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文档简介

1、实验二 槐米中芦丁及槲皮素的提取分离及鉴定槐米为豆科植物槐(Sophora japonica L)的未开放花蕾。味苦性凉、具清热凉血、止血之功。常用于治疗多种出血症:肠风便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血、赤血下痢等。槐米常炒炭应用。槐米的主要化学成分为芦丁,其含量可达1216,其次含有槲皮素、三萜皂苷、槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。芦丁具有Vitp样作用,可降低毛细血管脆性和调节通透性。临床上用作毛细血管脆性引起的出血症,常作为高血压症的辅助治疗药。目的要求1通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。2掌握槲皮素的制备原理及操作。3熟悉紫外光谱在黄酮结构鉴定中的应用4

2、通过芦丁的结构检识,了解苷类结构研究的一般程序和方法。实验原理芦丁(rutin):C27H30O16·3H2O,浅黄色针状结晶,mp174178(含三分子水);188(无水物)。难溶于冷水(1:800010000),可溶于热水(1:180200),热甲醇(1:10),冷甲醇(1:100),热乙醇(1:60),冷乙醇(1:650);难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等,易溶于碱液。槲皮素(quercetin):C15H10O7·2H2O,黄色结晶,mp313314(2分子结晶水),316(无水物)。能溶于冷乙醇(1:290),易溶于沸乙醇(1:23),可溶于甲醇、乙

3、酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等;难溶于水、苯、石油醚等溶剂。+鼠李糖+葡萄糖 芦丁为黄酮苷,分子中具有酚羟基,显酸性,可溶于稀碱液中,在酸液中沉淀析出,可利用此性质进行提取分离。利用芦丁易溶热水、热乙醇,较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制。芦丁可被稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖,依此进行制备槲皮素。通过纸色谱及紫外光谱进行黄酮及糖的鉴定。实验内容一、芦丁的提取分离及精制方法槐米粗粉(50g)置1000ml烧杯中,加入500ml饱和石灰水,加热,并维持pH89煮沸20分钟,趁热用脱脂棉滤过滤液 药渣用300ml饱和石灰水煮沸10分钟,维持pH89趁热滤过滤液 药渣(×)

4、合并在6070下用浓HCl调pH至4 5静置,抽滤沉淀低温(80)干燥,称重。按1:200的比例加水, 加热使溶解,趁热滤过滤液静置,抽滤,减压干燥,计算收率芦丁精制品方法 利用芦丁在冷热溶剂中的溶解度不同进行提取分离。槐米粗粉沸水煮沸510分钟,反复2次趁热滤过水提取液 药渣放冷沉淀析出(粗芦丁)热水重结晶或乙醇重结晶芦丁结晶二、槲皮素的制备称取精品芦丁1g置250ml烧瓶中加2%H2SO4200ml加热回流1小时放冷,静置,抽滤酸性滤液 沉淀中和 水洗两次,干燥乙醇重结晶中性滤液 称重,计算收率浓缩 黄色细针状结晶 浓缩液 (槲皮素)(供糖的PC鉴定)三、检识反应1芦丁的定性反应取芦丁适量

5、,加乙醇使溶解,分成三份供下述试验用:(1盐酸镁粉试验:取样品液适量,加2滴浓HCl、再酌加少许镁粉,即产生剧烈的反应,并逐渐出现红色至深红色。(2锆-枸试验:取样品液适量,然后加 2ZrOCl2的甲醇溶液,注意观察颜色变化,再加入2枸椽酸的甲醇溶液,并详细记录颜色变化。(3-萘酚-浓硫酸反应:取样品液适量,加等体积的l0-萘酚乙醇溶液,摇匀,沿管壁缓加浓硫酸,注意观察两液界面的颜色。 2芦丁的UV(1鉴定试剂的配制甲醇钠溶液:取0.25g金属钠,切碎,小心加入色谱甲醇10ml中,此液置于玻璃瓶中,用橡皮塞密封。三氯化铝溶液:取1g无水三氯化铝,小心加入色谱甲醇20ml中,放置24小时后全部溶

6、解即得。醋酸钠:用无水粉末醋酸钠。硼酸饱和溶液:取无水硼酸,加入适量色谱甲醇、制成饱和溶液。(上述贮备液可放置六个月)(2)芦丁溶液的配制精密称取芦丁纯品0.5g,用甲醇适量溶解至50ml容量瓶中,用甲醇稀释至刻度。(3)光谱的测定甲醇光谱:取样品液置石英杯中,至200500nm内进行扫描,重复一次,观察紫外光谱。甲醇钠光谱:取样品液置石英杯中,加入甲醇钠溶液3滴后,立即测定,放置5分钟后再测一次。三氯化铝光谱,在盛有样品液的石英杯中,加入三氯化铝6滴,放置1分钟后进行测定。测定后加入3滴盐酸溶液(盐酸:水1:1)再进行测定。醋酸钠光谱:取样品液约3ml,加入过量的无水醋酸钠固体,摇匀(杯底剩

7、有约2mg的醋酸钠),加入醋酸钠后两分钟内测定,5分钟到10分钟后再测定一次。3芦丁及槲皮素的色谱支持剂:中速层析滤液(5×20cm)展开剂:正丁醇-醋酸-水(4:1:5)上层样品:自制槲皮素的乙醇溶液自制芦丁的乙醇溶液对照品:槲皮素标准品的乙醇溶液芦丁标准品的乙醇溶液显色剂:三氯化铝乙醇溶液喷雾4糖的纸色谱检识支持剂:中速层析滤纸(5×20cm)样品:取水解后的滤液10ml,水浴加热,且在搅拌下加适量碳酸钡细粉至PH中性,过滤,取滤液并浓缩至2mI左右,放冷后,供纸色谱点样用。对照品:1葡萄糖标准品醇溶液及1鼠李糖标准品醇溶液展开剂:正丁醇-醋酸-水(4:1:5)上层显色剂:喷以邻苯二甲酸苯胺溶液,105烘烤5分钟至斑点显色清晰。实验说明及注意事项1用石灰水调节芦丁提取溶液的PH,既可以达到碱提取芦丁的目的,还可以除去槐米中含有的大量粘液质。但钙离子浓度及pH值均不宜过高,否则多余的钙能与芦丁形成螯合物沉淀,同时黄酮母核在强碱性条件下易被破坏。2用HCl调PH时,应注意PH不要过低,因为PH过低(PH2以下)会使芦丁形成钅羊 盐而使已形成的沉淀重新溶解,同时黄酮母核也会在强碱性条件下被破坏,导致收率

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