α干扰素中和抗体对慢性病毒性肝炎疗效的影响

1、    干扰素中和抗体对慢性病毒性肝炎疗效的影响        【摘要】目的探讨慢性病毒性肝炎患者中-干扰素(IFN)中和抗体(NA)的产生及其对干扰素疗效的影响。方法采用抗病毒中和生物测定法检测了30名健康人及116例经三种亚型IFN治疗的慢性病毒性肝炎患者血清中的NA。结果健康人及IFN治疗前的患者中未检出NA，治疗后共20例(17.2%)NA阳性。NA在IFN治疗后2个月即可出现，6个月达高峰(20例全部阳性)，至9个月后则有所下降。其中IFN 2a、IFN 2b和IF

2、N 1b治疗组的NA阳性率分别为34.6%、13.2%和11.5%。NA阳性组、高滴度组的病毒阴转率明显低于NA阴性和低滴度组(P<0.01; P<0.05)。而NA阳性组病毒复发率则显著高于NA阴性组(P<0.05)。结论IFN治疗后可产生NA，且具有一定的时间规律性。不同亚型的IFN其NA的产生率不同。NA可中和IFN的活性而影响干扰素的抗病毒疗效。【主题词】干扰素-抗体，病毒中和试验肝炎病毒抗病毒中和生物测定法 The influence of interferon alpha neutralizing antibodies on the therapeutic eff

3、ectiveness in patients with chronic viral hepatitisTONG Fuyi*, TANG Yonghuang, BAI Jingyu.  * Institute of Hepatology, Changzhou Third Peoples Hospital, Changzhou 213001【Abstract】ObjectiveTo study the influence of interferon alpha (IFN-) neutralizing antibody (NA) on the therapeutic effectivene

4、ss of IFN-.Methods30 healthy persons and 116 patients with chronic viral hepatitis treated with IFN- were studied, and the NA in their sera were tested by using the antiviral neutralizing bioassay (ANB). ResultsNone was positive for NA in sera of the healthy persons and patients before IFN- treatmen

5、t, 20 of 116 patients devoloped NA after IFN- therapy, the positivity was 17.2%(20/116). NA appeared after 2 months of IFN treatment, all 20 patients were positive after 6 months. The NA positivity in treated groups of IFN- 2a、IFN- 2b and IFN- 1b were 34.6%、13.2% and 11.5% respectively. The clearanc

6、e rates of virus in NA-positive group and NA high-titered group were significantly lower than those in NA-negative group and NA low-titered group (P<0.01 and P<0.05, respectively) In contrast, the relapse rates of virus in NA-positive group was markedly higher than that in NA-negative group (P

7、<0.05).ConclusionNA may develop with its regularity in the chronic viral hepatitis patients treated with IFN. The frequencies of NA development are related with the subtypes of IFN used. NA can inhibit IFN activity, thereby affecting the therapeutic effectiveness of IFN.【Key words】Interferon alph

8、aAntibodies,viralNeutializativeHepatitis virusAntiviral neutralizing bioassay目前-干扰素(IFN-)已成为病毒性肝炎抗病毒治疗的主要药物。实践表明，IFN不仅能有效地防止肝炎进一步慢性化，改善临床症状，而且还能明显抑制慢性肝炎患者肝组织病变的活动，缓解病情。然而，仍有部分患者对IFN治疗无反应或仅有短暂反应后再次复发。原因之一与机体产生了抗干扰素的抗体，特别是能够中和IFN生物学活性的中和抗体(NA)有关1，2。国内有关生物学方法测定IFN-中和抗体的报告不多3。我们曾探讨过NA产生的时间规律性4。继后，又采用抗病毒

9、中和生物测定法检测慢性病毒性肝炎患者血清IFN-中和抗体，旨在探讨NA的产生对干优素疗效的影响。1材料和方法1.1研究对象116例慢性病毒性肝炎患者，来源于19951996年的住院病例。所有病例均符合1995年北京第五次全国传染病寄生虫病学术会议修订的病毒性肝炎诊断标准5。其中；男78例，女38例；年龄1949岁。慢性乙型肝炎88例，慢性丙型肝炎28例。排除合并其他类型病毒感染及药物性、自身免疫性肝病。IFN治疗包括使用IFN 2a 26例，IFN 2b 38例，IFN 1b 52例。治疗剂量均为3 mU/次，每周3次，肌肉注射。疗程6个月，随访6个月。基础用药为维生素B、C及肌苷等，不用免疫

10、抑制剂。治疗前及治疗开始后每月末定期采血，直到随访结束。并以30名健康人(男18例，女12例，年龄1848岁；均未用过IFN及免疫抑制剂)血清作对照。1.2材料方法测定细胞采用人羊膜Wish细胞株，攻击病毒选用水泡性口炎病毒(VSV)，均由湖南医科大学提供。IFN 2a(Referon):瑞士Roch公司生产；IFN 2b(Intron A):美国Scheing-Plough公司生产；IFN 1b(Sinogen):深圳Kexing公司生产。测定干扰素中和抗体采用抗病毒中和生物测定法，参照文献3，4进行。即以VSV攻击Wish细胞，观察干扰素对细胞的保护作用。细胞病变程度分为04级，以细胞出现

11、3级或3级以上病变为阳性标准，血清最高稀释倍数作为其效价。并设置有关对照。对治疗血清予以相应亚型的IFN进行中和试验，以测定NA，对照组则以上述3种亚型的IFN进行中和试验以测定NA。对结果采用四格表的2检验及确切概率法进行统计学处理。2结果2.1干扰素中和抗体的产生率对照组32名健康人中，NA全部阴性。治疗组116例患者中，IFN治疗前未测得NA。治疗及随访过程中共有20例NA阳性，总检出率为17.2%(20/116)。各IFN治疗组NA的产生率见表1。表1IFN治疗组的中和抗体检出率Tab.1Neutralizing antibody detection ratesin -IFN trea

12、ted groups组别Group治疗用药IFN used例数Case no.阳性例数Positive no.检出率(%)Detection rate(%)IFN2a26934.6IFN2b38513.2IFN1b52611.5合计1162017.2     注：与或与比较：P<0.05；与比较：P>0.05.Notes:When comparcd with or , P<0.05. when compared with ,P>0.052.2中和抗体产生的时间规律20例NA阳性患者中，IFN治疗第1个月均未检测到NA；第2个月有4

13、例NA阳性；第3个月有16例阳性；第45个月有18例阳性；第68个月20例均为阳性；第910个月有1例NA消失，即19例阳性；第1112个月有18例阳性。2.3中和抗体对干扰素疗效的影响20例NA阳性患者中，IFN治疗结束时，有5例(HBV DNA 4例，HCV RNA 1例)血清病毒阴转，随访中有3例复发；而96例NA阴性患者中，有59例(61.5%，HBV DNA 39例，HCV RNA 20例)病毒阴转，随访中有8例(13.6%，HBV DNA 6例，HCV RNA 2例)复发。病毒总阴转率为55.2%(64/116)，总复发率为17.2%(11/64)。2.4中和抗体滴度对干扰素疗效的

14、影响在20例NA阳性患者中，测得NA滴度在1200至16 400之间。其中滴度11 600者有15例，其病毒阴转只有1例；而NA滴度<11 600者有5例，其病毒阴转有4例。3讨论干扰素抗体有中和抗体(NA)和非中和抗体(结合抗体)之分。中和抗体可以中和干扰素的生物学活性，其检测意义较大。测定干扰素抗体目前至少有4种方法，抗病毒中和生物测定法检测的是针对于IFN生物活性有关的抗原决定簇的抗体。Vallbracht等6首次报道在IFN治疗患者血清中，应用生物学方法检出了能够中和IFN活性的IgG抗体。本组32名健康人及IFN治疗前的患者血清中，均未检测到NA。可能与机体免疫系统未接触到外来

15、IFN抗原有关。而116例治疗后患者检测到20例阳性，表明IFN治疗后可产生NA，但总的阳性率较低(17.2%)。不同亚型的IFN，其NA的产生率有所不同(表1)，这可能与IFN本身抗原性的差异有关，如IFN 2a在氨基酸排列第23位点上，以赖氨酸分子取代原天然排列的甘氨酸，而IFN 2b则以精氨酸取代甘氨酸。NA的产生具有一定的时间规律性。IFN治疗2个月即可出现NA，3个月NA大幅度上升，6个月达高峰，直至9个月后则有所下降。因此临床延长IFN疗程并不影响NA的产生。NA与IFN疗效的关系尚存在争论，如Graxi等7认为，NA不影响IFN的抗病毒疗效。而多数报告认为中和抗体能降低血清IFN

16、水平，中和IFN的抗病毒作用。Lok等8研究证实，HBV DNA已转阴的乙肝患者若出现NA，其HBV DNA可再度阳转。Roffi等9研究慢性丙肝容易复发的原因之一，即由于NA的出现使临床治疗反应消失。刘国珍等3研究结果也提示，NA的产生是影响IFN近期和远期疗效的重要因素之一。我们的研究显示，IFN治疗结束后，NA阳性患者血清病毒阴转率(5/20)明显低于NA阴性者(61.5%)，P<0.01，而前者复发率(3/5)大于后者(13.6%)，P<0.05。故我们的研究亦表明，NA与IFN疗效密切相关，NA可中和所使用的IFN，从而降低IFN的疗效。另外，NA滴度的高低也与IFN疗效

17、密切相关。高滴度的NA(滴度11 600)者，病毒阴转率(1/15)明显低于低滴度的NA(滴度<11 600)(4/5)，P<0.05。Lok等8研究也证实，高滴度NA的治疗反应明显低于低滴度NA。这均表明NA滴度愈高对IFN疗效影响愈大。此进一步证实NA抑制了IFN的抗病毒活性。由于各亚型IFN治疗NA的产生率有差异，且有些IFN产生的NA间无明显交叉反应10，因此临床上当某亚型IFN治疗因NA产生而致效果下降时，可试换用其他亚型的IFN，有可能提高其疗效。我们认为，中和抗体可作为干扰素疗效考核指标之一，并可用于指导临床选择病例，判断预后。检测干扰素中和抗体具有较大的临床意义。作

18、者单位：童福易、白敬羽  213001江苏省常州市第三人民医院肝病研究室 唐永煌  暨南大学医学院第一附属医院参考文献1Steis RG, Smith JW, Urba WJ, et al. Resistance to recombinant interferon alpha-2a in hairy cell leukemia associated with neutralizing anti-interferon antibodies. New Eng1 J Med, 1988, 318:1409-1413.2Von Wussow P, Hartmann F, Freun

19、d M, et al. Leukocyte-derived interferon-alpha in patients with antibodies to recombinant IFN-alpha 2b. Lancet, 1988, 1:882-883.3刘国珍，胡国龄，谭德明，等.干扰素中和抗体对干扰素疗效的影响.中华传染病杂志，1997，15：197-199.4童福易，唐永煌，白敬羽，等.病毒性肝炎患者-干扰素中和抗体发生率及其时间规律的研究.临床肝胆病杂志，1999，15：38-40.5中华医学会传染病寄生虫病学会.病毒性肝炎防治方案(试行).中华传染病杂志，1995，13：241-2

20、47.6Vallbracht A, Treuner T, Flehmig B, et al. Interferon neutralizing antibodies in a patients treated with human fibroblast interferon. Nature, 1981,287:496-498.7Craxi A, Dimarco V, Volpes R, et al. Anti-alpah interferon antibodies after alpha interferon treatment in patients with chronic viral hepatitis. Hepato-gastroenterol, 1988,35:304-305.8