五指毛桃水提液对辐射致小鼠肺细胞DNA损伤的保护作用研究

1、五指毛桃水提液对辐射致小鼠肺细胞DNA损伤的保护作用研究王晓平1，黄翔2，段丽菊3，陆奇丰1，岑业文（1.玉林师范学院化学与生物系，玉林市537000；2.玉林师范学院体育系，玉林市537000；3.郑州大学公共卫生学院，郑州市450001）中图分类号R285；R142.3文献标识码A文章编号1001-0408（2011）03-0201-0360摘要目的：研究五指毛桃水提液对60Co射线致小鼠肺细胞DNA损伤的保护作用。方法：Co射线单次全肺照射复制小鼠肺损伤模型，实验设计分辐射前给药、辐射后给药2个模块，各模块分阴性对照组、辐射模型组和五指毛桃水提液高、中、低剂量（20、10、5g·

2、;kg-1）组，灌胃给药，连续7d，通过单细胞凝胶电泳技术检测肺细胞DNA损伤情况。结果：各模块的辐射模型组小鼠肺细胞DNA的尾部DNA百分率（TailDNA）和尾矩（TailMoment）高于阴性对照组（P0.01）；各给药组的TailDNA和TailMoment均显著低于辐射模型组（P0.01），且随着给药剂量的增加，TailDNA和TailMoment逐渐降低。结论：五指毛桃水提液对辐射造成的小鼠肺细胞DNA损伤有一定的保护作用。关键词五指毛桃；DNA损伤；单细胞凝胶电泳；防治作用；辐射PreventiveEffectofAqueousExtractfromFicussimpliciss

3、imaonRadiation-inducedDNAInjuryofLungCellsinMiceWANGXiao-ping，LUQi-feng，CENYe-wen（Dept.ofChemicalandBiology，YulinNormalCollege，Yulin537000，China）HUANGXiang（Dept.ofPhysicalEducation，YulinNormalCollege，Yulin537000，China）DUANLi-ju（CollegeofPublicHeath，ZhengzhouUniversity，Zhengzhou450001，China）KEYWORDSF

4、icussimplicissima；DNAinjury；Singlecellgelelectrophoresis；Preventiveeffect；Radiation放射治疗是肺癌、食管癌和乳腺癌等胸部肿瘤的主要治疗手段。在治疗过程中，正常肺组织不可避免地受到射线照射而造成损伤，从而引起危害较大的并发症，严重影响患者的生存质量。辐射作用于机体后，可直接作用于DNA等生物大分子，使分子变性和细胞结构破坏，并可产生大量的自由基，进而引起一系列损伤1。目前，对放射性肺损伤的临床治疗主要是使用肾上腺皮质激素联合抗生素，但疗效不理想，而且激2素治疗易引起肿瘤复发和转移。细胞保护剂氨磷汀可一定限度地保护正

5、常组织，但存在较大毒副作用，且价格昂贵3。因此，寻找高效、低毒的放射性肺损伤防治药物，已成为当今研究的热点。中药毒性低，来源广泛，在防治放射性损伤的研究中显示出巨大的优势和潜力。五指毛桃是华南地区广泛使用的一种中药，具有健脾益气、化湿舒筋、益肺止咳之功效4。近年来的研究表明，五指毛桃能够抑制细胞内自由基反应，具有抗脂质广西教育厅科研项目（200809MS124；200911MS195）副教授。研究方向：药理学、生理学。电话E-mail：sywxp年第3过氧化作用5。本研究以60Co射线照射小鼠建立放射性肺损伤模型，应用单细胞凝胶电泳技术，探讨五指毛桃对辐射引起的小鼠

6、肺细胞DNA损伤的防治作用，为五指毛桃这一天然抗辐射药物在临床上改善辐射损伤的应用提供科学依据。1.1仪器与材料仪器FYC-50H60Co治疗机（上海医用核子仪器厂）；DYY-型电泳槽、DYY-11B型三恒电泳仪（北京市六一仪器厂）；BX51·R-32FB3F01正置荧光相差生物显微镜（日本Olympus公司）；150万相素接口数字功能输出相机（CCD，日本Nikon公司）；L420台式低速自动平衡离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）。1.2试药五指毛桃购自玉林市中药材公司，经笔者鉴定为真品；正常熔点琼脂糖（NMA）、低熔点琼脂糖（LMA）均购自美国Sigma公司；TritonX-1

7、00、十二烷基肌氨酸钠、溴化乙锭（EB）均购自美国Premega公司；二甲亚砜（DMSO）、乙二胺四乙酸二钠（Na2EDTA）、三羟甲基氨基甲烷（Tris-base）和氢氧化钠Pharmacy2011Vol.22·201·（NaOH）均为国产分析纯。1.3动物SPF级昆明种小鼠80只，6周龄，体重（20±2）g，购自广西医科大学医学实验动物中心（动物生产许可证号：SCXK桂2009-0002）。DNA百分率和彗尾长度的乘积。2.4统计学方法试验结果以±s表示，采用Origin7.0统计分析软件进行数据分析。3结果2.1方法与结果五指毛桃水提液的制备五指毛

8、桃水提液的制备参照文献6方法略加改进：取五指毛桃干燥药材，用10倍体积的蒸馏水浸泡1h，加热煮沸3h，趁热滤取药液；再加8倍量体积蒸馏水，煮沸30min，合并2次滤液，浓缩至相当于生药2g·mL-1。4贮藏，用时稀释至所需浓度。2.2复制模型及分组80只小鼠适应性饲养7d后，随机分为2个模块，即辐射前给药和辐照后给药。辐射前给药模块的给药方式为先ig五指毛桃水提液，每天1次，连续7d，最后一次给药1h后照射；辐射后给药模块的给药方式为先照射，后ig五指毛桃水提液，每天1次，连续7d。每模块各5组，即阴性对照（Control）组、辐射模型（IR）组、辐射+低剂量给药（IR+LD）组、辐

9、射+中剂量给药（IR+MD）组、辐射+高剂量给药（IR+HD）组，每组8只。五指毛桃水提液低、中、高剂量按相当于生药5、10、20g·kg-1给予，control组、IR型组给予等量生理盐水。除control组外，其余组小鼠进行60Co射线单次全肺照射，照射率为182.28cGy·-1min，照射野为18cm×18cm，照射距离为75cm，照射剂量为6Gy。-1新配制的电泳缓冲液（1mmol·LNa2EDTA，300mmol·-1LNaOH，pH13.0）浸泡20min，以便双链DNA解螺旋。室温下调节缓冲液液面高低，于19V、190mA下电泳

10、20min。随后将玻片浸入0.4mol·L-1Tris-base缓冲液（pH7.5）中，中和30min。DNA和TailMoment与Control组比较均显著升高（P0.01），提示复制模型成功。IR+LD、IR+MD、IR+HD组的TailDNA和TailMoment均显著低于IR组（P0.01），且随着给药剂量的增加，TailDNA和TailMoment逐步降低。辐射前给药IR+HD组的TailMoment与Control组比较无显著差异（P0.05）。五指毛桃水提液对小鼠肺细胞DNA的影响见表1。（x±s）表1五指毛桃水提液对小鼠肺细胞DNA的影响Tab1Effec

11、tofaqueousextractfromF.simplicissimaon（x±s）DNAoflungcellsinmice组别Control组IR组IR+LD组IR+MD组IR+HD组#与control组比较：P0.01；与IR组比较：P0.01#vs.controlgroup：P0.01；vs.IRgroup：P0.014讨论放射治疗是恶性肿瘤的主要治疗手段之一，但在胸部肿瘤的放射治疗中，部分肺组织不可避免地受到一定剂量的射线照射而损伤。其中，肺组织DNA是辐射的主要靶分子。很多实验证实，肺损伤的重要原因之一是氧自由基的生成。氧自由基能损伤内皮细胞膜，增加肺毛细血管的通透性，引

12、起肺水肿和肺气体交换受损7。本研究结果表明，小鼠经6Gy60Co射线照射后，肺细胞的TailDNA及TailMoment升高，表明60Co射线可引起小鼠肺细胞DNA链的断裂。DNA链断裂是辐射所致生物效应中最重要的原初损伤8，被认为是启动和促进肿瘤发生发展的重要因素。当肺细胞DNA链断裂后，基因不能正常表达，造成细胞错误生长，机体内各项活动受到干扰。中医理论认为，辐射引起的肺损伤属于热毒伤津、气阴两虚、肺失宣肃证，治疗以益气养阴、润肺止咳、清热解毒、健脾9和胃为主要治则。临床与实验研究表明，一些具有清热解毒、养阴益气、活血化瘀功效的中药具有不同程度的预防和治11疗放射性肺损伤的作用10，。五指

13、毛桃具有益气补虚、行气解12郁、健脾化湿、止咳化痰的功效，在临床上广泛使用。本研究结果表明，在辐射前和辐射后给予五指毛桃水提液均可使小鼠肺细胞的TailDNA及TailMoment值降低，提示五指毛桃对60Co射线造成的小鼠肺细胞DNA损伤有一定的保护作用。五指毛桃含有丰富的生物碱、补骨脂素和多糖等活性成分，这些物质具抗氧化作用，能提高机体的免疫力，对辐射损伤有一定的防治作用。五指毛桃对辐射肺损伤有一定的疗效，但其抗辐射损伤机制有待于进一步研究。参考文献中国药房年第22卷第3期参麦注射液增强羟基喜树碱对肿瘤血管生成的抑制作用研究1刘萍1，沈培强2，吴东方（1.武汉大学中南医院药学部，武汉市43

14、0071；2.正大青春宝药业有限公司，杭州市310023）中图分类号R285；R979.1文献标识码A文章编号1001-0408（2011）03-0203-03摘要目的研究参麦注射液联合羟基喜树碱对肿瘤血管生成的影响。方法：将人结肠癌细胞株（CW-2）细胞分为4组，即空白、参麦、羟基喜树碱、联合用药组。分组后的CW-2细胞培养12h，制得条件培养液，条件培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC），MTT法检测细胞生存率，并用细胞培养小室检测其细胞迁移活性。结果：与空白组比较，其他3个用药组的HUVEC生存率和迁移活性均显著降低（P0.05）；联合用药组与参麦组、羟基喜树碱组比较，HUVEC生存率和迁移

15、活性则进一步降低。结论：参麦注射液联合羟基喜树碱可增强对肿瘤血管生成的抑制作用。关键词参麦注射液；羟基喜树碱；肿瘤；人脐静脉内皮细胞；血管生成；抑制作用InhibitionEffectofHCPTonTumorAngiogenisisEnhancedbyShenmaiInjectionLIUPing，WUDong-fang（Dept.ofPharmacy，ZhongnanHospitalofWuhanUniversity，Wuhan430071，Chi-na）SHENPei-qiang（ZhengdaQingchunbaoPharmaceuticalCo.，Ltd.，Hangzhou31002

16、3，China）ABSTRACTOBJECTIVE：ToexploretheeffectofShenmaiinjectioncombinedwithHCPTontumorangiogenesis.METHODS：CW-2cellsweredividedinto4groups：blankgroup，Shenmaiinjectiongroup，HCPTgroup，ShenmaiinjectioncombinedwithHCPTgroup.CW-2cellswereculturedfor12htoobtainconditionalculturemedium.HUVECwereconditionall

17、ycultured，thensurvivalratewasmeasuredbyMTTassays，migratoryactivitywasdetectedbyTranswellroom.RESULTS：Comparedwithblankgroup，thesurvivalrateandmigratoryactivityofHUVECin3experimentalgroupsalldecreasedsignificantly（P0.05）.Thesur-vivalrateandmigratoryactivityofHUVECinShenmaiinjectioncombinedwithHCPTgro

18、upreducedsignificantly，comparedwithShenmaiinjectiongroupandHCPTgroup.CONCLUSION：ShenmaiinjectioncombinedwithHCPTcouldincreaseinhibitioneffectofHCPTontumorangiogenesis.KEYWORDSShenmaiinjection；HCPT；Tumor；HUVEC；Angiogenesis；Inhibitioneffect参麦注射液是根据“生脉散”的配方研制出的一种静脉注射液，主要原料为红参和麦冬，有效成分为人参皂苷、麦冬皂苷、麦冬黄酮和微量的人参多糖。羟基喜树碱是珙桐类植物喜树的提取物