种酶的测定--关松荫资料

1、cellulase纤维素酶1分析意义 纤维素是植物残体进入土壊的碳水化合物的重 要组分之一“在纤维素酶作用下它的最初水解产物是纤维二糖。在纤二糖酶作用下，纤维二糖分解成葡萄糖。所以，纤维素酶是 碳素循环中的一个重要酶。臨方法选择及原理在纤维素酶参与下，纤维素最终水解生成葡萄糖。测定土壊纤维素酶主要有以下几种方法t测定加到土壞中的 纤维素物质（布.纸等）的重量变化（剩余量”根据纤维素水解 产物葡萄糖与某些物质（蔥酮、二硝基水杨酸生成着色化 合物进行比色测定*测定加入土壤的纤维素物质的质变化，如粘 度法（纤维素分解时，溶液粘度降低，用粘度计测定人Reese（1951）曾把纤维素酶分为&酶（

2、用不溶纤维素作基 质）和Cx酶（用可溶性拔甲基纤维素作基质人测定纤维素酶选 用的缓冲体系包括磷酸盐缓冲液（pH55或6.8几 醋酸盐缓冲液 （PH5.5J和柠樣酸盐磷馥盐缓冲液（pH55）。蕙酮比色法1试剂配制（1）1%敷甲基纤维素溶液。<2）甲苯。（3 ） PH5.5醋酸盐缓冲液口（4 ）铝钾矶。（5 ）恿酮试剂豈0.2%恵酮溶液（用95%浓HaSO4配制片 往5 mt水中加入100ml浓H2SO4,冷却后加入200ml恿輒 于冰上放置4嘉試剂不稳定，需用前配制。（6）标准葡萄憐濬液1ml标准液含10200严号葡萄糖九 标准曲线绘制；分別取不同浓度标准葡萄糖溶戒2.5ml移于 耐热试骨

3、中*将试管戲置在冰上.缓加5 ml恿酮试剂，摇匀后置于沸水浴中加热lOmin,加热前于试管口放一小玻璃球。取下冷 却后,于分光光度计上54062(Mrn处比色测定。以光密度值为 纵坐标，以葡萄糖浹度为横坐标，绘制标准曲线。2操作步骤 取土壤置于50ml三角瓶中，用E5ml甲 苯处理并加5ml酷酸盐缓冲液(pH55)° 15min后，再加入5 mH%竣甲基纤维素溶液。然后将三角瓶放在37力恒温箱中，培养 72h。培养结束后，将瓶加热至1009以终止反应。为使未水解的 按甲基纤维素絮凝和沉淀，再加入03g铅钾矶。过滤后移于50 ml容量瓶中定容。取2,5ml此液移于耐热试管中加5ml蔥酮

4、试 剂，再按绘制标准曲线的方法步骤进行比色。每一试验处理均应 设置以5ml水代替基质的对照，为检验试剂纯度应设无土壤的对 照。纤维素酶活性，以72h后，10g 土壤生成的葡萄糖的毫克数 表示。硝基水杨酸比色法试剂配制<1)1%拔甲基纤维素溶液。(2 ) pH55磷酸盐缓冲液，由0.06MKH2PO4和NaJIPO. 唇液混合制成。(3) 甲苯。(4) 3, 5二硝基水杨酸溶液(见蔗糖酶测定)。标准曲线绘制：分别取不同浓度标准葡萄糖溶液ln)l移于 25ml容量牺中，加3ml二硝基水杨酸溶液。将试管放在沸腾水 帘上5mim然后迅速冷却3min。定容,i5min后在分光光度计上于波长540n

5、m处比色测定。以光密度值为纵坐标，以葡萄糖 浓度为横坐标，绘制标准曲线。2操柞步骤 称10g 土壤置于50wI三角瓶中,加20ml 1 % 敷甲基纤维素溶液.5nil pH55磷酸盐缓冲液及1.5ml甲苯，将三角瓶放在379恒温箱中培养72ho培养结束后，过滤并定容25ml0取1 ml滤液，然后按绘制标准曲线显色法比色测定。设置对照要求同蔥酮比色法。纤维素酶活性，以72h, 10g 土攘生成筋荀糖毫克数表示。sucrose invertase蔗糖转化酶（1蔗糖IS1分析童义蔗糖酶是根据其酶促基质蔗糖而得名的。艾叫转化酶或B-咲晡果糖甘酶。它对増加土壤中易溶性营养物质起着重嬰的作用。研究证明，蔗

6、糖酶与土壤许多因子有相关性。 如与土壤有机质.氮*磷含量，微生物数量及土壤呼吸强度有关。-般情况下，土壤肥力越高，蔗糖酶活性越强。它不仅於够表征土壤生物学活性强度，也可以做为评价土壤熟化程度和土壤肥力水平的一个指标。签方法选择及原理蔗糖酶能酶促蔗糖水解生成葡萄糖和果 糖。蔗糖酶活性的测定方法有用酶学的方法测量所产生的葡萄糖 滴定法或重量法或是根据蔗糖的非还原性，用生成物（葡蔔糖和果糖/能够还原菲林整液中的铜，再根据生成的氧化亚铜的员求出糖的含量°也可根据蔗糖水解的生成物与某种物质（3,5 二硝基水畅酸或磷酸铜）生成的有色化合物进行比色测定。还有 一种方法，根据蔗糖液酶促反应前后光偏振

7、面的变化（旋光法） 进行测定？目前，我国常用的主要是硫代硫酸钠滴定法，它是测定土壤 蔗糖酶活性的经典方法。3,5二硝基水杨酸比色法重现性较好， 且手续较简便，适于成批样品测定。测定土壤蔗糖酶活性时，均以蔗糖为基贞，蔗糖液浓度范围 为5-20%o在酸性介质中，蔗糖酶活性最大。为保持该酶最适pH,多使用下列缓冲液，醋酸盐缓冲液pH45-55，磷酸 盐緩冲液（pH4955片 醋酸盐一磷酸盐缓冲液（pH55。比色法（1）1试剂配制（1）3,5-二硝基水杨酸溶液；称05g二硝基水杨酸，溶 于20ml 2N氢氧化钠和50ml水中，再加30g酒石酸钾钠，用水 稀释至100ml （不超过7天儿（2）pH55磷

8、酸缓冲液：1/I5M璘酸氢二钠（11.867gNa.HPO42HQ溶于11蒸惬水中0>5ml加1/15M磷酸二氢钾（9078g KH2PO4溶于H蒸憎水中95ml即成。（3）8%蔗糖溶液。（4甲苯。（5）标准葡萄糖溶液，将葡萄糖先充50-58沁条件下， 真空干燥至恒重。然后取500 mg溶于100 ml苯甲槪溶液中（5 mg还原Sf/ml）,即成标准葡萄糖溶液。再用标准液制成1 ml含 0.01O.5iug葡萄糖的工作溶液。标准曲线绘制：取lml不同浓度的工作液，并按与测定蔗糖酶活性同样的方法进行显色，比色后以光密度值为纵座标，葡萄糖浓度为横座标绘制成标准曲线。2操作步骤 称5g风干土，

9、置于50ml三角瓶中，注入15ml8%蔗糖溶液，5mlpH55隣酸缓冲液和5滴甲苯。摇匀混合物 后,放入恒温箱，在37P下培养24h°到时取出，迅速过滤。从中吸取滤液1D11,注入50ml容量瓶中，加3ml 3,5二硝基水杨酸，并在沸腾的水浴锅中加热5min,随即将容量瓶移至自来水 流下冷却3mino溶液因生成3 氨基-5 硝基水杨酸而呈橙黄色，最后用蒸 憎水稀释至50ml,并在分光光度计上于渡长508nm处进行比 色。为了消除土壤中原有的蔗糖、葡萄糖而引起的误差，每一土 样需做无基质对照，整个试验需做无土壤对照。3结果计算 蔗糖酶活性以24h后土壤葡萄糖的毫克数表 示。葡萄糖(毫克

10、=a x 4式中a从标准曲线查得的葡萄糖毫克数4换算成lg 土的系数比色法C2)厶试剂配制(1) 20%蔗糖。(2) 甲苯。PH5.5醋酸盐缓冲液:取120ml冰醋酸用水稀释至lL(a), 取164莒无水CHsCOONa溶于水并稀释至lL(b)o将(a与(b) 二液按1 : 8混合再用电位计校正pH。(4) 0.2M Na2HPO4*12H2OQ <5)钳溶液：配制5%钳酸钱水溶液(a),再取200ml浓ESO加800ml水(b)Q使用前将(a), (b)二液按1 ： 1混合。(6) 铜试剂：取50gCuSO4-5H O溶于500ml水中(a),取 25gNa2CO 25g酒石酸钾钠、2

11、0gNaHCO3和20临恥於0幡于 水并稀释至1L再加几滴甲苯(b)。使用前将(a), (b)二液泡合。标准曲线绘制，将比色法(1)的葡萄糖标准液稀释成lm含lmg还原糖工作液。然后'取不同体积(0.5-50ml>工作液 移于lOOmt容量瓶中，加10mlpH5<5醋酸盐缓冲液，用水稀释至刻度宀吸取此液5ml移于100ml容量瓶中，加4ml铜试剂在 钠和5ml钳溶液，显色lmiri定容，在分光光度计上于578nm处 比色。根据光密度值和浓度绘制标准曲线口梆腾水裕上®S25mina冷却至室温丁再加2ml0.2M磷酸二氢2操作步骤取土壤置于IQOm】容量瓶中，加2ml

12、甲苯。 laming加10ml2D%就糖和lOmlpHs.S醋酸盐缓冲液，置于379 恒温箱中培养24九 培养结束后，过滤并定容，按绘制标准曲线 操作步骤显芭，比色。试验设用水代秽基质的对照。應糖醸活性，以24hJ§10g土壤中葡萄糖毫克数表示。滴定法1试剂配制(1) 20%蔗糖(2) 甲苯(3) PH5.5醋酸盐-磷酸盐缓冲液(4) 33% KI 液(5) H2SO4 (1： 3)(6) 淀粉指示剂：取 0.5g淀粉溶于少许水中，加10ml煮沸的25%NaCI 液，煮沸 1min(7) 0.1N Na2S2O3滴定液：配制方法与标定方法见多酚氧化酶测定(8) 菲林溶液：取34.64

13、 g CUSO4.5H2O溶于蒸馏水，并稀释至500ml(a) 取173g酒石酸钾钠和50gNaOH溶于蒸馏水，并稀释至500ml(b) ,使用前将(a)( b)按1:1混合2操作步骤取10g 土壤置于100ml三角瓶中，用1.5ml甲苯处理15min。加10ml 20%蔗糖和10ml PH5.5醋酸盐-磷酸盐缓冲液，摇匀后放在37 C恒温箱中培养24h培养结束后，加50ml蒸馏水，摇荡后过滤。取20ml滤液移于100ml 三角瓶中，加10ml菲林溶液。在沸水浴上放置10min，冷却至室温 后再加 3ml 33%KI 溶液和 4ml H2SO4（ 1:3）。然后用 0.1N Na2S2O3 滴

14、定，至终点前加淀粉指示剂，再滴定至蓝色消失。试验应设以水（20ml ）代替基质的对照蔗糖酶活性，用对照与试验的0.1N Na 2S2O3滴定毫升数之差表示B-glucosidase伊葡糖苷酶4分析意文多聚糖是土壤简单的含碳化合物的聚合物。在 纤二耦酶作用下，多聚糖和d葡糖芹製僦为葡萄糖口酶促作用产 物是微生物、植物的营养源，纤二糖酶是参与碳素生物循环的一2方法原理纤二糖醐能裂解A葡糖甘生成葡萄糖，所以又 称A葡糖昔酶°测定纤二糖酶常用容量法（滴定还原糖量和比色法（比色靛酚和对硝基酚）。采用的基质有纤维二糖、龙胆二糖熊果叶昔 等,缓冲体系有pH62磷酸盐缓冲液.PH6.2醋酸盐缓冲液-

15、 PII4-8磷酸一柠檬酸缓祁液。靛酚比色法】在纤二糖酶作用下，水杨酸甘（炉葡糖昔2 起甲基苯酚）水解生成的水杨醇能与2 ,6 -二氯代二澳对苯醒 亚胺，在PH9.6时起反应生成兰色靛酚，然后比色测定。硝基酚比色法，以对硝基苯葡糖昔为基质，在纤二糖 酶作用下，水解产生对硝基酚，比色测定。容覺法1试剂配制（1）10%熊果叶昔（少葡糖昔-苯二酚儿（2）甲苯。（3）pH62磷酸缓冲液 其他试剂按测定蔗糖酶容量法而定。2操作步取5 g土壤置于200 ml三角瓶中，加5滴甲苯和15mlpll6.2磷酸缓冲液。15min后，注入5m】10%熊果叶昔 溶液。摇匀混合物后，置于379恒温箱中培养24h。培养结

16、束后，加80ml水，摇匀并过滤。吸取20ml滤液，按蔗糖酶羿j纤二糖酶活性,以0.1NNa2S2Os毫升数表示。试验设JS用水代替基质的土壤和无土壤的熊果叶昔为对照.靛酚比色法1试剂配制（1）水杨酸甘溶液*取l<1532g纯水杨昔溶于1L蒸憎水中 （每毫升含50mg水杨昔）。（2） pH62醋酸盐缓冲液：董取120mlCH3COOH溶于IL 蒸憾水中（a）,再取164g无水CH3COON,溶于1L蒸馆水中（b）o将a）与（b）按1 混合后，用pH计调至6.2。(3 )甲苯&(4 )PH9.6硼酸盐缓冲液。(5 ) 20%NaOH°（6）显色剂（02%2,6 -氯二漠对苯

17、醍亚胺的乙醇溶液）。（7）酚的标准溶液*取O.lg苯酚溶于1L水中（每毫升含O.lmg苯酚），保存在棕色瓶中。酚的工作溶液：取10ml标准液，稀释至100ml （每毫升含O.Olm g 苯酚）。标准曲线的绘制，取工作液0, 2.52, 12.63和2526ml分别 加入100m】容量瓶中，再分别加入67ml酷酸缓冲液，即成每3m） 含0、10、50和lOOFg水杨醇液。另取3.79m】酚标准液，加 67ml醋酸缓冲液，即成每3m!含150卩g水杨醇液。最后均稀释至100ml。取5m此液移于50ml容量瓶中，加2mlpH96硼酸盐匀混合缓冲液，再加05m】0.2%2,6-氯代二浪对苯醍亚胺。:物

18、后，在室温下放置lh,显色后稀释至刻度。在分光光度计上于578nm处比色。以光密度值为纵坐标，以水杨醇浓度为横坐 标绘制标准曲线。2操作步骤 称土置于50m!三角瓶中，加1.5ml甲苯处 理土壤。15min后，加10ml水杨昔溶液和20m】pH6.2醋酸盐缓 冲液。放在37七恒温箱中培养24»培养结束乩 过滤混合物。取5ml滤液移于50ml容量瓶中, 按标准曲线绘涮方法进行显色,根据标准曲线查出水杨醇的含量。纤二糖酶活性，以24h后，lg 土壤中水杨醇的毫克数表示。 设以水代替基质的土壤和无土壤的水杨酸甘为对照。硝基酚比色法儿试剂配制Cl) 0.05M对硝基苯4D 葡糖昔。(2)甲苯

19、，(3 ) pH4*8磷酸-柠檬酸缓冲液：取98.6mi0.2MNaiHPO4 溶液与lOlmlO.lMC.H.OrHiO溶液混合。(4) 乙醇。(5 ) 2M三轻甲基氨基甲烷溶液r取242咅三轻甲基氨基 甲烷溶于水，并稀释至200mlD(6)对硝基酚标准溶液配制lml含lFmol的标准溶液。标准曲线的绘制=取I ml含有0,0-2 ,0-4 , 06* 0.F和l.Omol的标准腹2ml移于25ml量瓶中加入2ml三轻甲基氨基甲 烷。定容混匀后在分光光度计上与400nin处比色测定.绘制标准 曲线。2.操作步骤 取0鸥土壤置于25ml三角瓶中，加0.1ml甲 苯和0.9ml蒸憎水，lOmin

20、后加1.5mlpH4,8g!|酸-柠檬酸缓冲液. 再加0.6毫升QJ5M对硝基苯中-D-葡糖苜溶液。混合均匀后， 在30弋:恒温箱中培养丄h,然后加8 ml乙醇摇匀后过滤，取2ml 濾液移于25nd量瓶中，加2m!三技甲基氮基甲烷，定容后在波 长400nm处比色测定。试验应设以水代替基质的土壤和无土壤的对硝基苯-Q-D 葡 糖昔为对照Dperoxidase过氧化物酶 HRP<=)过颦化物屬4分析意义过氧化物酶能氧化七壤吉机物质° 一些过氧化 物是土壇微生物生命活动的结果，也与某些氧化酶(如尿酸盐氧 化酶)的作用有关。所以过氧化物舸在腐殖质的形成过程中具有電要的作用。2方法选择与

21、原理 过氧化物醸禱促有机物质氧化成龊。可 通过有色化合物(如紫色没食子比色测定，也可用碘量法滴 定测得酶促反应生成的氧化产物，用于衰示酶的活性。测定过氧 化物誨的方法原理基本与多酚氧化酹的相同。比 色 法1 试剂配制(1) 1%邻苯三酚溶液。(2) 0.5%H2O2 溶液。(3 )乙瞌< 4) 0.5N HC1。(5) pH45柠穢酸一磷酸缓冲液。(6) 重幣酸悍标准洛液及标准曲线绘制见多酚氧化酶测 定。2操作步骤 取lg 土壌.置于50ml三角瓶中，然后注入10ml 1%磷苯三酚溶液和2ml 0. 5 % HA溶液。振荡后按测定多酚氧 化酶步骤萃取、比色。过氧化物辭活性，以2h后,ig

22、±壊中生成的紫色没令了索 亳克数表示。容 量 法1试剂配制(1 ) 0.02M邻苯二酚溶液(见多酚氧化酶测定九<2 ) 04%HQ2。(3 ) 0<1%抗坏血酸溶液。<4) pH4.7醋酸盐缓冲液。cs> io%usro4溶液。C6) 0.01N 4的标准滴定液(见多酚氣化醍测定人N挫作步骤 称Sg土壤置于50ml三角瓶中，加入26mlpH 仁7酷酸盐缓冲液，摇匀后放置2h并过滤。取iml滤液移于另一50ml三角j瓦中，力JUnil 0*4%HxOz ?f? 掖、2ml 0.1%抗坏血酸和1ml 0. 02M邻苯二瞬溶液。將混合物 摇匀后，置于20七水浴上培养

23、2mina随后加lml 10%H卍0, 饨化酶°最后用0.01N良滴定混合物至黄色(颜色稳定io15s)o 用充分煮沸的土壤浸提液作对照。过氧化物酶活性以1呂土壤消耗的O.OIN匚标准液的毫升 数敢示pxylanase 木聚糖酶(六)木聚牺酶九分析意义 木聚糖是半纤维素的组成成分。迸入土壊的禾 本科牧草含有大量木聚糖。在木聚糖酶作用下，木聚糖製解生成 木第口酶促作用产物是土壤微生物的能量物质"木聚糖酶在自然 界的碳素循环中起看重要的作用。2方法原理 以木聚糖为基质，酶促作用生成的木糖，通过 碘量法，测出反应混合物的还原力竹目前，测定木聚糖酶的方法，主塵根据Sorense (

24、 1957 ) 提出的礁量滴定法进行。氐试剂配制(!)木聚貓搏就乂舷成熟小麦桔秆用硫提取，然后用醇沉淀而成。配制浓度为1%(2) 甲苯(3) PH6.50.15M磷酸盐缓冲液(4) 铜-磷酸盐试剂：取28g无水K2HPO4和40g酒石酸钾钠， 溶 于 700ml 水 中 ， 加 100ml 1N NaOH ， 然 后 加 入 80ml 10%CuSO4.5H2。溶液。溶解后，加入180g无水Na2SO4，将溶液稀 释至1L并过滤后备用( 5) 0.005N KI(6) 2N H2SO4(7) 0.005N Na 2S2O3。5哉0溶液。该工作夜由 0.1N NazS?。?原 液稀释而成。为防止

25、大气中 CO2 的影响，稀释 1L 溶液加 2ml 10% NaOH(8) 木糖的标准溶液( 1ml 含 0.2mg 木糖)4 操作步骤取 5g 土置于 50ml 三角瓶中，加 2ml 甲苯。 10min 后，加 5ml PH6.5 磷酸缓冲液和5ml 1%木聚糖溶液。放在37 C恒温箱中培养5昼夜。培养结束后，取 5ml 滤液移于大试管中，加 5ml 铜-磷酸盐试剂。 塞好试管后，放在沸水浴上加热 10min 。这时，有红色氧化亚铜沉淀 析出。待冷却后，为使亚铜氧化，沿管壁加 5ml 0.005N KI 溶液(不 要混合)。然后迅速注入1.5 ml 2N H 2SO4,并立即摇动混合液。剩余

26、 的KI用0.005 Na 2S2O3进行回滴。根据KI的差，得出与当量铜量结 合的碘化钾量。为了计算反应液中生成的木聚糖，得到 1mg 木糖的 0.005N CuO 的毫克数，可用标准木糖液5ml，按上述方法沉淀，铜用硫代硫酸钠 滴定。根据用于氧化铜的 KI 的量，查知其当量数(以 0.005N CuO的毫克数表示）木聚糖酶活性，以1ml反应混合物中木糖的毫克数表示。 试验设置以水代替基质的对照phenol oxidase多酚氧化酶 PPO1分析意义多酚氧化酶参与土壤有机组分中芳香族化合物的转化作用。土壤中的酚类物质在多酚氧化酶的作用下氧化生成醌。醌与氨基酸等通过一 系列生物化学过程所合成最

27、初的胡敏酸分子， 所以，多酚氧化酶是腐 殖化的一个媒介。它是土壤氧化花园酶中了解得比较多的一种酶。2方法选择与原理在空气存在的情况下，多酚氧化酶能酶促一:元酚、二元册或三元酚氧化成闹少以邻苯二酚氧化成相应的01为例，反应式如下*根錨花匪的变化，测定多酚氧化離的三测方法知下<1 ）比色法工多酚氧化更丽促籍苯三酚，用乙朋提取生血 的紫色没食于素，比色着色的乙醴相，用紫色没食子素量衷示旌 活性&此法具有速度快的优点，挖色技术姿求较严，培养混合液 pH要准确，且范用较窄&是冃前广为次用血一种方法口（2碘量滴建法本法决拱多跻氧化恥踰促基质生成的 龊，衣酸性条件下，用标准腆溢漩定生丘

28、稳定的藍隹络合物，氐 碘的侬积表示醮的活性右此法要注竄保证反应所需赳恢茲 对賊 性土壊应加过:fi的酸，才易于列断適定终虫°(3) 测压法：右法用Warburg呼吸器，测定在多酚徒化 廨作用下消耗用于氧化多酚化合物的氧量.求示醜活性。此法要 求仪器设签，且测定样品所需时闻较長。测定多酚氧化爾常用的基质有邻苯二酚和邻苯三酚，由于测 定多酚氧化酚是基于测定加入土壤的多酚的氧化速度，一般邻苯 三酚銳比得最快，故常用邻苯三酚为基质，以比色法进行测定。比 色 法1试剂配制(1) 1%邻苯二酚涪液。(2) 乙瞇。(3 ) 0.5N 盐酸。(4) 重俗酸钾标谁溶0.75gK2Cr2O,溶于1 L0

29、.5 N HC1 (相当于50ml®中含5mg紫色没食子素)。(5pH45柠檬酸礴酸缓冲液。标准曲线绘制：匪重銘酸钾标准溶液，用05N HCI稀释成 各种不同浓度°定容后，在分光光度计上于430nm处比色测定。 以光密度值为纵坐标，以浓度为横坐标绘制标准曲线。2换作步骤 取lg 土样(过0.25mm筛)，置于50ml三角 瓶中，然后注入10ml 1%邻苯三酚溶液，将瓶内含物摇荡后放 在30七恒温縉巾培养2h。取岀后加4ml pH45柠檢酸磷酸 怨冲液，再加35m乙讎，用力摇荡数次，萃取30mino最后， 将含落解的紫色没食子素的着色乙醴相进行比色。比色时用波长 为430nm

30、的滤光片.为防止因乙醛引起的泯差，每比色次用 无水乙醇洗涤比色液槽一次。为了消除土壤中原有的讎溶性有机物质而引起的误差及校正 没食子酚的纯度，需设无基质的土壤和无土壤的基质作对照。在 无基质的土壊的对廉中，用水代种基质进行培养。3活性衣示紫色没食子索的量，根据用重偌酸钾绘制的标 准曲线查知。多酚氧化酶活性，以2h后lg 土壤中紫色没食子素的毫克 数表示。碘量滴定法1试剂配制(1) 0.1%抗坏血酸。(2) 10% 磷酸'(3) i %可溶注淀粉。(4) 002乂令牯二酚：取055g邻苯二酚加1000ml燕他 水即以(50.01N応的标准滴览液$1) 12溶液的配制取l-3gl：和2gK

31、I不含KIO,), 加20ml水搅拌，使之溶解。然后稀释至IL,保存在棕色瓶中待 用Na2SA标准液标定。2) 0.01N良标准液的标定取Na2SzO3标准液25ml, 放入250ml三角瓶中，加50ml蒸馆水和5ml淀粉溶液，用I, 溶液滴定至溶液由无色变为蓝色。计算爲溶液的当量浓度。3) NaSjOj 标准液配制 称2» Sg'NaiSiOjSHiO,溶解 在刚煮沸而冷却了的蒸馆水中，加入少许Na2CO3,稀释至1L。 保存在棕色瓶中待用标定剂(KzCiOJ标定°4) K2Ct2O7标定剂的配制准确称取0.1500g分析纯KxCrA于500ml三角瓶中，加入30ml蒸馆水，加2吕KI和5ml6N H01,在暗处放5min,然后用水稀释至200ml,用NatStOs标准液