光敏剂喜泊分对H(22)肝癌小鼠移植瘤的放射增敏作用及其机制研究

1、光敏剂喜泊分对H_(22)肝癌小鼠移植瘤的放射增敏作用及其机制研究目的：原发性肝癌(Primarylivercancer)是常见的消化系统恶性肿瘤之一，占所有癌症总数的5.6%。全球50%以上的肝癌发生在我国，病死率居恶性肿瘤中第2位1，严重威胁人类的生命及健康。放射治疗是在保存器官的情况下用来控制局部肿瘤的一种治疗手段2，已成为治疗肝癌的重要手段之一。单独的放疗只对辐射敏感的肿瘤有较好疗效，但是仍有多种肿瘤对辐射并不十分敏感3-5。放射增敏剂能够提高肿瘤细胞对射线的敏感性进而增加放射线对肿瘤细胞的杀伤率，成为肿瘤放射治疗的一个重要研究课题。喜泊分(hematoporphyrin)，1,3,5

2、,8,-四甲基-2,4-二(a-羟乙基)-口卜吩-6,7-二丙酸(C34H38N4O6是SFDA比准的国家一类化学新药血吓咻衍生物。该药物对肿瘤组织有特殊的亲和力,能选择性浓集于作用部位，应用48h后在月中瘤组织内的浓度是正常组织的10-30倍，排泄比正常组织延长48-72h,甚至240h以上6。此外，喜泊分易溶于水，便于给药，可被电磁波激发发挥杀伤癌细胞的作用，且对重要脏器无明显毒副反应，预期对肿瘤有较好的放射增敏效果。本实验以荷H22肝癌细胞昆明小鼠模型为研究对象，研究喜泊分联合不同剂量放疗方案的抗肿瘤疗效及放射增敏效果，设置空白对照组、喜泊分组、放疗1组、联合治疗1组、放疗2组、联合治疗

3、2组、放疗3组、联合治疗3组共8组，对移植瘤体积、q值及增敏系数分析、移植瘤重量、抑瘤率、小鼠生存情况、病理HE染色、细胞凋亡情况、治疗副反应等方面进行比较研究。观察测试喜泊分对肝癌放疗的抑瘤增敏作用、增敏程度，并对两种方法联合应用的有效方式及其增敏机制进行初步探索，以期为光敏剂放疗增敏的探索及寻找恶性肿瘤治疗新途径提供理论依据。方法：1建立H22肝癌细胞小鼠移植瘤模型及实验分组：按随机数字法分为分为A对照组（Control）、B喜泊分组（Hp）、C放疗1组（Rt1）、D联合治疗1组（Hp+Rt1）、E放疗2组（Rt2）、F联合治疗2组（Hp+Rt2）、G放疗3组（Rt3）、H联合治疗3组（H

4、p+Rt8组。2隔日一次测量小鼠移植瘤瘤径，计算瘤体积及肿瘤生长抑制率，并绘制生长曲线；分析增敏q值及增敏系数，观察抑瘤增敏效果。3第14天处死部分小鼠后称瘤重，计算肿瘤抑制率。4余下小鼠观察生存质量及生存时间，绘制生存曲线，计算生命延长率。5小鼠移植瘤镜下HE染色观察瘤组织凋亡坏死情况。6流式细胞仪分析各组瘤组织凋亡情况及细胞周期分布情况。7计算小鼠胸腺指数及脾脏指数，观察小鼠免疫情况。8统计分析：采用SPSS13.0软件进行数据统计分析。计量资料用xs表示。各组指标均数比较采用单因素方差分析检验，组间多重比较采用LSD-t检验，各组荷瘤鼠生存分析采用Kaplan-Meier法。各检验均以P

5、<0.05为有统计学意义。研究结果：1昆明小鼠H22肝癌细胞种植成瘤率100%。2小鼠移植瘤体积变化情况及肿瘤生长抑制率：治疗前初始肿瘤体积平均为（852.665670.91993）mm3单因素方差分析无统计学差异（F=0.911尸=0.503）,治疗后第4天各组瘤体积出现差异（F=7.749，P=0.000），第14天各组瘤体积方差分析有统计学差异(F=277.924，P=0.000)。对照组、喜泊分组、放疗1组、联合治疗1组、放疗2组、联合治疗2组、放疗3组、联合治疗3组第14天肿瘤生长抑制率分别为：0、0.58%、24.48%、29.67%、34.83%、49.82%、49.15%

6、、1.12 2%。3q值及增敏系数分析：各联合治疗治疗组q均值均>1，以联合治疗2组平均q值最大(1.52160.12940);各联合治疗组EF均大于1,联合治疗2组EF最大(1.7225)。4各组移植瘤重量及月中瘤抑制率：方差分析提示各组瘤重差异具有统计学意义(F=127.352，P=0.000)。对照组、喜泊分组、放疗1组、联合治疗1组、放疗2组、联合治疗2组、放疗3组、联合治疗3组肿瘤抑制率分别为：0、0.488%、22.83%、27.96%、32.60%、1.962 2%、48.31%、49.94%。5荷瘤小鼠生存情况：除喜泊分组外，各处理组均能延长小鼠生存时间，提高小鼠生存质量

7、，方差分析显示各组生存时间差异具有统计学意义(F=75.511，P=0.000)，联合治疗2组生存时间最长、生命延长率最高。6 移植瘤病理观察：与对照组及喜泊分组比较，各处理组均出现肿瘤细胞数量减少、局部红染无细胞结构增加表现。以联合治疗2组最为明显，肿瘤细胞坏死数量最多，坏死范围最大。7 细胞凋亡及细胞周期分布：除喜泊分组外，各处理组凋亡率增加，差异具有统计学意义(P=0.000)，联合治疗2组凋亡峰值最高。各联合治疗组G0/G1期细胞所占比例呈减小趋势但变化不大，S期细胞比例呈明显减小趋势，G2/M期细胞比例呈明显增加趋势，以联合治疗2组最为显著。8各组小鼠胸腺指数、脾指数检测：除喜泊分组外，各处理组脾指数、胸腺指数较对照组均有所下降，并随放疗剂量增加呈减小趋势，但各联合治疗组与同剂量放疗组比较差异无统计学意义。结论：喜泊分（15mg/K联合不同剂量放疗（5Gy10Gy15GyX线）能不同程度对H22肝癌移植瘤小鼠产生抑瘤增效、放射增敏作用；能不同程度改善小鼠生存情况；能通过促使