响应面分析法优化灵芝多糖的微波提取工艺

1、第27卷第3期2009年3月中华中医药学刊CHINESEARCHIVESOFTRADITIONALCHINESEMEDICINE响应面分析法优化灵芝多糖的微波提取工艺曾玲,宋雪英,盛振华,吴巧凤,诸敏22(11杭州市第二人民医院,浙江杭州310015;21浙江中医药大学药学院,浙江杭州310053)摘要:目的:确定灵芝多糖微波提取最佳工艺。方法:采用苯酚-硫酸法,通过响应面分析法对灵芝多糖微波提取工艺进行优选。结果:液料比、微波频率对灵芝多糖得率具有显著性影响,其最佳提取工艺为:加药材32倍量的水,在1960MHz微波频率下提取14min,结果测得多糖得率为6186%。结论:该优化工艺简便稳定

2、、重现性好,可用于灵芝多糖的提取。关键词:灵芝多糖;微波提取;响应面法;Box-Behnken设计中图分类号:R28412文献标识码:A文章编号:1673-7717(2009)03-0631-02StudyonExtractionofGanodermaLucidumPolysaccharidesResposeSethodologyZENGLing,SONGXue2ying,SHENGZhen2Q2feng,(11TheSecondPeoplesHospital21CollegeofPharmacy,310053,Zhejiang,China)2Keywords:ganodermapolysac

3、charide;microwaveextraction;responsesurfacemethodology;Box2Behnkendesign灵芝为多孔菌科真菌赤芝GanodermalucidumKarst或紫芝GanodermasinenseZhao,XuetZhang的干燥子实体。性味甘平,具有补气安神、止咳平喘等作用,常用于眩晕不眠,心悸气短,虚劳咳喘1的葡萄糖标准品1111mg,加蒸馏水定容于100mL量瓶,即得浓度为01111mg/mL的对照品溶液。21112供试品溶液的制备称取灵芝干燥药材适量,按照。现代研究表明2-3,灵芝多糖一定的水料比,微波频率和微波时间提取,滤过,浓缩,加

4、无水乙醇至80%进行醇沉,离心,取沉淀,干燥,加蒸馏水溶解,定容于100mL量瓶,即得供试品溶液。21113最大吸收波长精密吸取对照品溶液和供试品溶为其主要活性成分,具有抗肿瘤、增强免疫力及调节血脂的作用。灵芝多糖的提取方法有热水浸提法4、超声法5等,与传统的提取方法比较,微波提取具有速度快、提取率高、提取所用溶剂少和操作简单1仪器与试剂ME-6500微波炉(herald),SPECTRUMLAB22PC可见分光光度计(上海棱光技术有限公司),SartoriusBS110S分6等优点。该文采用微波液各110mL,分别置比色管中,精密加入5%苯酚溶液110mL混匀,加浓硫酸510mL,摇匀后,沸

5、水浴显色30min,提取法,并通过响应面分析,优化灵芝多糖提取工艺。冷却至室温。另取蒸馏水110mL,作为随行空白。在400600nm波长范围内对标准品和供试品溶液分别进行扫描,结果表明两者均在488nm处有最大吸收,故确定488nm为测定波长。21114标准曲线的制备精密吸取对照品溶液012、013、014、015、016、017mL置比色管中,分别用蒸馏水补至110mL,按“21113”项下操作,在488nm处分别测得吸收度。析天平(北京赛多利天平有限公司)。灵芝购于浙江省临安市医药药材有限公司中药饮片厂,经浙江中医药大学植物教研室教授姚振生鉴定为GanodermalucidumKarst

6、。所用试剂均为分析纯。2方法与结果211灵芝多糖的含量测定7以吸光度y为纵坐标,浓度x为横坐标进行线性回归,得回归方程y=101605x-010264,r=019995,表明葡萄糖在010222010777mg/mL浓度范围内呈良好的线性关系。212灵芝微波提取工艺研究21211响应面分析法因素的选取及方案分析分别称取中华中医药21111对照品溶液的制备精密称取105干燥至恒重收稿日期:2008-10-18基金项目:杭州市医药科技项目(2007D0012)作者简介:曾玲(1975-),女,浙江丽水人,主管中药师,学士,研究方向:医院药学。学刊灵芝样品110g,根据Box-Benhnken中心组

7、合实验设计原理8,综合单因素试验的结果,选取料水比、提取时间、微631第27卷第3期2009年3月中华中医药学刊CHINESEARCHIVESOFTRADITIONALCHINESEMEDICINE波频率3个因素,每个自变量的低、中、高水平分别以-1、0、1编码,以灵芝多糖得率作为响应值(Y)。采用SAS91113对实验结果进行回归分析。试验因素与水平见表1,试验方案及结果见表2。表1试验因素与水平因素-1X1(液料比)X2(提取时间,min)X3(微波强度,MHz)206980030101470140141960见表4。表4回归方程各项的显著性检验分析方差来源自由度X1X2X3111偏差平方

8、和均方和F值显著性P>0.055.8566水平表2响应面实验安排及结果实验编号X1-1-1110000-11000X2-11-11-1-10000000X30000-1-1-111000由表4可知,微波频率和提取时间对灵芝多糖提取得率具有显著性影响,而液料比则无显著性影响。根据回归分析结果作出相应曲面图和等值线图,见图13。利用SAS软件,进行分析计算,得灵芝多糖最佳微波提取工艺条件为:液料比321261,提取时间1312min,微波频率174116MHz,在此条件下灵芝多糖的提取得率为7117%。,确定最佳微:MHz微波。注:共有15个实验,其中12个为析因实验,3个为中心实验,以估计

9、误差。21212试验结果分析采用SAS91113软件对表2中不同试验条件下所得到的灵芝多糖得率进行响应面回归分析,得拟合方程:Y1=613633+012163X1+01505X2+017638X3-011429X1-0103X1X2+011325X1X3+010346X2+0105X2X3-013879X3,见表3。表3回归方程显著性及方差分析变异源一次项二次项交互项回归剩余总体自由度3339514偏差平方和均方和F值显著性P>0.05P>0.0521213验证性实验按照最佳微波提取工艺进行试验验13.3711P<0.01-中华中医药证,提取3次,测得灵芝多糖的平均得率为61

10、86%,RSD为1161%。表明该工艺稳定可行,重现性好,结果见表5。表5验证性试验结果(%)编号12学刊由表3可知,在置信区间95%时,方程线性相关系数R=019801。证明回归方程真实、可靠,具有统计学意义,可用于替代实验点对实验结果进行分析。方程各自变量(Xn)方差分析表明,方程一次项对多糖提取得率具有显著性影响,二次项和交互项则无显著性影响,因此各因素与响应值之间是简单的线性关系,不是二次关系。并进一步对回归方程各项作显著性检验。632灵芝多糖得率6.86RSD1.613讨论该文采用响应面分析法对灵芝多糖微波提取工艺进行优化,并得到回归方程。其最佳微波提取工艺条件为:加药第27卷第3期

11、中医药改善慢性肾衰竭营养不良研究近况李建英,于俊生,刘先英,孙云松(青岛市中医医院,山东青岛266033)关键词:营养不良;慢性肾衰竭;中医药疗法;综述中图分类号:R69215文献标识码:A文章编号:1673-7717(2009)03-0633-04营养不良是慢性肾衰竭患者常见并发症,无论是透析而减弱。还是非透析患者,营养不良普遍存在。随着透析技术的不谢桂权等4-5、佐以化瘀祛浊的断提高,肾衰竭病人急性并发症的死亡率已明显降低,营养康肾1号(冬虫夏草、西洋参、黄芪、白术、防风、熟不良已成为影响其生活质量和增加病死率的重要因素。国大黄、川芎、),内报道行替代治疗的患者58%为营养不良1,与国外报

12、道,降低患者的结果相似,而在未行透析的终末期肾病(ESRD)患者中,营养不良的发生率也在50%以上,提高患者生存率,并可使患者,(L-2)、T3、T4、T4/T8细胞免疫指标均值明显下。,常见感染并发症次数显著减少。1临床研究魏连波等6认为腹膜透析病人每日丢失蛋白,易于出111现纳差、神疲乏力、面色萎黄等以脾虚为主的证候,应用人徐大基等2(黄芪30g,党参参养荣汤可增加病人食欲,增强消化功能,提高血清白蛋30g,丹参30g,30g,何首乌15g,枸杞子15g,白术白,改善营养不良。杨永铭等7应用该方治疗慢性肾衰竭10g,大黄10g)治疗慢性肾衰竭血液透析患者,结果显示补腹膜透析患者40例,结果

13、治疗组血清总蛋白(Tp)、ALB和益脾肾中药能够减少透析患者感染的发生率,改善临床症Hb与对照组相比较均有显著提高。状及营养状态,配合促红素(EPO),在减少EPO总用量的宁越峰等8运用加味八珍汤(人参、黄芪、当归、川芎、情况下仍有明显的改善贫血作用。提示健脾补肾中药的协白芍、熟地黄、白术、砂仁、山药、枳实、山楂、阿胶)治疗维同改善肾性贫血的作用可能与改善机体的营养状态有关。持血液透析营养不良患者,对照组行血液透析同时服用肾李培旭等3用肾衰灵制剂(生晒参、酒杜仲、白术、藿灵,加味八珍汤组患者的血清Tp及氨基酸浓度均较治疗前香、炒川军)治疗41例慢性肾衰竭患者,消化道症状明显改有显著增加,营养不

14、良状况得到改善。善,血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平降低,血红蛋白冯松杰等9应用强生胶囊(党参10g,白术10g,茯苓(Hb)、血清白蛋白(ALB)水平提高,营养状况改善,疗效优10g,陈皮5g,枳壳5g)治疗维持性血液透析营养不良患者于对照组包醛氧化淀粉组,其疗效随肾功能损伤程度加重32例,2个月为1个疗程。结果显示治疗后患者临床症状材32倍量的水,在1960MHz微波频率下提取14min,结果参考文献灵芝多糖得率为6186%。1国家药典委员会.中华人民共和国药典(2005版)S.北京:传统的数理统计往往采用正交设计或均匀设计9,寻化学工业出版社,2005:205.求最佳的因素水平组

15、合,但不能在给出的整个区域上找到2李建军,雷林生,余传林,等.灵芝多糖抗肿瘤作用的免疫学因素和响应值之间的一个明确的函数表达式,从而无法找相关性研究J.中药材,2007,30(1):71-73.到整个区域上的因素的最佳组合和响应的最优值。响应面3罗少洪,陈伟强,黄韬,等.灵芝多糖对高血脂大鼠血脂水平分析法是通过中心组合实验研究几种实验因素间相互作用的影响J.广东药学院学报,2005,21(5):589-590.的一种回归分析方法,具有周期短,实验次数少,回归方程4田庚元,冯宇澄,林颖.植物多糖的研究进展J.中国中药杂志,1995,20(7):441.精确度高等优点,并能从图形方面分析寻求最优实验考察5李钟玉,张京东,李临生.超声波法提取灵芝多糖的研究J.因素。该实验利用响应面分析法所得灵芝多糖微波提取最中国食用菌,2004,23(2):42-44.佳工艺,具有操作方便、重复性好、提取效率高等优点,可用6张自萍.微波辅助提取技术在多糖研究中的应用J.中草于灵芝多糖的提取。药,2006,37(4):630-631.