中国农业大学02-06年生物化学博士试题(共3页)

1、精选优质文档-倾情为你奉上中国农业大学02-06年生物化学博士试题 wolfliu(金币+2,VIP+0):3QS! LZ辛苦啦！2002年一、名词解释：（20分）1.同源蛋白质 (homologous protein) 2. 构型 (configuration)3.构象 (conformation) 4. 钙调蛋白(calmodulin, CAM or CaM)5.逆转座子(retrotransposon)二、以动物细胞或植物细胞为例说明细胞中的膜结构及其功能。（12分）三、在研究位置基因的功能时往往采用推定的该基因所编码的氨基酸序列与已知功能的蛋白质的氨基酸序列比较来推断，你认为这种比较应

2、采用什么原则？为什么？（12分）四、真核基因在原核细胞中表达的蛋白质常常失去生物活性，为什么？举例说明。五、简述信号肽的结构特点、功能和从蛋白质产物中切除的机理。（12分）六、分子筛、离子交换和亲和层析是三种分离、醇化蛋白质的方法，你如何根据所要分离、纯化的蛋白质的性质选择使用。（12分）七、酶联免疫吸附实验（ELISA）的基本原理是什么？如何用此方法检测样品中的抗原和抗体？（12分）八、某一个蛋白，SDS凝胶电泳表明其分子量位于16900于37100标准带之间，当用巯基乙醇和碘乙酸处理该蛋白后经SDS凝胶电泳分析仍得到一条带，但分子量接近标准带13370处，请推断此蛋白质的结构？为什么第二次

3、用前要加碘乙酸？2003年一、简要解释下列名词（每词5分，共30分）1、寡糖与多糖2、端粒酶3、酮体 4、生糖氨基酸与生酮氨基酸 5、终止子和终止因子 6、分子伴侣（molecularchaperone）二、以下问答题任选7题回答（每题10分，共70分）：1、简述关于生物膜运输的分子机制的几种主要假设以及他们间的相互关系。2、蛋白质磷酸化和去磷酸化的生物学意义是什么？3、请解释酶促反应的前馈和反馈（feedforward 和 feedback）及其意义。4、什么机制保证了DNA复制的准确性？5、神经和肌肉等细胞活动的直接供能者是ATP。然而，ATP在细胞中含量很低，在哺乳动物肌肉中仅3 - 8

4、mmol / kg。问：是否存在其它的贮能物质，又是怎样“运作”的呢?6、为什么C4植物即使在大气CO2 浓度很低时其光合效率仍很高？7、逆转座子广泛存在于真核生物基因组中，简述它的生物学意义并说明原因。8、DNA重组中同源重组是最基本的重组方式，它的过程是什么？有什么意义？2004年一分离纯化蛋白质是根据蛋白质的哪些性质进行的？举例说明3种层析的操作（解释溶液的盐离子浓度、PH值等变化）及其原理。(20分)二试举一例说明激素介导的信号转导的生理意义和作用机制。(20分)三 简述两类真核细胞蛋白质降解的机制以及它们的生物学意义。(20分)四 基因HOR的转录受激素X的正调控。试设计实验分析鉴定

5、其顺式作用元件（cis-elements）、反式因子(trans-factors)及其调控模式。(20分)五 在应用重组DNA技术表达某些蛋白时，经常在表达的蛋白末端加上一段氨基酸序列作为标签(tag)。说明标签序列在生物学研究中的应用。(20分)六 举23例说明组蛋白翻译后修饰的机制及其生物学意义。(20分)七 简述miRNA（microRNA）和siRNA的结构和功能。（20分）2005年1. 在研究蛋白与蛋白间相互作用时，酵母双杂交和免疫共沉淀是较常用的方法。请简述两种方法的原理。（15分）2说明产生自由基的常见途径，并写出两个抗氧化保护酶。（10分）3SDS(Sodium Dodecy

6、l Sulfate)是生化中常用试剂，请说明它在聚丙烯凝胶电泳测定蛋白质分子量中的作用以及它在碱裂解法提取pUC18质粒DNA中的作用。（10分）4请设计实验，纯化在大肠杆菌中表达的Taq DNA polymerase(Taq DNA 聚合酶)并鉴定其纯度和生物学活性。（20分）5现在，在药店购买抗生素时，一般要求出示医生处方，以避免抗生素的滥用。请说明细菌产生对抗生素耐药性的生物化学机制。（15分）6随着石油能源的减少，可再生能源的利用越来越重要，利用发酵工程产生的乙醇是一种可能的石油替代产品。请说明酵母在无氧条件下，将丙酮酸转化为乙醇的生化反应过程（包括中间产物和所需要的酶和辅酶）。（15

7、分）7在高等生物蛋白组学研究中发现，逆境条件下某蛋白A含量远远高于它在正常条件下的含量，但是在mRNA水平上检测表明在逆境条件和正常条件下此基因的表达水平基本一致。请根据你所学的知识说明其可能的表达调控机制。（15分）2006一、名词解释（每题3分，共30分）1.RNA编辑（RNAediting） 2.翻译扩增 3.顺反子：4.C值悖论：5.基因家族： 6.甲基化延迟： 7.割裂基因： 8.SD序列： 9. 减色效应： 10. DNA芯片：二、简答题（每题8分，共40分）1. 简述PCR技术的原理2简述色氨酸操纵子中弱化作用的原理3.简述外显子捕捉的原理4. 简述扣除杂交的原理：5简述DNA协

8、同复制的机制四、论述题（共30分）1. 试述蛋白质合成产物的后加工过程 (10分)2. 叙述将外源基因导入原核细胞和真核细胞的常用方法（20分）物理方法 1.1 DNA直接注射法: 是目的基因导入的最简单方法, 但注入量有限, 能够接触到的肿瘤细胞有限,故获得的肿瘤细胞转化率很低, 多通过肿瘤局部多点注射给药。 1.2 颗粒轰击技术:将目的基因包被金属以后,利用高压发射装置, 加速包裹目的基因的金属颗粒进入细胞,从而提高肿瘤细胞的转化率。 2 化学方法 即用化学方法构建非病毒载体系统，借之完成基因转导。主要包括以下两种。 2.1 脂质体载体：方法具有安全、简单、低毒、无免疫原性等优点，适用于注

9、射方法进行器官靶向性转移并有一定的转移效率。是除病毒载体转移方法之外的另一种有价值的体内基因转移方法。多用于体外转化细胞，或通过瘤组织内注射1进行体内转化,并已有少数临床应用的报告。目前常用的是阳离子脂质体(商品名为Lipofectin)。它可自发的与DNA形成复合物，保护外源DNA不被核酸酶降解，具有制备简单、安全无毒、无免疫原性、重复性、对基因片段大小无限制且转染操作方便等优点。由于它可与细胞膜直接融合而能有效地避免溶酶体破坏，故远比传统的脂质体效率高。缺点是靶向性有限。Nishikawa等2从BALB/c小鼠的尾静脉注射以荧光素酶基因为报告基因的质粒DNA-脂质体复合物， 发现肺、肝、脾

10、等器官组织中都有荧光素酶基因及其产物，持续表达超过3个月。常规脂质体易被网状内皮系统(RES)细胞摄取，在巨噬细胞本身可成为靶细胞的部位，RES的这种亲合性是有利的。Hasegawa等3采用日本血凝病毒( hemagglutinating virus of Japan , HVJ)脂质体为载体，用HSV-tk/Gcv系统治疗肝癌发现，在体外试验中当Gcv的浓度100microg/ml时几乎所有肿瘤均被杀死，甚至当转导率只有20时，也有1/3肿瘤被消灭。此方法重复应用效果更佳，且皮下注射未见明显的炎症反应。 2.2 受体介导法：利用肝细胞上富含转移因子和糖蛋白受体的特点，人工合成多聚阳离子氨基酸

11、，进而连接转移因子(或糖蛋白)和目的基因构成复合物，通过与肝细胞表面的受体结合来实现目的基因的转移。此法靶向性好，但受体介导的内吞小泡会被转运到溶酶体，易被溶酶体降解而造成目的基因表达时间短暂，表达效率低下。利用氯哇抑制溶酶体酶或腺病毒与内吞小泡相融合而将其破坏释放出外源DNA，可提高转化效率。 3 生物学方法 主要通过构建病毒载体来完成。 3.1 逆转录病毒(retrovirus，Rv):构建简单，装载外源基因容量最大达8kb，整合入宿主细胞基因组而无病毒蛋白表达。但仅能感染分裂期细胞，体外制备滴度较低，且其随机整合有引起“插入性突变”的可能4。 3.2 腺病毒(adenovirus, Ad

12、v): 为近年肝细胞肝癌基因治疗中报告最多的一种病毒载体5。体外制备滴度较大 ，装载外源基因容量最大达35kb，不整合入宿主细胞基因组因而避免插入突变的危险，能感染分裂细胞和非分裂细胞。但易引起宿主免疫反应而使转染效率下降，且大剂量静脉给予可导致严重的肝脏炎症反应，因此通过全身给药受到限制。Nagao等6发现瘤内注射重组Adv后，目的基因可有效表达，但表达时间短暂，重复注射后表达效率降低且诱发体液和细胞免疫反应。 3.3 单纯疱疹病毒：单纯疱疹病毒(herps simplex virus，HSV)对非分裂细胞有天然的亲合力，装载外源基因容量达30kb，体外制备滴度接近腺病毒。但构建时难以除去与裂解细胞有关的基因而对细胞毒性大7。 3.4 腺相关病毒：腺相关病毒(adeno-associated virus，AAV)在人类不引起任何病理性后果，它能感染非分裂S相细胞，还能将基因转人非周期(noncyling)肿瘤细胞。AAV是一种缺陷前病毒，对人类无致病性。能用于运载外源性重组基因组，已应用于肝和肝癌细胞的治疗基因转移8。 3.5 其他病毒：痘