氧化二氢桑根皮素（oxydi-hydromorusin，桑黄酮（kuwanon）A、B、C、D、 E、 F、G（即albanin F，moracenin B）、H（即albanin G，moracenin A）、I、K、L、Y、Z、桑白皮素（moracenin）C、D，桑根酮（sanggenone）A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K、L、M、N、O、P。又含桑色呋喃（mulberrofuran)A、B、C、K、 N、O、M、P、Q，伞形花内酯（umbelliferone），东莨菪素（scopoletin），桑糖朊（moran）A及具降压

12、作用的乙酰胆碱类似物成分。4桑提取物中的活性成分的探讨4.1生物碱220世纪70年代后，世界各国的研究者相继从桑白皮和桑叶中分离出 -脱氧野尻霉素（DNJ）。DNJ是一种哌啶生物碱，占桑树亚氨基糖的50%。 除了DNJ之外，学者们还从桑叶中分离出了DNJ的衍生物N-ME-DNJ(N-甲基-1-DNJ)、，-双脱氧- 以及具有较强降糖作用的 Fagomine(荞麦碱)等3。 研究显示，DNJ可以抑制糖尿病小鼠肠道葡萄糖吸收，并且通过调节葡萄糖转运系统以及糖酵解和糖异生的酶，直接促进肝中葡萄糖的代谢，达到降低血糖的目的4。DNJ 及其衍生物除了具有众所周知的 -葡萄糖苷酶抑制性外，还可以改善脂肪组

13、织对胰岛素的敏感性以及上调葡萄糖转运体（GLUT4）5。4.2黄酮和多糖6桑树中的总黄酮包括芦丁、槲皮素、二氢山萘等黄酮类化合物及其衍生物。 Wang等7在黑桑树皮中分离出3个新化合物，包括2个黄酮类，1个2-苯基香豆素。 桑叶提取物中除了含有生物碱和黄酮类以外，还有多糖类。 Guo 等8的研究结果表明，桑枝多糖组、二甲双胍组与对照组相比，均可以显著降低小鼠的空腹血糖水平，并增加空腹血清胰岛素水平、恢复体质量重；桑枝多糖组的疗效优于二甲双胍组。 玄光善等9发现，桑叶多糖、黄酮、生物碱成分均可显著降低糖尿病小鼠的血糖，并改善脂代谢异常，其中桑叶多糖和黄酮的降糖作用明显差于生物碱。4.3其他除酚类

14、物质及生物碱外，桑树中尚含植物源性的蜕皮激素、三萜类化合物、氨基酸和肽类等。 陈秋等 10研究显示，蜕皮甾酮在胰岛素抵抗HepG2细胞(来源于一个15岁白人的肝癌组织。该细胞分泌多种血浆蛋白：清蛋白、2-巨球蛋白、血纤维蛋白溶酶原、铁传递蛋白等)模型中能提高胰岛素介导的葡萄糖摄取和利用能力，即增加胰岛素的敏感性，也能明显改善糖代谢。5.桑根皮提取物的作用的探讨5 .1 桑根提取物的酪氨酸酶抑制活性张晶11等人研究了桑树根皮对人的美白的作用 ，最终的研究结果显示 ：桑树根皮的水提取物可以有效的抑制蘑菇酶酪氨酸以及单酚酶 、二酚酶的能力。它的效率是等量维生素C的0.85倍和1.68倍12，而且桑树

15、根皮提取物对酪氨酸酶的抑制作用是曲酸的十倍多。其安全性自古以来就被大众所认可。在开发美白产品方面有很大的前景。5. 2 降低血糖的作用(可治疗糖尿病)桑白皮提取物对链脲霉素所致血糖升高及葡萄糖性高血糖都有较好的降血糖作用，其降糖部位主要由含氮杂环糖类组成13。继70年代从桑白皮分离出morano1ine，并证实它有降血糖作用之后，又有人从桑白皮分离出降血糖物质moran A，它是一种糖蛋白，分子量约7.5x103，蛋白部分占57.4%。实验证实moran A对四氧嘧啶诱发的高血糖小鼠有剂量依赖的降血糖效果，若以高血糖组的相对血糖水平为100%，分别给予moranA 3、10、30mg/kg，7

16、h后血糖水平分别降为61%、38%、34%，24h后分别为77%、66%、49%16。腾德义等研究发现，复方桑白皮浓缩液大（30g/kg）、中（15g/kg）剂量组对四氧嘧啶所致小鼠糖尿病有明显降糖作用，对葡萄糖性高血糖有一定降糖作用14。5.3 利尿作用佐滕昭彦等研究了桑白皮煎剂灌胃兔，桑白皮水提物或正丁醇提取物对大鼠灌胃或腹腔注射，均有利尿作用，尿量及钠、钾离子和氯化物排出量均有增加15。孙静云等研究认为，东茛菪内酯为桑白皮利尿的有效成分。张文娟等比较了桑白皮去粗皮前后利尿作用及毒性的大小，研究表明，8.4g/kg桑白皮未除粗皮、除粗皮水煎剂均能显著增加兔子的尿量，桑白皮去粗皮前后对利尿作

17、用无明显影响，除粗皮的毒性大于未除粗皮者16。5.4 对艾滋病病毒HIV的抵抗作用据报道：经研究证实，桑根皮具有较强的抗艾滋病病毒活性，它含有的Morusin（桑根皮素）和Kuwanon（桑黄酮）是抗艾滋病病毒的活性成分。DNJ是主要的抗艾滋物质。DNJ对艾滋病病毒HIV的活性具有比较显著的抑制作用。其作用机理是：艾滋病病毒HIV借助被膜糖蛋白gpl20（外膜糖蛋白）与CD4+细胞（即CD4+T淋巴细胞，是免疫反应的中心细胞，在人体免疫反应中发挥着非常重要的功能）溶聚结合，从而干扰了gpl20（外膜糖蛋白）N一侧链多聚糖结构的合成过程，合胞体因为受到干扰作用而不能正常形成，从而阻断了gp120

18、与CD4+细胞之间的正常结合，通过对其主要机理进行整理，发现被膜糖蛋白和CD4+表面受体对病毒的穿透性、合胞体的形成和病毒的扩散起着决定性的作用17。DNJ可以抑制a-葡萄糖苷酶在机体的表达活性，继而改变HIV病毒的gpl20糖基化，使其葡萄糖在转录过程中，修饰作用被抑制，即gpl20与CD4+的结合被阻断，改变HIV在CD4+培养细胞中的感染力，使HIV病毒的活性抑制，不能表达，从而达到抗艾滋病病毒作用。5体外实验证明了，1-脱氧野尻霉素为2.0mmol/L时，HIV对C8166细胞株的感染力可由10降至10以下。由此可见，对艾滋病病毒有良好的抵制作用，效果非常明显18。脱氧野尻霉素19 英

19、文名称:1-Deoxynojirimycin，简称1-DNJ、DNJ  化学名称: (2R,3R,4R,5S)-2-羟甲基哌啶-3,4,5-三醇其化学结构式为： 5.5 镇咳平喘作用 近代药理学研究证明，桑树根皮的水或甲醇提取物具有祛痰、平喘等作用20。近年来又有文献报道，桑白皮的氯仿及碱的提取物也具有明显的镇咳、祛痰、平喘作用21。其功效与其原植物桑根皮煎煮汤剂治疗肺热咳嗽的功能大致相同。由于桑白皮的化学成分种类较多，既有常见的黄酮类、生物碱类、香豆素类等，也有比较少见的二苯乙烯类 22。但是其镇咳、平喘、祛痰的主要药效成分尚未见明确的相关研究报道。为此，我们在体内药物化学研究思路

20、的指导下，用桑白皮水提物等分别对对小鼠进行灌胃实验，经过实验结果研究后发现，桑皮苷的效果非常明显，说明其具有较强的镇咳作用和一定程度的平喘作用，但未见有明显的祛痰作用。由实验结果数据显示可以认为桑皮苷可能是桑白皮治疗肺热咳嗽的主要药效成分之一。5.6 抗炎作用23通过一系列的研究性体外试验表明，桑树根皮的碱提取物对于动物体内二甲苯所引起的鼠耳肿胀的抑制作用比较明显, 说明碱提取物有一定的抗炎作用。科学家们对于成分进行了分析，发现这是因为桑皮根素C、J、L和桑根酮A、B、C、D对金葡菌和枯草杆菌有一定的抗菌活性，抑制了菌体的生长繁殖，从而达到了抗炎抗菌效果。另外桑黄酮J、L和桑根酮A、B、C对类

21、链球菌及桑皮根素，桑黄酮C、L、A对耻垢分支杆菌分别具有一定的抗菌活性，都能显著的抑制其成长过程。抗菌抗炎效果十分明显。由此可见，桑树根皮有一定的抗炎作用二、实验部分1.提取1.1水溶液提取法将新鲜桑树根皮泥土洗净，切大小均匀的丝状，放入烘干箱内干燥，干燥好后放入罐子内，加入一定量的水，浸泡一段时间后加热煎煮。待有效成分充分提取出来，将水提取物冷却至室温，过滤，浓缩，得到水提取物，重复加蒸馏水浸煮三次。1.2醇提取法称取25.0g桑树皮，用量筒量取500ml的乙醇溶液，放入三口烧瓶中，侵泡过夜后进行恒温蒸煮，待有效成分提取出来，停止加热，冷却至室温后倒出，过滤浓缩，得醇提取物，重复浸煮三次2.

22、 实验2.1实验药品 桑树根皮、蒸馏水、芦丁标准品、酒精、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、三氯化铝、滤纸、清洁试纸、2.2实验仪器 恒温加热锅、500ml三颈烧瓶、25ml容量瓶、分液漏斗、量筒3 实验过程3.1实验前处理3.1.1实验前处理：将市场买来的桑树根皮洗净，自然风干，然后切丝，切成大小均匀相同的丝状。将切好的桑白皮丝放入烤箱内，70条件下干燥，大约10分钟后面取出！并准备好两个500ml的三颈烧瓶3.1.2水溶液提取法的过程称取30.0g桑白皮，放入颈口烧瓶内。使用量筒量取450ml蒸馏水，倒入装有桑根皮的烧杯中，封口浸泡一天。令药材与水充分浸湿渗透。第二天将三颈烧杯固定好在架子上，用

23、橡胶塞将左右口封住，在三颈烧杯的中口上放上冷凝回流管，用橡胶管把冷凝管的进水口出连接冷水，出水口处连接至排水槽内。然后用恒温加热锅进行加热。加热6小时，停止加热，将浸煮液冷却倒入标号，继续加450ml蒸馏水进行浸煮，6小时后停止加热，冷却后倒出标号。再次加450ml蒸馏水浸煮，同样加热6小时，冷却后倒出标号。3.1.3醇溶液提取法的过程称取30.0g桑白皮，放入三颈烧瓶内，使用量筒量取450ml70%的乙醇溶液，倒入三颈烧瓶中，封口浸泡一天，使药材与酒精溶液充分浸湿渗透。第二天将三颈烧杯固定好在架子上。用橡胶塞将左右口封住，在三颈烧杯的中口上放上冷凝回流管，用橡胶管把冷凝管的进水口出连接冷水，

24、出水口处连接至排水槽内。然后用恒温加热锅进行加热。加热六小时左右，加热时间长使药材中的成分充分溶液在酒精溶液中，停止加热，继续冷凝回流，防止酒精挥发，影响实验的准确性。待冷却至室温，将浸煮液倒出，用装有滤纸的分液漏斗过滤浸煮液，标号。在浸煮过的药材烧瓶中继续添加450ml70%的乙醇溶液继续浸煮6小时，浸煮充分后，停止加热，继续冷凝回流，冷至室温。倒出过滤，标号。再次加入450ml的乙醇溶液，浸煮6小时，充分浸煮后，停止加热，冷凝回流至室温，倒出过滤，标号。3.2部分药品的制备30%乙醇溶液：量取实验室的70%乙醇溶液30ml倒入烧杯中，加蒸馏水70ml5%亚硝酸钠溶液：精密称取亚硝酸钠5g，

25、溶于95ml的蒸馏水中,即得10%硝酸铝溶液：称取2g硝酸铝固体，溶于18ml蒸馏水中10%氢氧化钠溶液：精密称取10g氢氧化钠，溶于90ml蒸馏水中4、测定根据文献资料显示，桑白皮中含有黄酮类化合物， 黄酮类化合物(Flavonoids)是许多中草药的有效成分，具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎和免疫调节、抗病毒、解毒护肝和细胞保护、抗菌等多种生物活性，在近年来国内和国外的研究学者对此化合物作用极其重视。在最近十年的研究中，对黄酮类化合物的研究偏向于对他的药用价值的开发，更多的是涉及提取分离纯化方法的应用研究、含量的测定及制剂研究等。黄酮类化合物的定量方法最常用的有HPLC法以及紫外分光光度法，然而在

26、实际生产和科研过程中，对于黄酮单体的定量常采用HPLC法，此方法比较适用于实验研究方向。而对总黄酮的测定，考虑到方法的简便、快捷以及可行性，多采用在碱性介质中加铝盐显色的紫外可见分光光度法14.1紫外-可见分光光度法2：NaNO2-Al(NO3)-NaOH显色法取1ml样品溶液置于10ml的比色皿中，用30%乙醇补充至5ml，加入0.3ml 5%NaNO2溶液，摇匀，放置5min后，加入0.3ml 10%的Al(NO3)溶液，摇匀，放置7min后加入2ml 1mol/L NaOH溶液，并用30%乙醇溶液定容至刻度，摇匀，放置10min,510nm波长处用分光光度计比色法测定。 芦丁为标准物质（

27、标准溶液为:0.0250g芦丁以95%乙醇溶解定容50ml），分别取芦丁标准溶液0.25、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00ml置于10ml的比色皿中定容，同时以不加标准溶液作为空白对照。NaNO2-Al(NO3)显色在波长在510nm出测定吸光度，以溶度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线（如图）。用最小二乘法进行线性拟合，得芦丁浓度C与吸光度A的关系式。4.2显色法实验过程： 仪器与试药：紫外可见分光光度计，芦丁对照品，桑白皮提取物，4.2.1 溶液的制备4.2.2对照品溶液的制备:精密称取120干燥至恒重的芦丁对照品20mg，置100ml量瓶中，加乙醇适

28、量，超声溶解，冷却后加乙醇至刻度，摇匀，即得(每1ml中含无水芦丁0.2mg） 4.2.3供试品溶液的制备水提取法浸煮液的测定液制备：分别取三组不同批次过滤与未过滤的浸煮的桑白皮提取液5ml，置于25ml容量瓶中，加入5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀后加10%硝酸铝溶液1ml。摇匀，加10%氢氧化钠试液10ml，加蒸馏水至刻度; 放置备用醇提取法浸煮液的测定液制备：分别取三组不同批次过滤与非过滤的浸煮桑白皮提取液5ml，置于25ml容量瓶中.加入5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀后加10%硝酸铝溶液1ml。摇匀，加10%氢氧化钠试液10ml，加30%的乙醇溶液至刻度; 放置备用4.2.3 标准

29、曲线的绘制3分别精密吸取对照品溶液1、2、3、4、5、6ml置25ml量瓶中，加水至6ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6min;加10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6min;加入氢氧化钠溶液10ml后再加水至刻度，摇匀，放置15min。以相应试剂为空白，在400-760nm扫描，芦丁对照品在510nm处有最大吸收。将上述溶液在波长510nm 处测定吸光度，以取样浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得芦丁浓度C与吸光度A的关系式为：C=0.0685A-0.0023mg/ml，r=0.997；吸光度值在0.10.7A的范围内呈较好的线性关系。图1，标准曲线的绘制4.&#

30、160;2.4  稳定性试验 精密吸取对照品溶液2.0ml、供试品溶液1.0ml依法显色后放置10、20，30，40，50，60min，测定吸光度。 4.2.5  样品含量的测定 在510nm波长下测定样品吸光度，代入回归方程，计算的样品中总黄酮的含量4.3.实验数据4.3.1水溶液浸煮液 组数测量物 1 2 3 4 5 平均值样品10.5110.4970.4890.4870.4880.4944样品20.6000.5830.5750.5770.5720.5814样品1：过滤的浸煮液 样品2：未过滤的浸煮液第组浸煮液 组数测量物 1 2 3 4

31、5 平均值样品1 0.3500.3480.3430.3220.3200.337样品20.3830.3790.3790.3710.3710.376第组浸煮液 组数测量物 1 2 3 4 5 平均值样品1 0.1790.1790.1750.1740.1720.1758样品20.2010.2000.2010.1980.1990.1998第组浸煮液 组数测量物 1 2 3 4 5 平均值样品1 0.8270.8300.8300.8300.8290.8292样品20.9710.9780.9860.9850.9740.97884.3.2醇溶液浸煮液第次浸煮液第次浸煮液 组数测量物 12345样品10.3520.3500