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文档简介
1、ABO疑难定型精品资料仅供学习与交渡如冇侵权请联系网站制除谢谢2ABO疑难定型一、ABO疑难血型鉴定的方法(一)正反定型:正定型:A, -B, -AB, H, A1反定型:Ac, Be, Oc,自身对照1.ABO 正定型中各种试剂用途疑难定型中正定型用抗血清抗-A 及抗-B抗-AB:确认弱 A 和弱 B 抗原,与弱 A 及弱 B 抗原亲和力强,会产生强反应抗-H:用于检査亚型及孟买型,A 亚盘红细胞上的 H 抗原藝于正常 A 型抗-A1:用于 A 亚型(如 A2, A3)检测2.H抗原在红细胞上的分布0A2A2BAl A1BH 抗原彊多 - H 抗原摄少H 抗原的数量3 ABO 反定型中各种试
2、剂的用途反定型中试剂红细胞的总义A 及 B 细胞:确认抗 7 或抗-B 抗体0 型红细胞:检査是否存在 ABO 系统以外抗体扰 ABO 反定型自身对照:用于确认正反定型结果的有效性,排除自身抗休对定型的干扰(如冷凝集等)精品资料仅供学习与交渡如冇侵权请联系网站制除谢谢3A2 细胞:用于亚型的鉴定,尤其是在怀疑是 A 亚型且又存在抗 71 抗体的情况下(二)型物质测定型物质准备:r2ml 唾液.沸水煮 10 分钟,离心后得到的上淸。标清的调制:标清用盐水稀释至其效价为 1: 16中和:将 0. 5ml 型物质与调制后的标淸 0 5ml 等体枳混合,室温放宜 30 分钟检测:用 Ac 检测中和后的
3、抗-A, Be 检测中和后的抗-B 结果判断:如果抗-A被中和,则被检者为 A 型,如果抗-B 被中和.则被检者为 B 型。(三)吸收放散吸收用 RBC:盐水洗涤 5次的被检者斥积 RBC lml o吸收用的标准血清将斥枳 RBC 和标清按等体积比例混合.在相应的温度条件下(4*0 孵育 1小时.每隔 15 分钟混匀一用盐水洗涤孵育后的细胞 6 次,得到压积 RBC,加入等量盐水。56C 水浴震荡 10 分钟,离心获得上淸即为放散液。用标准试剂红细胞检测放散液。(四)0 型筛选红细胞的应用抗原组成:三组合细胞,要求必须具备全部的 Rh 因子I: 0 型 R1R1 (CDe/CDe) : 11:
4、0 型 R2R2(cDE/cDE) : III: 0 型 rr (cde/cde) 用途:用于受血者、献血员及孕产妇等的 ABO 系统以外不规则抗体的筛选 目的:在配血之前,有针对性、按比例的去寻找与带有抗休的病人相配合的血精品资料仅供学习与交渡如冇侵权请联系网站制除谢谢4(五)自家冷凝集血样的 ABO 定型正定型用红细胞的准备:血样采集后,立即离心,获得压积红细胞用 37C 温盐水洗涤红细胞45C 热放散 3 分钟筑施试剂处理:破坏 IgM 抗休自家冷凝集血样的 ABO 定型反定型用血浆或血淸的准备血样采集后放宜 4C 冰箱静迓 24 小时,使红细胞充分吸收自身冷凝集抗体用自身红细胞吸收去除
5、自身冷抗体用 0 型红细胞吸收去除 ABO 系统以外的非持界性及持界性抗体g 获得性 B1.获得性 B 及笫凝集现奴获得性 B:肠紊乱及感染病人,细菌酶影响 A 抗原的受体肠内壁通透性増加,而后细菌笫糖吸附在红细胞表血餌凝集现象:异常或变形的 RBC 被所有正常人的血清凝集(微生物酶作用暴露或激活膜隐蔽受体女凝集血样中的血清不与自身反应)2.获得性 B 产生的主要机理精品资料仅供学习与交渡.如有侵权请联系网站制除谢谢5肠道细菌篦R-乙旣氨基半乳權 - R-氨基半乳糖 n抗原)脱乙醜C类B )获得性B血清学反应格局正定型反定型抗冶抗B抗B酸化抗BAl B 0自身PH 6.0对照4+1+4+一4+
6、-二.ABO 正反上型不符的问题分析(一)ABO 定型问题经常发生的情况为:1.明显缺失应该出现的抗 7 或抗-B:(1)新生儿血样(2)免疫缺陷.免疫紊乱(3)前带现象(4)血型型物质过筝(5)抗原太弱.常规方法检査不出來.相应血淸中无抗休(6)亚型.反应是昆合视野2.由于试剂被污染,或试剂中有额外抗体3.明显多出抗原(或多出抗体)(1) 亚型.如 A2 型可能血淸中有抗-A1(2) 自家凝集(3) 获得性 B(二)引起 ABO 正反定型不一致的原因分析精品资料仅供学习与交渡如冇侵权请联系网站制除谢谢61.技术閃素:(1) 试剂贮存不当(2) 使用技术错误(3) 使用错误的试剂(4) 使用污
7、染或失效的试剂(5) 离心速度不当2.存在 IgM 性质的自家冷抗体由于自家冷抗体(冷凝集病,CHD)而导致自家溶血的病人, 在低于 37C 时血细胞自发凝集.影响 正反定型。可用 DTT 或 2FE 來处理细胞及血淸來解除此种 IgM 抗体引起的 T扰。血淸的反定型可在 37C 进行.用 0 型红细胞作为对照。3.抗原表达弱或缺失:(1) A. B 抗原的表达可在下述情况下被抑制:a. 白血病b. 双胞胎c. H 基因变异(2) A. B 抗原表达太弱:由于 A、B 抗原表达太弱,与抗 F 或抗 B 不反应,但确实存在 A 或 B 抗 跖因此血清中无相应的抗体。4.高水平可洛性血型物质的病人
8、:极少数有卵集囊肿的妇女,由于含商浓度的可溶性血型物质,使抗原减弱或消失.此血型物质分泌进入血液可以中和抗 7 或抗使用未洗涤的 RBC 用于 ABO 定型时,型物质就会中和抗 7 或抗-B, 引起假阴性反应。精品资料仅供学习与交渡.如有侵权请联系网站制除谢谢75.混合视野:(1) 來自近期输注非 ABO 同型红细胞病人的血样(2) 骨箭移植后不久(3) Tn 或 A3 型红细胞6.缺失或弱抗-A、抗-B(1) 新生儿血淸(2) 免疫缺陷.紊乱病人(3) 老年人7.前带现歛当抗-A 或抗 B 的效价(如 35000) IgG 太高时,立即离心法与 A 或 B 細胞不反应。解决方法:(1) ED
9、TA 抗凝血浆结合钙(2) 使用 EDTA 保存液悬浮细胞(3) 将血浆于 56C 灭活补体(4) 血浆或血淸用盐水 1:10 稀释8.多凝集:女凝集红细胞,具有不正常的膜结构,可被正常成人血清凝集起因是微生物轉引起膜 的改变,以及膜上椭基合成不完善。9.不正常血淸蛋白:白贵白/球蛋白比例失调的血清引起红细胞产生缗钱状假凝集。精品资料仅供学习与交渡如冇侵权请联系网站制除谢谢810.血样血清中存在抗试剂成分的抗体:如抗防腐剂的抗体、抗 EDTA 的抗体等,此种抗体可以通过 将红细胞洗涤而解除 c三、解决 AB0 左型不一致的指导原则(-)出现弱反应或缺失抗原的解决方案出现弱/缺失抗原的可能情况1
10、.A亚型.B 亚型或 AB 亚型2.疾病状态:如白血病导致 A 或 B 抗原减弱,何杰金病(Hodgkin s)有时会抑制抗原表达, 与白血病类似。3.过虽的血型物质:由于某种疾病(如腹腔癌.胰腺癌、卵巢囊肿)导致血浆中存在大虽的型 物质中和抗一 A 或抗- B 抗体,引起正定型为假阴性或弱阳性。通过洗涤红细胞可解决此问题。4.获得性 B5 抗一 A或抗一 B 试剂中存在低频抗原的抗体出现弱/缺失抗原的解决措施1.洗涤 RBC 且延长孵育时间进行试验,如果使用洗涤红细胞后反应加强.则考虑是型物质的抑 制2.的处理红细胞再次试验3.吸收放散确定是否是亚型。4.解输血史(尤其是 0 型红细胞输注)
11、來分析混合视野精品资料仅供学习与交渡如冇侵权请联系网站制除谢谢95.r解病情诊断(尤其是白血病)6.解是否是骨储移植受者7.了解是否是双胞胎8.是否使用从前未使用过的爪克隆抗体血活进行了血型鉴定9.分泌型型物质检査10 进行玫瑰花试验來确定是否混入其它红细胞.或进行细胞分离11 如果是弱 A或弱 B 遗传.则检査红细胞上 H 抗原的表达弱反应或缺失抗原李例正定型反定型抗抗抗上 B- - 1+A 细胞 B 细胞 0細胞自身对艇-3+-患者的正定型与正常反应强度相比屈于减弱的反应。从反定型中可以看出患者血淸中不存 在ABO 系统以外的抗体 T扰.也不存在自身抗体的干扰因和 B 细胞产生反应,表明红
12、细胞上可能具有 A 抗丿京。在正定型中与国产的单克隆抗 7 无反应活性,而和抗-AB 有弱反应.暗示 A 亚型的可能通过吸收放散.型物质检査确认 A亚型。可能是 A3.(二)出现弱反应或峽失抗体的解决描施出现弱反应或缺失抗体由四种情况引起1.年龄:新生儿及老人。2.低球蛋白血症:如白血病人、使用免疫抑止药物.低球蛋白的淋巴瘤病人(恶性)、骨 SS 移 植后病人。3.丙球缺乏血症:如免疫缺陷病人4. 双胞胎嵌合体精品资料仅供学习与交渡.如有侵权请联系网站制除谢谢10解决方案1.延长反应时间2.于室温及 JC 检查血清中的抗体用 A、B、0 及自身红细胞进行检査3.于室温及 JC 检查血清中抗体。
13、用的处理的爪 0 及自身细胞进行检查。可能需要在试验前进行冷抗体的自身吸收4.确定病人年龄及临床诊断(如新生儿、免疫病)5 确定输血史(非 ABO 同型的血浆输注)駛少抗体的反应爭例正走型反定型抗A抗抗AB细胞B细胞0细胞自身对照 1+ -正定型无任何凝集反应I提示为0型J但反定型则提示为B型口补充试验:正反定型分别在室温及 4度孵育 30 分钟可能血型为 0 型,但具有低效价的抗 7(三)出现多余抗原(额外抗原)的解决方案出现女余抗原的可能情况1.抗原发生改变:(1)获得性 B:肠道疾病患者.细菌作用导致(2)多凝集现彖:红细胞被掘大女数人的正常血淸凝集2.红细胞已经被抗体包被:如自家免疫溶
14、血性贫血.输血反应及 HD23 非抗一 A 及抗 B 的抗体与相应抗原形成复合体吸附在红细胞表仏 引起正定型非持界性凝 集。(洗涤红细胞)如抗血清添加剂:染料的抗体与抗体结合附着在红细胞表面导致。精品资料仅供学习与交渡.如有侵权请联系网站制除谢谢1114 混合视野:非同型输注.如 0 型红细胞给其他型输用非 AB0 同型的骨筋移植,A3 亚型 等。5. 低频率抗原抗休反应:定型血清中的存在低频抗原的抗休.与对应的低频抗原产生阳性反 应。解决措施1.将红细胞洗涤再进行试验确定是否是病人或献血员的血清中存在针对ABO定型试剂成分的 抗体2.用 0 型及自家红细胞于室温检查橋人血清,确定血淸中是否有
15、冷自家抗体.如果有.则用 2ME 或DTT 处理。3.用不同厂家的试剂检査洗涤的红细胞4.解病人的临床诊断5.如果怀麺是获得性 B.则用酸化的抗-B 检査6.进行 ABH 分泌型型物质检査7.如果用女克隆抗-A 检査结果是混合视野.则用贵白晦处理 RBC 试验.考虑是否是女凝集出现额外抗原反应爭例正定型反定型抗A抗B抗ABA细腕B细胞0细胞自身对照4+2+4十4十可能血型:A型有获得性B抗原解决方案:询问病史,尤其是下消化道疾病,用酸化的抗-B(pH 6. 0)检査T抗原活化引起正反定型不符正走型反走型抗A抗B抗ABA细腕B细胞0细胞自身对照2+1+4+4+4+-在反定型试验中可以看出,0 型
16、红细胞和自身对照皆为阴性,表明反定型试验结果可整,即 为 0型。而在正定型试验中均为阳性.可能岀现的阳性反应不属于 ABO 系统的抗原抗休反应。需要了解定 型血清是否是人血清來源,并了解被检者的疾病诊断.使用非人血晴來源的标准定型血清來进行正定型。 可能血型为 0精品资料仅供学习与交渡.如有侵权请联系网站制除谢谢12型的多凝集现象。非血型抗原抗体复合怀引起的正反定型不符正定型反定型抗 A 抗 B抗 ABA细腕B细胞0细胞自身对照3 十4十4十可能血型 0,由于抗-B 染料丫噪黄和标清中的相应抗体形成复合物附着在红细胞表面,适成 正定型中出现和红细胞产生 3+的非特异性阳性反应。(四)出现额外抗
17、体:产生未知的抗体反应的可能情况1.蛋白或血浆不正常引起的缗钱状凝集:血清蛋白浓度界常,球蛋白浓度由于疾病而升商(多发性骨髓瘤),原发性居球黃白血症, 纤维蛋白原浓度升商.血浆扩容剂的使用以及何杰金氏淋巴瘤,新生儿脐血中的华通氏胶。2.冷反应性自身抗体:存在 AB0系统的总:外抗体: 如 A2或 A2B个体血淸中可能存在天然抗一 A1,顺式 AB人群中弱 的抗-B,导致反定型试验女岀抗体。3.被检者血淸中存在 AB0 系统以外的特异性冷同种抗休.反定型时出现假阳性反应。(谱细胞 鉴定抗体特异性):如抗-M、抗-N 等.精品资料仅供学习与交渡.如有侵权请联系网站制除谢谢13解决方案1. 于室温及
18、 JC 检查,确定是否存在自身抗体或冷同种抗体2 洗涤红细胞再次进行试验.防止血淸中有针对试剂红细胞保存液成分的抗体自身冷抗体弓I起的正反定型不符正定型反定型抗A抗B抗ABA细腕B细胞0细胞自身对照2+4+4十4+3+2+2+可能是B型在 379 定型.去除冷自生抗体干扰后定型,型物质检测意外同种抗体引起的正反定型不符正定型反定型抗A抗B抗ABA细腕B细胞0细胞自身对照4+4+4+1+ 1+ 1+ 可能血型:AB,可能含有不规则抗体进行抗体鉴定ABO亚型抗体引起的正反定型不符爭例正定型反定型抗A抗B抗ABA细腕B细胞0细胞自身对照4+4十1+4十-可能血型:亚型,可能是A2型有抗岔1解决方案:使用抗-Airfn清进行正定型鉴定ABO正反定型不符爭例正定型反定型抗A抗B抗ABA细腕B细胞0细胞自身对照 4十4十4十-可能血型:(1) Oh孟买型2)或 0
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