发酵饲料生产工艺与应用培训资料

1、1 / 40灵璧县立腾同创农牧科技有限责任公司二0一二年一月2 / 40目录安徽省立腾同创农牧科技有限公司 简介 安徽省立腾同创农牧科技有限公司 企业文化 安徽省立腾同创农牧科技有限公司的十年发展战略 安徽省立腾同创农牧科技有限公司的第一个发展五年 发展计划第一章 发酵饲料生产的菌种及发酵工艺第二章 发酵饲料生产技术3 / 40第一章发酵饲料生产的菌种及发酵工艺第一节概述一、 发酵饲料的定义发酵饲料的定义是：在人为可控制的条件下，以植物性农 畐庐品为主要原料，通过微生物的代谢作用，降解部分多糖、 蛋白质和脂肪等大分子物质，生成有机酸、可溶性多肽等小 分子物质，形成营养丰富、适口性好、活菌含量高

2、的生物饲 料或饲料原料。采用发酵技术生产的动物饲料或饲料原料，其特性主要是：(1) 含有大量的活性微生物；(2) 多数以厌氧发酵方式进行生产；(3) 未经干燥的物料含水量通常在 30%以上；(4) 物料的酸性物质明显增加，营养组成更合理；(5) 生产原料以植物性农副产品为主。也有发酵成品是经过干燥处理的， 比较典型的有发酵豆粕和发 酵棉粕。在发酵过程中有大量的活性乳酸菌和酵母菌发生的代谢 作用，经过干燥以后，乳酸菌基本都失活了，但是它们也属于发 酵饲料。二、 发酵饲料的概述发酵饲料的生产工艺基本都是以固态发酵的方式进行的，生产菌种以乳酸菌、芽抱杆菌和酵母菌为主，绝大多数采用厌氧或兼性 厌氧发酵

3、。 发酵物料的含水量为 30%50%， 发酵时间和温度受 环境影响很大，基本不进行人为控制和调节。在实际生产中也有采用好氧发酵方式进行的， 生产菌种以霉菌和 假丝酵母为主， 生产用的蛋白原料主要是一些乳酸菌和酵母菌难 以降解的杂粕和胶质蛋白。 但是生产设备复杂， 物4 / 40料温度和湿度 变化很大， 控制及其困难。 成品主要是作为饲料蛋白原料的替代 物，能降低饲料生产成本，但基本不具备生物学活性和功能。本节主要论述厌氧固态发酵工艺，常规的发酵饲料生产流程如： 原料f消毒f冷却接种f培养f干燥f包装 工业化规模的微生物发酵过程基本上都是纯培养过程， 原料需要 消毒，空气需要过滤等。 这些操作都

4、是为了确保在发酵产品生产 和储存过程中不受杂菌的侵袭和干扰， 但也正是这些常规操作使 产品的生产成本居高不下， 影响了微生物发酵产品在动物饲养中 的大剂量使用。 大量试验证明，在不考虑动物饲养成本的前提下，大剂量（在配 合饲料中添加 5.0%以上）使用高活菌含量的微生物发酵饲料可 以明显改善动物的生产性能， 提高动物的健康水平， 甚至可以进 行无抗生素饲养。 但是采用传统的生产工艺获得的高活菌产品其 生产成本通常都在 10 元/kg 以上，如果以 10%的比例使用在配合 饲料中， 每吨配合饲料的成本至少需要增加 800 元，这个增加值 对传统的畜禽养殖业来说是难以接受的。 降低发酵饲料生产成本

5、 最直接的方式就是简化生产工艺， 其中原料的蒸煮、 消毒和干燥 是最耗能的操作过程， 是导致生产成本增加的主要步骤， 也是导 致生产设备投资增加的主要原因。如能简化生产操作工艺步骤，同时又能保证产品质量的安全稳定， 就能使发酵饲料的生产和应 用具备强大的市场竞争力。第二节 发酵饲料的生产菌种发酵饲料的生产菌种很多，主要有：乳酸菌、芽孢杆菌、酵母菌 和霉菌。一、 乳 酸 菌5 / 40目前生产中使用的乳酸菌至少有 30 多种。按乳酸菌的代谢途径， 大致可归纳为四种类型：同型乳酸发酵、专性异型乳酸发酵、兼 性乳酸发酵和双歧杆菌异型乳酸发酵。（一）同型乳酸发酵C6H12O6-2CHCH（0H）C00

6、H一分子葡萄糖分解成两分子乳酸，整个过程不产气，发酵转化 理想，产物最合适，效率最高。典型的生产菌种主要有：德氏乳 酸杆菌、嗜酸乳杆菌、唾液乳杆菌、嗜热乳杆菌、粪肠球菌、乳 酸乳球菌。（二）专性异型乳酸发酵C6H12O6- CHCH（OH）COOH+CJOOH+C0一分子葡萄糖转化成一分子乳酸和一分子乙酸， 另外还释放一分子二氧化碳。 相比同型乳酸发酵， 这种发酵的转化效率要 低得多，而且还有产气损失。典型的生产菌种主要有 : 发酵乳杆 菌、高加索酸奶杆菌、短乳杆菌、巴氏乳杆菌。（三）兼性乳酸发酵兼性乳酸发酵能同时进行同型乳酸发酵和异型乳酸发酵， 这 两种代谢进行的程度和比例取决于菌种的性质和

7、外界培养条件。典型的生产菌种有：植物乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖杆菌、清 酒乳杆菌。(四)双歧杆菌异型乳酸发酵2C6H2Q- 2CHCH(OH)COOH+3OOH6 / 40比较典型的生产用菌种是动物双歧杆菌。双歧杆菌的培 养要求很严格，对厌氧要求极高，目前还很难在实际生产中 应用。 乳酸菌分布广、种类多，有杆状和球形两大类。有单个、成 对和链状排列的，基本上都是厌氧菌或微需氧菌。在饲料青 储、发酵开始时就繁殖，到饲料因密封缺氧后仍然能繁殖， 只是增殖的速度慢一些，而乳酸的生成速度却快一些。 乳酸菌能分解饲料原料中的糖，形成乳酸。乳酸能提高饲料 的营养价值和适口性，同时还能抑制大肠杆菌和沙门氏菌

8、等 有害微生物的生长代谢，使饲料产品能长期保存。在饲料青 储和发酵的过程中， 同型和异型乳酸发酵同时存在， 产物除 乳酸外还有少量乙醇和 CO2。二、 芽 孢 菌 目前在生产中应用的芽孢菌有近十种， 以杆菌为主， 主要为以下 三种：地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌。芽孢杆菌 能耐受高温，在有氧和无氧条件下都能存活。在营养缺乏、干旱 等条件下形成芽孢， 在条件适应时又可以重新萌发成营养体。 利 用芽孢杆菌发酵饲料的目的主要是为了消耗培养体系中残留的 氧气，为乳酸菌创造一个厌氧环境。另外，近年来研究还发现， 有些芽孢杆菌能产生杀灭大肠杆菌和沙门氏菌等有害微生物的 细菌素（也称抗菌肽） ，这

9、些抗菌肽有很强的针对性，只对某些 类型的微生物细胞有破坏作用，对酵母菌和乳酸菌没有影响。三、 酵 母 菌 酵母菌是一类单细胞真菌，形态多种多样，主要有球形、卵形和 丝状形（如假丝酵母） ，以出芽的无性繁殖为主，最适宜生长温 度为 2535C,pH 偏酸性 （4.06.0） 。 酵母菌基本上都是兼性厌 氧菌， 在有氧的条件下迅速增殖，在无氧的情况下进行酒精发酵（ EMP）。7 / 40目前在生产中应用的有 20 多种，主要为以下三种：酿 酒酵母、热带假丝酵母、产朊假丝酵母。啤酒酵母和面包酵母是 最常用的酿酒酵母。热带假丝酵母和产朊假丝酵母的生长速度很 快，在适宜的温度和营养条件下，它们的世代倍增

10、时间不超过 3h,特别适合处理食品加工业产生的废水。酵母菌的个体比乳酸菌大得多， 直径通常为 26 g,体积几乎是 乳酸菌的 1000 倍左右。 工业生产中常用的酵母菌主要有酿酒酵 母和假丝酵母,酿酒酵母是生产啤酒、 白酒等含乙醇类发酵物的 重要菌种；假丝酵母主要用于好氧发酵生产动物饲料或者废水处 理。四、 霉 菌 目前在生产中应用的霉菌有近十种,主要为：米曲霉、黑曲霉、 白地霉。一般来说利用霉菌发酵,基本上都是有氧发酵,发酵过 程会产生大量的代谢热， 生产过程中料曲的温度控制往往是生产 成败的关键。 霉菌发酵目前采用浅盘发酵， 料曲厚度不超过 5cm。 如果采用厚层发酵，需采用强通风装置，生

11、产能耗很大，从这一 点上说，霉菌发酵不适于生产饲料或者饲料原料。目前，实际生产中利用霉菌主要是利用它能合成纤维素酶、 半纤 维素酶和蛋白酶的特性，利用廉价的粗蛋白原料作为发酵底物， 生产高活性的蛋白饲料或者粗酶制剂。五、 选用生产菌种的基本原则（一） 安全性（必须同时符合以下两个要求）（ 1） 菌体本身不产生有毒有害物质。（2） 不会危害环境固有的生态平衡（主要针对某些基因工程菌）。（二）有效性（能满足一个要求即可）8 / 40（1） 菌种本身具有很好的生长代谢活力，能有效降解大分子好 抗营养因子，合成小肽和有机酸等小分子物质。（2） 能保护和加强动物微生物区系的正平衡。 这种功效主要是指能有

12、效维护和提高有益微生物在动物消化道 中的数量优势， 其可通过两种方式达到： 一种方式是利用发酵饲 料的生产菌种本身就是从饲养的目标动物的消化道中分离出来 的有益菌，通过饲喂高比例的发酵饲料直接提高有益微生物的数 量，形成数量优势； 另一种方式是利用生产菌种或代谢产物可以 选择性地抑制或者杀灭有害微生物， 形成有益菌的数量优势。 实 现第二种途径的方式可以多种多样，比较常用的有：耗尽氧气， 降低体系的氧化还原电位；降低环境的 pH 值；代谢物中含有能选择性杀灭大肠杆菌和沙门氏菌等有害微生物的抗菌物质等。第三节 发酵饲料生产菌种之间的相互关系 目前人类可利用的这些发酵技术基本上都是纯培养技 术，而

13、实际上在自然界中很难找出单一微生物存在的生态环 境。 据已有的微生物研究报道，地球上存在的微生物超过100万种，而人类所分离的纯种累计不超过10万种，做过比较 系统研究的不超过1万种。根据目前已有的研究成果，大体 可以把微生物之间的关系分为以下几种：中性共生、同住、 互惠共生、共生、竞争、拮抗和寄生。一、 中 性 共 生 这是指两种或两种以上的微生物同时存在于同一个环境 中，但是它们之间没有直接的生态关系， 各自生活互不干扰。 例如淡水中生长的衣藻和水生细菌。二、 同 住这是指两种微生物同处在一个栖所内， 其中一个获益， 另一 个9 / 40不受影响。 常见的现象是一种微生物产生一种代谢物供另

14、一种 微生物作为营养物质， 或者产生适合于另外一种微生物生长的环 境。发酵饲料生产中比较常见的例子有以下几种：酵母菌能在高 浓度的糖液 （ 25%左右）中生长。当糖被酵母菌消耗以后，糖浓 度的降低就有利于不耐受高渗透压的微生物 （如乳酸菌） 的生长。 能分泌淀粉酶的微生物（芽孢菌）水解淀粉产生寡糖和单糖，为 另外一些只能利用还原性单糖的微生物生长提供营养。还有一种比较特殊的同住微生物， 好气性菌可消耗氧气， 降低环 境的氧化还原电位， 使之适合于厌氧微生物的生长。 这种同住关 系只能产生在开始阶段， 在后期就不是同住关系了。 这种现象在 发酵饲料到生产过程中经常遇到， 也是利用微生物组合发酵生

15、产 发酵饲料的重要理论基础。三、 互 惠 共 生 这是两种微生物互惠互利的现象，比较典型的菌种是阿拉伯 糖乳杆菌和粪链球菌的组合。阿拉伯糖乳杆菌不能合成苯丙氨酸，粪链球菌不能合成叶酸。 阿拉伯糖乳杆菌不能在缺少苯丙氨 酸的培养基上生长，粪链球菌也不能在没有叶酸的培养基上生 长。但是把它们组合在一起， 却可以共同在没有苯丙氨酸也没有 叶酸的培养基上生长， 因为它们能相互为对方提供必需的限制性 营养物质。 这种现象在自然界中普遍存在， 发酵饲料的菌种组合 应该多考虑这种组合优势。四、 共 生 共生是指两种微生物在同一个严酷环境中彼此相依为命。比较典型的例子是地衣，它是蓝细菌（或蓝藻）与真菌共同组成

16、的 一个形态和生理单位。蓝藻或蓝细菌的细胞仅限于特定的层内， 地衣内的菌丝交织成菌丝组织， 形成一个稠密的外皮层。 皮层下 为蓝藻的细胞层，10 / 40在下面为菌丝疏松交织的菌髓层。真菌可以从 蓝藻获得碳水化合物，真菌菌丝所摄取的水和无机盐又可以提供 给蓝藻，因此地衣能耐干旱、潮湿和抗寒冷。这种现象在发酵饲 料的生产过程中很难遇到，少有实用的例子。五、 竞 争当两种微生物对某种环境因子有相同要求时，就会发生生存 竞争。由于微生物的世代时间比较短，代谢强度大，所以生存竞 争往往表现的很激烈。在一个生存环境内， 不同的时间会出现不同的优势种。 这种 优势微生物在某种环境下能最有效地适应当时的环境

17、， 而环境条 件一旦改变，就可能被另一种微生物代替并发育成新的优势种。 目前工业化发酵生产之所以采用纯种培养， 其主要原因就是消除 其他微生物的竞争。目标代谢物合成能力强的微生物其生长速度 往往比较低，至少比同类的野生菌低。野生菌的代谢活动是很 “经 济的”。如果从生长速度分析，它们的物质和能量的利用效率要 远高于生产菌种。但是，由于生产成本的限制，发酵饲料的生产 往往不能采用纯种培养，所以微生物之间的生存竞争不可避免。如何巧妙利用微生物之间的生存竞争是研究微生物发酵饲料生 产的一个非常重要的课题。 从理论上分析， 通过控制调节微生物 生存环境可以调整物料中微生物的种类和数量分布， 从而达到利

18、用微生物有益菌群种群优势发酵饲料的目的，但是到目前为止， 有关方面的成熟技术还是很少。六、 拮 抗 一种微生物可以产生不利于另一种微生物生存的代谢物质，或者通过代谢活动改变生存环境， 而这种环境不利于其他周围微 生物的11 / 40生长，这种现象就称为“拮抗” 。如：青贮饲料接种的乳 酸菌和醋酸菌在发酵过程中，不断降低 pH 值，结果绝大多数不 耐酸的微生物不能生存， 甚至趋向死亡。 酵母菌在无氧条件下将 糖发酵成酒精， 当酒精浓度达到一定数值时， 其他微生物就不能 生存。研究发现拮抗还具有明显选择性， 农业部饲料工业中心分离 获得的枯草芽孢杆菌 MA139 能分泌杀灭大肠杆菌、沙门氏菌和 金

19、黄色葡萄球菌的抗菌肽（细菌素） ，但对自身、酵母菌和乳酸 菌的生长代谢基本没有影响， 这种拮抗的选择性是发酵饲料研究 所希望的。七、寄 生一种微生物生活在另一种微生物体内或体外， 依靠摄取寄生 细胞的营养进行生长繁殖， 并使后者遭受损害甚至死亡， 这种现 象称之为寄生。 这种现象在饲料发酵过程中可能存在， 目前在研 究中还没有遇到。微生物是发酵饲料的动力来源， 研究发酵饲料中微生物的相 互关系是获得高质量发酵饲料的必要前提， 也是饲料发酵生产的 核心。第四节 发酵饲料的生产工艺一、 固态厌氧发酵高活性生物饲料相对于好氧发酵， 厌氧发酵的能耗低， 微生物代谢产生的热 量也要小得多，生产过程往往不

20、需要翻拌散热。另外，发酵产品 只要密封得当，即使长期存放也不会腐败变质。目前比较典型的固态厌氧发酵生物饲料的成功例子主要有 两种：一种是适合养殖户自产自用的袋装发酵饲料； 另一种是属于规模化流水线生产的袋装发酵饲料。 它们接种的微生物基本一 致，主要有酵母菌、乳酸菌和芽孢杆菌。12 / 40适合养殖户自产自用的发酵袋是一种普通的密封包装袋， 物 料接种以后装袋，再将袋口用绳扎紧，物料的含水量为 30%40%。开始时，酵母菌消耗袋内残留的氧气进行增殖和呼 吸代谢，同时也为乳酸菌创造一个厌氧的生活环境。然后，酵母 菌在无氧条件下进行糖酵解，产生酒精和 C02,乳酸菌也同时增殖、代谢，产生有机酸。随

21、着袋内气压的不断增加，不断有CO2带着酒精和有机酸排出袋外， 管理饲料的饲养员可以根据排出的 酸香味来判定物料发酵的成熟度。有氧发酵阶段：C6H12O6+6O2- 6CO2+6H2O无氧发酵阶段：C6H12O6- 2CO2+2C2H5OH（乙醇）在夏季， 发酵 35d 就有明显的酸香味。 在冬季， 时间需要延长。 如果环境温度低于 12C,发酵就有可能归于失败。酵母在低温 下长期代谢低迷，不产生 CO2，使得外界的 O2 长时间与接种的 乳酸菌接触，会导致乳酸菌活力大减，甚至死亡。 事实证明，如果环境温度适宜，时间控制得当，采用上述袋装式 土办法发酵， 也可以获得质量很好的微生物发酵饲料， 活

22、性乳酸 菌的含量能达到 108cuf/g 以上。将其在生羊配合饲料中添加 15%20%，生羊采食量能明显提高，最多能提高10%以上，而13 / 40且增重速度和健康水平也有显著提高。这种工艺虽然简单，但是受限制的因素很多，质量标准也很难把握，实际推广有一定困难。 为了使这种袋装发酵技术进入程序化、工业化应用，发酵饲料的质量能得到有效保证，必须完成以下几个前提：发酵过程不受环 境温度限制；产品质量不受存放时间限制， 或者保质期能达到三 个月以上；产品在储存和运输过程中不受外界空气干扰。农业部饲料工业中心的微生物发酵饲料课题组发明了呼吸膜可 移动式固态厌氧发酵饲料（也称袋装发酵饲料）生产技术。这种

23、发酵技术的具体工艺流程如图1-1原料接种以后直接进入包装袋中， 包装袋上附加一个可以调节气 压的硅胶膜。在发酵过程中，微生物会产生 CO2等气体，使得袋 内的气压大于外界常压。当袋内气压达到某一临界值时， 气体通 过硅胶膜排到外界。但是外界的气体始终没有机会进入发酵体 系，从而也就排除了外界杂菌的干扰。研制的特定微生物菌种组合能使乳酸菌迅速繁殖，占据14 / 40数量优 势，原料不需要消毒就可以直接用于接种培养。 这种工艺很简单，如果以日产 30t 计算，设备投资不超过 40 万 元，特别适合在我国广大农村推广使用。第三章 发酵饲料生产技术第一节 发酵饲料用乳酸菌的分离筛选乳酸菌是一类最常见的

24、益生菌，生物饲料的发酵生产一般都 离不开乳酸菌。乳酸菌种类很多，市场上流行的产品也极多，至 少有 20 多种。大量实验证明，只有动物消化道国有的微生物才 能在消化道内定植，外源微生物只能短时间存活在消化道内， 不 可能长期融合到动物消化道的微生态系统中。 筛选发酵饲料的生 产菌种， 其主体应该来源于最终适用的动物消化道， 而乳酸菌细 菌是动物消化道内起主要作用的微生物。样品的采集 为了获得合适的生产用乳酸菌，样品的采集很重要。适合于实 际生产的乳酸菌必须来源于健康动物的消化道， 最好是在发生 了瘟疫的养殖场而幸存的畜禽。发生瘟疫的养殖场，动物大比 例死亡，幸存的畜禽虽少，但是生命力很顽强，是极

25、好的生15 / 40产 菌种采集样本。以下以筛选符合生羊健康养殖需要的生物饲料用乳酸菌为例， 叙 述样品的采集和乳酸菌的分离。在实验室中对生羊进行攻毒试 验，在饲料中不断加大大肠杆菌（实验用 E.ColiK88, 这是一种常 见的攻毒试验用大肠杆菌）的用量，以检验生羊的抵抗力。经过 57d 的试验，生羊的健康水平越来越差。我们选择其中两头最 健康的生羊进行屠宰， 在无菌环境中提取它的胃液、 小肠液和大 肠液，迅速保存在无菌生理盐水（ NaCl 的浓度为 0.9%）中。 目标乳酸菌一般都是厌氧菌， 为了确保乳酸菌的活力， 需要尽可 能降低生理盐水的氧化还原电位。 最简便的方法是在溶液中加入 适量

26、的半胱氨酸，半胱氨酸有巯基（一 SH）,有很好的还原力， 可以消除溶液中残余的氧。二、 乳 酸菌的分离纯化样品中的目标乳酸菌含量一般都不是很高，而且还污染了其他 杂菌。为了提高筛选成功的几率，在样品进行分离纯化以前， 可以对样品进行选择性增殖培养，以增加目标乳酸菌的含量。 样品的增殖培养比较简单，把经过适当处理的样品接种到适于 目标乳酸菌生长的培养基中。比较常用的是牛奶增殖培养液， 在无抗生素牛奶中补充 6%8% 的蔗糖，高温消毒、冷却，然后用氮气或者二氧化碳驱除溶液中残留的空气，再接入适量采集的样品，在 3032C条件下厌氧培养 1024h。如果样品中 的目标乳酸菌含量比较低，可以适当延长培

27、养时间。样品经过预增殖培养以后，目标乳酸菌含量明显提高，可以进 入下一步分离纯化操作。乳酸菌分离培养基通常采用MRS 琼脂培养基，其营养组成与 pH16 / 40如下：蛋白胨： 5.0g/L ；牛肉浸膏： 4.0g/L ；酵母膏： 2.0g/L ； 葡萄糖：12.0g/L ；玉米浆：10.0mL;司盘 80：1ml;磷酸氢二钾：1.0g/L ；三水乙酸钠： 3.0g/L ；柠檬酸三铵： 1.0g/L ；硫酸镁： 0.1g/L ；硫酸锰： 0.03g/L ；琼脂： 18.0g/L 。 pH6.20.2 。加热溶解上述各组分，配制成均匀的溶液，分装在厌氧滚管中（每个管中加 56mL ）。在 115

28、C消毒杀菌 30min。冷却至 50C左右后， 在冰水中滚动滚管， 使固体培养基均匀凝固在管壁上。 为了指示培养基的氧化还原电位，可以在培养基中加入极少量 的刃天青（一种显色剂） ，浓度 0.02%就足够了。在低电位时培 养基显蓝色，随氧化还原电位不断上升，培养基的颜色逐步由 蓝转为浅蓝、粉红、红色。如果培养基的颜色转成粉红就基本 不合格了。同增殖培养过程一样，在MRS 分离培养基中加入适量的半胱氨酸可以在一定时间内维持环境的低电位。分离纯化培养基准备好以后，就可以进行目标乳酸菌的分离操 作了。在超净工作台上 （或者其他无菌环境中） ，对经过增殖培养的样 品进行梯度稀释，稀释液还是用无菌的生理

29、盐水，把稀释后的17 / 40件下培养 12d。 为了提高筛选几率，可以同时做多个稀释梯度样品的培养。如 果两天以后不出现理想的菌落，可以再延长培养时间。虽然乳酸菌的最适宜生长温度是3740C，但是在分离筛选过程中，培养温度应适当调低，以降低其生长速度，这样菌落之 间的差异可以更明晰，也更有利于挑选理想的菌种。 经过上述分离操作，我们获得了 5 株乳酸菌，它们分别是：1. 来源于羊胃的格氏乳杆菌( Lactobacillus gasseri) ;2. 来源于十二指肠的罗伊氏乳杆菌( Lactobacillus reuteri );3. 来源于小肠的屎肠球菌( Enterococcus faecium );4. 来源于空肠的嗜酸乳杆菌( Lactobacillus acidophilus ) ;5. 来源于结肠的发酵乳杆菌( Lactobacillus fermentium )。三、发酵力和耐酸稳定性分析为了后续生产应用的需要，我们对分离获得的乳酸菌进行发酵力测定和耐酸稳定性试验。发酵力测定比较简单，主要测定其乳酸菌的产量，具体方法如下：接种分离获得的细菌纯种于试管培养液中，3032C恒温培养12h,然后再扩大接种到牛奶瓶中，3032C恒温培养 6h,测定乳