牛蒡不同部位_牛蒡子不同产地中牛蒡苷和牛蒡苷元含量比较及指纹

1、质量标准v基金项目 国家/十一五0支撑计划课题(2006BA I09B02-6 和辽宁省教育厅创新团队项目(2007T 115 通讯作者*窦德强, E -m a i:l doudeqiang2003yahoo 1co m 1cn牛蒡不同部位、牛蒡子不同产地中牛蒡苷和牛蒡苷元含量比较及指纹图谱分析v康凯1, 窦德强1*, 康廷国1, 许亮1, 吕智1, 常禹2, 刘淼2(11辽宁中医药大学药学院, 辽宁 大连 116600;21中国科学院沈阳生态研究所, 辽宁 沈阳 110016摘要 目的:应用HPLC 同时测定采集于全国34份牛蒡子和牛蒡不同部位中牛蒡苷和牛蒡苷元的含量; 建立牛蒡子药材H P

2、LC 指纹图谱。方法:采用A g il ent T C -C 18(416mm 250mm, 5L m 色谱柱; 流动相:甲醇-水(水:0m i n ,55%;10m i n ,46%; 20m in , 30%线性梯度, 检测波长为280n m 。结果:牛蒡苷的线性方程为Y =540183X -937102(r =019999,n =6, 平均回收率为97186%,RSD =1158%; 牛蒡苷元的线性方程为Y =381257X -241926(r =019998 , n =6, 平均回收率为98133%,RSD =1174%。本实验建立的牛蒡子药材H PLC指纹图谱相似度均在0190110

3、0。结论:本方法简便、准确、灵敏, 可同时测定牛蒡苷和牛蒡苷元的含量, 可用作牛蒡子药材的质量控制方法。本实验建立的H PLC 指纹图谱分析方法可用于评价牛蒡子药材的内在质量。牛蒡不同部位所含牛蒡苷和牛蒡苷元考察结果表明, 牛蒡绒毛、果皮、总苞、芽较其他部位含有较多牛蒡苷和牛蒡苷元。关键词 HPLC ; 牛蒡子; 牛蒡苷; 牛蒡苷元; 指纹图谱牛蒡子为菊科植物牛蒡A rctium l a ppa L 1的干燥成熟果实。具疏散风热, 宣肺透疹, 解毒利咽的功能。用于风热感冒, 咳嗽痰多, 麻疹, 风疹, 咽喉肿痛, 痄腮丹毒, 痈肿疮毒1。牛蒡子主要化学成分为木脂素类化合物, 主要为牛蒡苷、牛蒡

4、苷元等2。药理活性主要是抗菌、降血糖、利尿及泻下、抗肿瘤作用和免疫活性等。现代药理研究结果表明牛蒡子中的活性成分为牛蒡苷元。在口服条件下牛蒡苷在肠内菌作用下也很快转变为牛蒡苷元这一活性形式3-4。所以同时控制牛蒡子药材中牛蒡苷和牛蒡苷元的含量, 才能真正达到控制该药材质量的目的。目前牛蒡不同部位中牛蒡苷和牛蒡苷元的含量测定尚未见报道。为了对不同产地牛蒡子的质量和对牛蒡不同部位的开发与利用有更深入了解, 本文对不同产地牛蒡子中牛蒡苷和牛蒡苷元的含量进行了研究, 同时对牛蒡不同部位的牛蒡苷和牛蒡苷元的含量进行了比较, 并建立了牛蒡子药材H PLC 指纹图谱。1 仪器与材料111仪器Ag ilent

5、 1100高效液相色谱仪; 四元泵; 在线脱气机; 柱温箱; KQ-250DE 型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司; 高速万能粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司 。112试药牛蒡苷对照品、牛蒡苷元对照品(均购自中国药品生物制品检定所 。甲醇为色谱纯(天津市科密欧化学试剂有限公司 。水为重蒸馏水。113样品本实验所采用的牛蒡子药材于2007年9月、10月采自于全国7个大区34个产地, 经辽宁中医药大学康廷国教授鉴定均为Arctiu m lappa L 1, 牛蒡子编号及来源见表1。牛蒡不同部位采自沈阳苏家坨。2 方法与结果211溶液配制21111对照品溶液的制备 精密称定干燥至恒重的牛蒡苷对照

6、品置10mL 容量瓶中, 加甲醇溶解并定容至刻度, 配成11149m g #mL -1的牛蒡苷对照品溶液。精密称定干燥至恒重的牛蒡苷元对照品置10mL 容量瓶中, 加甲醇溶解并定容至刻度, 配成010519mg #mL -1的牛蒡苷元对照品溶液。21112供试品溶液的制备将牛蒡子干燥并粉碎, 过60目筛, 取粉末015g , 精密称定, 置50mL 容量瓶中, 加甲醇45mL , 在超声波发生器内提取20m i n (150W, 20kH z, 取出放冷, 加甲醇至刻度, 摇匀。经微孔滤膜(0145L m 过滤, 即得。表1全国34个产地牛蒡子编号及来源区域省或直辖市样品编号产地东北黑龙江1佳

7、木斯2富锦3五常4牡丹江吉林5四平石岭6梅河口丘凤7通化8抚松9桦甸10胶河11延吉辽宁12本溪县13宽甸14岫岩15铁岭16清原17北镇华东浙江18建德江苏19徐州山东20苍山华南陕西21太白县22宁陕(采 西北甘肃23会川24天水(采 25岷县(采、绿 26宕昌华北河北27承德华中河南28禹州(采 29河南滦川西南四川30雅安31松潘华中湖北32恩施33神农架34巴东 212色谱条件色谱柱为Ag ilent TC -C 18(416mm 250mm, 5L m ; 流动相:甲醇-水(水:0m i n , 55%; 10m i n , 46%; 20m i n , 30%线性梯度; 流速11

8、0mL #m i n -1; 检测波长280n m; 柱温25e ; 检测时间20m in 。213方法学考察21311线性关系2131111牛蒡苷线性范围考察精密吸取牛蒡苷对照品溶液4, 6, 8, 10, 12, 14L L 分别注入液相色谱仪, 测定牛蒡苷的色谱峰面积, 以进样量为横坐标, 以峰面积为纵坐标, 得牛蒡苷回归方程为Y = 540183X -937102, r =019999, 牛蒡苷在41596 161086L g 线性关系良好。2131112牛蒡苷元线性范围考察精密吸取牛蒡苷元对照品溶液2, 4, 6, 8, 10, 12L L 分别注入液相色谱仪, 测定牛蒡苷元的色谱峰

9、面积, 以进样量为横坐标, 以峰面积为纵坐标, 得牛蒡苷元回归方程为Y =381257X -241926, r =019998。牛蒡苷元在011038016228L g 线性关系良好。21312精密度试验按样品测定方法对同一样品溶液连续进样6次, 牛蒡苷、牛蒡苷元RSD 分别为2117%、1182%, 说明本试验精密度试验符合有关规定。21313重现性试验按样品测定方法对牛蒡子样品进行5次平行实验, 牛蒡苷、牛蒡苷元RSD 分别为1137%、1119%, 说明本试验重现性试验符合有关规定。21314稳定性试验在室温条件下, 精密吸取同一样品溶液。按样品测定方法在0, 2, 4, 6, 8h 时

10、间间隔内分别测定牛蒡苷和苷元的峰面积, 结果牛蒡苷、牛蒡苷元的RSD 分别为1172%、1170%, 表明牛蒡苷和牛蒡苷元在8h 内基本稳定。21315加样回收率试验精称6份已知牛蒡苷和牛蒡苷元含量的样品0125g , 分别加入牛蒡苷和牛蒡苷元对照品。按供试品溶液制备项下方法处理, 按上述色谱条件操作, 计算回收率。结果见表23。表2牛蒡苷回收率序号取样量/g样品中量/mg对照品加入量/mg测得量/mg回收率/%平均回收率/%9718611582009年4月第11卷第4期中国现代中药M odern Chi nese M ed i c i ne A pr 12009V o l 111N o 14

11、表3牛蒡苷元回收率试验序号 取样量/g样品中量/mg测得量/mg回收率/%平均回收率/%RSD /%981331174注:牛蒡苷元对照品加入量均为0180mg结果表明本试验加样回收率试验符合有关规定。214样品的测定精密吸取供试品溶液10L L , 注入高效液相色谱仪中, 测定牛蒡苷和苷元的色谱峰面积, 用外标法计算样品中牛蒡苷和苷元的含量。平行做2份。结果见表4, 色谱图见图13。表4全国34个产地牛蒡子中牛蒡苷和 72 21534个不同产地牛蒡子指纹图谱的测定21511牛蒡子药材H PLC 指纹图谱中共有指纹峰的标定与技术参数的设定将34批不同产地牛蒡子药材指纹图谱输入国家药典委员会指定的

12、指纹图谱相似度测试软件中, 进行图形匹配及其数据匹配后, 建立了供试品指纹图谱的共有模式, 共有10个色谱峰, 其中5, 10号峰分别为牛蒡苷和牛蒡苷元的色谱峰, 结果见图45。将4号峰作为内参比峰, 各峰相对保留时间、相对峰面积结果见表5。2015030114330168501403S 11000110006112440115471128901186811702011259117400129821512牛蒡子药材指纹图谱相似度检验利用指纹图谱相似度计算软件, 以夹角余弦作为测度, 计算样品与共有模式之间的相似度4, 结果见表6。表634个产地牛蒡子相似度评价结果216牛蒡不同部位所含牛蒡苷和

13、牛蒡苷元的考察按211供试品溶液的制备方法分别对牛蒡野生根、栽培根、二年生叶、一年生叶、二年生茎、一年生叶柄、绒毛、总苞、果皮、芽进行制备, 分别取10L L , 按212色谱条件进样, 测定牛蒡苷和牛蒡苷元的色谱峰面积, 用外标法计算牛蒡不同部位中牛蒡苷和牛蒡苷元的含量, 结果见表7。表7牛蒡不同部位中牛蒡苷和牛蒡苷元含量测定/mg#g -1部位牛蒡苷含量牛蒡苷元含量野生根0139-栽培根-二年生叶-一年生叶-二年生茎-一年生叶柄-绒毛31710145总苞81990170果皮61912130芽9112828165注:(1 -表示没有检测到牛蒡苷或牛蒡苷元; (2 n =33讨论对采于全国34

14、个地区牛蒡子药材中牛蒡苷和牛蒡苷元进行了含量测定, 根据含量测定结果, 采于吉林梅河口丘凤的牛蒡子药材品质最好。对5中国药典6牛蒡子提取方法中关于提取所用甲醇的浓度和超声提取时间进行了验证, 结果表明采用纯甲醇超声提取20m in 效果最好。本实验建立的牛蒡子药材H PLC 指纹图谱相似度均在0190 1100, 因此, 在分析未知样品时, 凡未知样品与标准样本间的相似度达到以上标准, 其他项目均符合质量标准时, 均可作为合格药材入药。对牛蒡不同部位所含牛蒡苷和牛蒡苷元的含量进行了考察, 结果显示牛蒡野生根、栽培根、二年生叶、一年生叶、二年生茎、一年生叶柄里不含有牛蒡苷和牛蒡苷元或仅含有少量牛

15、蒡苷或牛蒡苷元。牛蒡绒毛、果皮、总苞、芽含有较多牛蒡苷和牛蒡苷元, 其中芽里含有较多牛蒡苷元。参考文献1国家药典委员会1中国药典(一部 S1北京:化学工业出版社, 2005:48-4912江苏新医学院1中药大辞典M1上海:上海科学技术出版社, 1977, 6(3:21713N o se M 1Structural transfo r ma ti on o f li gnan co m pounds in rat g astro i ntesti nal tractJ1P lantaM ed , 1992, 58(6:5201 4N o se M 1Structural transfo r ma

16、 ti on o f li gnan co m pounds in rat g astro i ntesti nal tract ; ÒSe ru m concentrati on o f lignans and the ir m etabolitesJ1P l anta M ed , 1993, 59(2:13115国家药品监督管理局1中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行 M 120001(收稿日期2008-10-21 (下转第37页 参考文献1国家药典委员会1中国药典(一部 S1北京:化学工业出版社, 2005:3112宋磊, 丁安伟, 黄海燕1女贞子炮制工艺的研究J1中药新药

17、与临床药理, 2007, 18(1:64-65, 7713叶定江, 张世臣1中药炮制学M 1北京:人民卫生出版社, 1999:50214陈亚东, 曹秀兰, 田长有, 等1高山红景天对小鼠耐缺氧、抗疲劳及耐低温作用的影响J1中国中医药科技, 2002, 9(3 :157-1581 5孙立群, 王宗贵, 朱洪权, 等1红景天甙抗二倍体细胞衰老的实验研究J1中国老年学杂志, 200, l 2l(3: 225-22616曾维政, 吴晓玲, 蒋明德, 等1红景天甙对肝纤维化大鼠肝组织CBP 、S m ad 基因表达的影响J1世界华人消化杂志, 2005, 13(3 :341-34517王亚平, 李伯祥1

18、A -平滑肌肌动蛋白在大鼠肾间质损伤时的表达及红景天甙的保护作用J1中华肾脏病杂志, 2000, 16(2:1181(收稿日期2008-10-31Effec t of Ste w ing Tim e on the Content of Sali d rosi d e in L i g ustru m luc i d um A it 1Zhang Xuelan 1, H ou Jie 1, L iH u ifen 1, W ang Ru ifang 2(11Shandong University of TC M, J inan Shandong 250014, China;21J inan M

19、aternity and Chil d CareH os p ital , J inan Shandong 250001, Ch inaA bstractO bjective :To study the effect of ste w ing ti m e on the content of sa li d rosi d e in L igu strum lu ci -dum A it 1M e t hods :L i g ustrum luci d um A it 1and its processed produc ts o f different ste w i n g ti m e (4

20、, 8, 12, 16, 20, 24h w ith yello w w i n e w ere co m pared w ith the contents of sa li d roside taken as the index 1And the con -ten ts of salidrosi d e w ere deter m i n ed by H PLC 1R esults :The contents o f sa li d rosi d e in 6k i n ds of processed prod -uc ts w are h i g er obv i o usl y than

21、 ones of L igustrum lucidum A it 1A nd w ith the pro l o ng i n g o f ste w ing ti m e , the con -ten ts o f sa li d ro si d e i n the pro cessed productsw ere increased g radually 1C onc lusion :The ste w i n g ti m e has a great effec t on the content o f sa li d roside in L igu strum lucidum A it

22、 1, sa lidrosi d e o f L i g ustrum luci d um A it 1w as pro -duced by stew i n g 1Key w ordsL igustrum lucidum A it 1; Processing w ith w i n e ; Ste w i n g ti m e ; Salidrosi d e(上接第26页Content Determ ination of A rctii n and A rctigenin in Fructus A rctii fro m D ifferent CultivationP laces and t

23、he D ifferent Parts of Arctiu m Lappa L 1and F i n gerprint Analysis of Fruct us A rctii K ang Ka i 1, Dou Deq i a ng 1, Kang T i n gguo 1, Xu Liang 1, L Zh i 1, Chang Yu 2, Liu M iao 2(11L iaoning University of Trad itional ChineseM ed ici n e , Dalian L iaon i n g 116600, China;21Institute of App

24、lie d E cology , Chinese Acade m y o f Sciences , Shenyang L i a oning 110016, ChinaAbstractObj ective :To estab lish a H PLC m ethod to deter m i n e the contents of arctii n and arctigenin i n Fructus Arctii fro m different cu ltivation p l a ces and the d ifferent parts o f Arctium Lappa L 1and fi n gerpri n t o f Fruct u s A rctii 1M et hods :The H PLC m ethod w as e m ployed by taki n g Ag ilent TC -C 18column (416mm 250mm , 5L m and m ethano -l w