老师整理的实验报告水处理微生物学标准实验报告实验十细菌菌落总数cfu的测定

1、南昌大学实验报告学生姓名： 学 号： 专业班级： 实验类型：V 验证 口综合 口设计创新 实验日期： 实验成绩：实验十细菌菌落总数(CFU的测定一、实验目的：1 .学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。2 . 了解培养基平板菌落计数原则二、实验基本原理：细菌菌落总数(CFU是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37c培养24h后所生长的 腐生性细菌菌落总数。它是有机污染程度的指标，也是卫生指标。在饮用水中所测得的细菌 菌落总数除说明水有机污染的程度外，还指示该饮用水能否饮用。但还应当指出的是，水源 水中的细菌菌落总数不能说明污染的来源。因此，结合大肠菌群数以判断水的污染的安全程 度就更全面

2、。我国现行生活饮用水的卫生标准(GB5749-2006)规定：细菌菌落总数在1ml自来水中 不得超过80个。细菌种类很多，有各自的生理特性，必须用适合它们的培养基才能将它们培养出来。然 而在实验工作中不易做到，通常用一种适合大多数细菌生长的培养基培养腐生性细菌，以它的菌落总数表明有机污染程度。三、主要仪器设备及耗材：电热干燥箱，高压蒸汽灭菌锅，电热培养箱，恒温水浴，冰箱，菌落计数器，放大镜， 肉膏蛋白陈脂培养基，灭菌水，灭菌三角烧瓶，灭菌的带玻璃塞瓶，灭菌培养皿，灭菌吸管， 灭菌试管等。四、实验步骤:1水样的采取供细菌学检验用的水样，必须按无菌操作的基本要求进行采样，并保证在运送，贮存过程中不

3、受污染。为了要正确反映水质在采样时的真实情况，水样在采取后应立即送检，一般从取样到检验不应超过4 小时。条件不允许立即检验时，应存于冰箱，但也不应超过24 小时，并应在检验报告单上注明。( 1)生活饮用水(自来水)先将自来水龙头用火焰烧灼3 分钟灭菌，再开放水龙头使水流 5 分钟后，用灭菌三角烧瓶接取水样，以待分析。(2)池水、河水或湖水应取距水面1015 cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，立即返回实验室检查，否则需放入冰箱中保存。2细菌总数测定( 1)自来水(a) 用灭菌吸管吸取1ml 水样，注入

4、灭菌培养皿中。共做三个平皿。(b) 分别倾注约15ml 已溶化并冷却到45左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀。 另取三空的灭菌培养皿，倾注肉膏蛋白陈琼脂培养基15ml,作空白对照。(d) 培养基凝固后，倒置于37温箱中，培养24小时，进行菌落计数。三个平板的平均菌落数即为1ml 水样的细菌总数。( 2)池水、河水或湖水等（a） 稀释水样取 3 个灭菌空试管，分别加入9ml 灭菌水。取1ml 水样注入第一管9ml灭菌水内，摇匀，再从第一管取1ml 至下一管灭菌水内，如此稀释到第三管，稀释度分别为10-1、 10-2 与 10-3。稀释倍数看水样污浊程度而定

5、，以培养后平板的菌落数在30 300个之间的稀释度最为合适，若三个稀释度的菌数均多到无法计数或少到无法计数，则需继续稀释或减小稀释倍数。一般中等污秽水样，取 10-1 、 10-2 与 10-3 三个连续稀释度，污秽严重的取10-2、10-3、 10-4三个连续稀释度。（b） 自最后三个稀释度的试管中各取1ml 稀释水加入空的灭菌培养皿中，每一稀释度做三个培养皿。（c） 各倾注 15ml 已溶化并冷却至45左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基，立即放在桌上摇匀。（d） 凝固后倒置于37培养箱中培养24 小时。3菌落计数用肉眼观察，计平板上的细菌菌落总数，也可用放大镜和菌落计数器计数，记下同一浓度的三个平

6、板的菌落总数。各种不同情况的计算方法如下：（ 1）先计算相同稀释度的平均菌落数。若其中一个培养皿有较大片状菌苔生长时，则不应采用，而应以无片状菌苔生长的培养皿作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌苔的大小不到培养皿的一半，而其余的一半菌落分布又很均匀时，则可将此一半的菌落数乘2 以代表全培养皿的菌落数，然后再计算该稀释度的平均菌落数。（ 2）首先选择平均菌落数在30 300 之间的，当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则以该平均菌落数乘其稀释倍数即为该水样的细菌总数。（ 3）若有两个稀释度的平均菌落数均在30 300 之间，则按两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于2，应采取两者的平均数。若

7、大于2，则取其中较小的菌落总数。（ 4）若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数。（ 5）若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数。（ 6） 若所有稀释度的平均菌落数均不在30 300 之间， 则以最近300 或 30 的平均菌落数乘以稀释倍数。（ 7）菌落计数的报告，菌落数在100 以内时按实有数报告，大于100 时，采用两位有效数字，在两位有效数字后面的位数，以四舍五入方法计算。微了缩短数字后面的零数，可用科学计数法表示（见例表报告方式栏）。计算菌落总数方法举例例次不同稀释度的平均菌落数菌落总数（个/ml ）报告方式（个/ml ）备注10-110-210-311365164201640016000 或 1.6 X104两位以后的数字米取四舍五入的方法去掉22760295463775038000 或 3.8 X10432890271602710027000 或 2.7 X1044无法计数1650513513000510000 或 5.1 X1055271152702270 或 2.7 X106无法计数305123050031000 或 3.1 X104五、实验数据及处理结果湖水水样:平行样不同稀释度的平