工业用溶菌酶编制说明

1、百度文库-好好学习.天天向上工业用溶菌酶行业标准简要编制说明一、工作简况（一）任务来源、起草单位、起草人本标准由中国食品发酵工业研究院组织上报， 被列入工业和信息化部 2012年行业标 准制修订计划，计划名称为工业用溶菌酶，项目编号 2012-1187T-QBo本标准由中国 轻工业联合会提岀，全国食品标准化中心归口。本标准主要起草单位略。本标准主要起草人略。负责标准技术资料查询、收集及对 比，检测方法的验证比对，样品检测及数据整理，标准文本及编制说明的起草、撰写，行 业内征求意见，组织标准的初审讨论会及标准报送等。（二）简要起草过程标准任务下达后，中国食品发酵工业研究院针对制泄工业用溶菌酶行业

2、标准的具体工 作进行了认真研究，确泄了总体工作方案，于 2012 年 12月组建了标准起草工作组。起草 工作组首先査阅相关的国内外技术标准资料，在参照国际和国外先进标准的基础上，结合 目前国内市场产品的实际情况，初步确圮了产品的质虽:技术指标和相应的试验方法，形成 了标准草案（第一稿）。2013年 5月，工作组在北京召开第一次讨论会对标准草案进行讨 论研究，综合务方意见，对一些尚存在异议的内容进行进一步整理，修改成标准草案（第 二稿），同时确泄了进一步的对比验证工作，2013年 6 月2014年 4 月，起草组完成样 品的搜集，测定底物、标准品的购程、转化及试验方法的验证调整工作。2014年

3、5 月，工 作组在北京召开第二次讨论会，经过大家的认真、细致的讨论研究，对标准中涉及的主要 关键问题达成共识，会后又经多次沟通研究，并于 2015年 11月修改形成征求意见稿，向 行业内公开征集意见。二、对主要条款的说明（一）主要内容据起草工作组调研和查阅，目前 FCCV1ILysozyme（溶菌酶）和 JECFA（ 1992）LysozymeHydrochloride（盐酸盐溶菌爾）、日本食品添加剂公定书第八版-Lysozyme Japansspecification&standard for food additives （食品添加剂溶菌酶标准规范）及原卫生部 2010-23号公告

4、均已公布了溶菌酶的质量规格要求。JECFA的质量规格特指盐酸盐溶菌 酶：FCC只限泄蛋淸来源，给出酶活力测立方法，不限工艺，也没有给出特左质量规格； 日本公泄书针对溶菌酶产品，工艺上涵盖原卫生部公告的溶菌酶产品，因此，本标准制泄 综合考虑上述质量标准给出本标准技术要求。对比情况见附表 1、附表 2。本标准的主要 技术内容说明如下：本标准编写符合 GBAT 的规怎。百度文库-好好学习.天天向上-3液吸光值；FCC直接指泄 Sigma M-3700,或同等分析效果的产品。作为一般企业或质检机 构ACTT4689菌种购进手续繁琐，且存在被告知为国内限制购入产品而无法购得的可能。Sigma M-370

5、0 为 ACTT4689的活菌制品，价格昂贵，且为一次性使用产品，对于企业连续 测定成本较高。为了便于标准发布后测左方法的有效执行，起草组委托食发院菌种中心引 进ACTT4689菌种，并接种培养配制成不同浓度，配介起草组各实验室进行 FCC 方法的 有效转化。起草过程中有关单位提岀，菌种的接种培养及稀释度的控制专业性较强，如果 直接要求菌种中心提供合适浓度的菌悬液，又存在运输困难且由于运输、储存条件的变化 造成菌液不稳立的情况。因此，本标准制左也考虑自制标准测定用菌粉的可能。经实验比 对，文本给出 ACTT4689编号及对应 CICC 菌种编号，同时考虑给出 CICC 菌粉编号。日 本也是制定

6、本国菌种编号及标准酶编号。底物溶液：FCC 以空气调分光光度计零点，底物溶液的吸光度，450nm下读数应 为土，或吸光度降低的速度应在单位/min：本标准以磷酸盐缓冲液调分光光度计零点，然 后测泄底物溶液的吸光度，450nm下读数应为。酶活力测定步骤：增加“3mm 之内初始吸光度值变化应小于等于时，方可开始测 左，确保底物溶液的稳定且没有受到溶菌酶的污染：增加“反应 lmin 后稳眾，计算时忽 略最初 lmin的读数“，以保证酶活测左在有效的线性范用内，保证酶活测左的准确性。百度文库-好好学习.夭天向上-4附表 1:国内外溶菌酶质量规格指标对照表项目标准本标准原卫生部 2010-23 号公告日

7、木公定书第八版（溶菌晦）JECFA 1992 （盐酸盐溶菌酶）范围木标准适用于从鸡蛋淸 中提取.精制等匸艺制 得的工业用溶菌酶用离子交换树脂从鸡蛋清中提取溶 菌酶，然后经洗脱.离心过滤、低 压反渗透过滤、巴氏杀菌制得液体 型溶菌酶产品：将液体型溶菌酶进 行喷雾干燥制得粉末型溶菌的产品能溶解细菌细胞壁物质的一种酶 制剂， 來源于蛋清.用碱性水溶 液或盐溶液处理后用树脂纯化. 或用柱纯化， 或树脂纯化后再结 晶.或加盐处理从鸡蛋蛋淸中提取的.由 129 个氨基酸组 成的笫肽，分子址大约为 14000,等电点 为。具有酹活性.可以水解细菌，尤其是 革兰氏阳性细菌的外膜中的连接 N乙醍胞 壁酸和 N

8、乙酰衞糖胺之间的卩（1-4）键：通常以盐酸盐型的形式获取，用于食品加 必须符合食品加工处理所用酶制品的 通用技术抬标性状白色至淡黄色粉末：浅 黄色至深褐色液体白色至淡黄色粉末：浅黄色至深褐 色液体无味白色粉末白色无味粉末鉴别B： %醋酸盐缓冲液于279nm281nm 处有最大吸收A：可溶于水，不溶干有机溶剂和浓盐溶液 B：25mg/100mL 水溶液，紫外吸光度值252nm281nm含虽测定（纯度）95%95%溶液透明度% （5mL, 1%溶液，.必要时 可用稀盐酸调 pH）PH：（液体） （,200mL 水）水分，%6 （固体）6 （固体） （固体94%： 22% （液体）百度文库-好好学习

9、.夭天向上-6项目标准木标准原卫生部 2010-23 号公告日本公定书第八版（溶菌酶）JECFA 1992 （盐酸盐溶菌酶）酶活力符合声称xlO7HP/g： 9xlO6FIP/g以干基计酶活性不小于 mg灰分，% （固体） （液体） （固体） （液体）抑菌作用合賂氮.%氯.%： （液体）钠，%百度文库-好好学习.夭天向上-7附农 2：国内外溶菌酶标准试验方法对照农标准项目、木标准FCCVII日木公定书第八版（溶菌酶）中国药典（CP）水分,%GB取样.硅胶减压 2 小时减圧干燥酶活力修改采用 FCC.初始吸 光度土（参照药典）比浊法以溶壁微球菌培养液为底物，溶菌酶 可以溶解溶壁微球菌，使吸光度降

10、低，且其降 低程度与溶菌酶的活性成正比。缓冲液测定温 度（25C）底物溶液球菌浓度 3040mg/100mL；对照标准溶液利样品溶液浓度 lmg/ml：将 1cm 比色 fill 放入分光光度讣.调整吸光度零 点：吸底物溶液于比色皿:垠初 450nm 处吸 光度应为士：吸标准制备液加入底物溶液.充 分混合。记录 3min 的吸光度的降低,每 15s 记录一次吸光值，吸光值得变化应呈线性，每 分钟的变化范圈应在。重复操作测定样品溶 液1 个洛菌酶活力单位定义为 25C,条件下.使 用溶壁微球菌悬浊液在450nm处每分钟引起 吸光度变化为的溶菌酶的址。分析 1分钟后稳定，讣算时忽賂最初 1 分钟的

11、 读数。用曲线的线性部分（通常在后 2分钟） 确定每分钟吸光度变化的平均值。梅确称取相十干 50mg 活力效能的样 品（以 T基计）用磷酸缓冲液配制成 一定浓度的样品溶液：用真空 T燥器 烘干酶标样2小时,精确称取相当于 50mg活力效能的标准参考鼬用磷 酸缓冲液配制成一定浓度的标准溶 液。准确吸取 3mL 底物溶液至试管 359 预热 3min：底物溶液，样品溶 液，标准溶液 35C 预热 3min：准确 吸取 3mL 预热过的溶液至试管中 359反应 lOmin： 640nm 测定吸光 度，计算酶活力存、酶标准品质蛍 2 人一內 样品质虽 N-比底物悬浮液的制备称取溶酶小球菌 30 40mg,加磷酸盐缓冲液1ml在研钵内研磨3分 钟.再加磷酸盐缓冲液适:使总体积约为 100ml，使悬浮液于 25 土 C 时，在 450nm 的波长 处测得的吸收度为（临用前配制）。测定法 精密虽取 259 的底物悬浮液 3ml. 1cm 比色池中.在 450nm 的波长处测定吸收度 作为零秒的读数A，然后精密虽取 259 的供试 品溶液