胎盘表皮生长因子受体的表达改变与胎儿宫内生长迟缓的关系研究

1、胎盘表皮生长因子受体的表达改变与胎儿宫内生长迟缓的关系研究【摘要】目的研究胎儿宫内生长迟缓(IUGR)患者胎盘表皮生长因子受体(EGFR)的表达与正常妊娠及巨大儿胎盘之间是否有差异，并分析其变化与胎盘绒毛发育是否有关。方法取足月分娩胎盘组织标本63例，于分娩后立即置于4%中性甲醛缓冲液固定。用免疫组织化学SP法进行胎盘EGFR检测。同时对末梢绒毛血管大小、面积及绒毛面密度等进行分析测量。结果IUGR组胎盘EGFR的表达较正常对照组和巨大儿组明显增加(P0.01)，IUGR胎盘末梢绒毛血管数及血管占绒毛横面积比均明显减少(P均0.05；P均0.05)。结论IUGR儿胎盘EGFR表达增加与其胎盘绒

2、毛发育不良有关，EGFR在胎儿胎盘的生长发育及IUGR的发生中起重要调节作用。【关键词】表皮生长因子受体胎盘病理学胎儿宫内生长迟缓免疫组化Relationship between placental epidermal growth factor receptor expression and intrauterine growth retardationLi Guiyu，Sun Changxue（Obstetric and Gynecologic Department of Guiyang Medical college,Guiyang 550004）【Abstract】ObjectiveT

3、o investigate if the placental epidermal growth factor receptor(EGFR)differs between women with intauterine growth retardation(IUGR),fetal macrosomia and normal pregnancies,and analyze if that difference has a bearing on pathological changes of microvilli.MethodsTissue samples from 63 term placentas

4、 were obtained immediately after term delivery and fixed in 4% buffered neutral formalin.The expression of EGFR in human placenta was analyzed by streptavidin peroxidase techniques.The size of microvillus capillary and villi area density were also measured by multifuction colour pathological picture

5、 analysis system.ResultsIncreased expression of EGFR in placentas of IUGR group was found clearly increased compared with the normal control(P0.01)and macrosomia group(P0.05).By contrast,the number of capillary in a microvillus and the area ratio of capillary to microvillus both significantly decrea

6、sed in IUGR group(P0.05,P0.05).ConclusionOur findings imply that IUGR is associated with higher expression of EGFR in placentas,which may has a bearing on placental growth retardation.But marosomia is without effect.These fundings are consistent with the important role of EGFR in the regulation of f

7、etal and placental growth.【Key words】Epidermal growth factor receporPlacentaPathologyFetal growth retardationImmunohistochemistry表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)是近年来发现的一种重要细胞生长因子，可刺激多种细胞增生或分化。研究表明，EGF可诱导正常人胎盘滋养细胞分化并影响胎盘激素的分泌，可能在胎儿胎盘生长发育中起重要作用1。其调节作用是通过与靶细胞上的EGF受体(epidermal growth factor receptor,

8、EGFR)结合，激活受体自身酪氨酸激酶并引发自身和底物磷酸化反应而实现的，而胎盘富含EGFR1，2。本文采用免疫组化方法研究了胎儿宫内生长迟缓(IUGR)胎盘上EGFR的表达情况，并与正常胎儿和巨大儿胎盘比较，同时分析各组胎盘绒毛血管的改变情况。1材料与方法1.1研究对象和材料来源随机选取1997年12月至1998年6月在贵阳医学院附属医院产科自然分娩或剖宫产的足月单胎妊娠妇女共63例，孕龄3742周，年龄2130岁。根据新生儿出生体重分组，新生儿体重小于胎龄儿23例为IUGR组；巨大儿15例为巨大儿组；正常适龄儿25例为正常对照组。采取胎盘组织标本的同时详细记录新生儿出生体重、胎盘重量和孕妇

9、年龄、身高、孕龄等临床资料。以新生儿出生体重低于同孕龄儿的第10百分数者为IUGR(标准参照中国15城市不同胎龄新生儿出生体重百分位数分布表)，新生儿出生体重4000g者为巨大儿。1.2标本制备标本均于分娩后立即取得，取胎盘中间带胎儿面组织块0.50.8cm3大小，迅速固定于4%中性甲醛缓冲液中。48小时后脱水、石蜡包埋，5m连续切片。每例标本分别进行HE染色和EGFR免疫组化染色。1.3免疫组化染色方法及结果评定标准采用过氧化物酶标记的链霉卵白素(SP)法。SP试剂盒购自北京中山生物技术有限公司；鼠抗人EGFR单克隆抗体为美国Santa Cruz公司产品，工作质量分数(浓度)为180。以正常

10、鼠血清(相同质量分数)代替一抗作阴性对照。DAB显色，苏木素复染，光镜下观察胞膜或(和)胞浆中有棕黄色特异着色者为阳性染色，观察5个视野(200倍)。结果评定分四级：与背景相比，“-”为细胞内无棕黄色阳性颗粒或呈与背景均匀一致的淡黄色；“+”为膜或浆内可见淡棕黄色颗粒；“+”为膜、浆内可见较深棕黄色颗粒；“+”为膜、浆内可见深棕黄色颗粒。1.4HE染色像分析用多功能真彩色病理像分析系统CMIAS在光镜下进行场测量。绒毛面密度(绒毛面积与总场面积比值)测量每例观测5个视野(100倍)。在400倍视野下观测单个末梢绒毛横切面内毛细血管直径d，绒毛直径D及血管数n(D、d测量时选择较短径线并保持二者

11、测量方向一致)。计算血管占绒毛横切面积比=d2*n/D2，每例选择不同视野观测10个绒毛。1.5统计学处理等级资料用秩和检验，计量资料用单因素方差分析进行相关组间显著性检验。检验水准=0.05，计量资料结果用s表示。2结果2.1各组临床资料分析三组间孕妇年龄、身高、孕龄和胎儿男女比例分别比较均无显著性差异。新生儿出生体重为IUGR组正常对照组0.05三组比较，2)P0.01与正常对照组比较，3)P0.001与巨大儿组比较 表2IUGR组与巨大儿组和正常对照组胎盘绒毛EGFR表达的比较组别例数EGFR表达密度级别-+IUGR组1)、2)2313811巨大儿组3)150681正常对照组252111

12、021)P0.01与正常对照组比较，2)P0.05与正常对照组比较2.3各组胎盘绒毛组织计量分析IUGR组与对照组比较不仅胎盘末梢绒毛血管数减少，而且血管占绒毛横断面积比也明显减少，差异具有显著性。巨大儿组与正常对照组比较无显著性差异。三组胎盘绒毛面密度比较无显著性差异。但IUGR组胎盘重量较正常对照组和巨大儿组低，有显著性差异，见表3。 3讨论EGF被广泛认为可刺激多种组织细胞的增生分裂或分化，在人体和动物多数组织器官的发育和成熟中起重要作用。既往研究普遍认为EGF可促进人胎盘滋养细胞的分化，调节hCG和hPL的分泌，并在胚胎和胎盘的植入中发挥作用13。研究表明， 在足月妊娠胎盘中EGFR主

13、要分布于有丝分裂不活跃的ST和IT中，在ST中表达较丰富，且刷状缘表达强烈。证实正常晚期妊娠时，EGFR及配子主要与合体滋养细胞的分化功能有关。但个别CT也有EGFR表达，尤其在IUGR胎盘明显，说明即使在足月妊娠，EGFR也可能存在促增殖作用。绒毛刷状缘是直接与母血接触并支持母胎交换的部位，有动物研究表明EGF可增加孕鼠胎盘的通透性4。EGFR在刷状缘表达最强，提示EGF及受体可能通过调节胎盘细胞膜的通透性而影响母儿某些营养物质的交换，调节胎儿的生长。表3IUGR组、巨大儿组与正常对照组胎盘绒毛组织计量分析结果组别例数末梢绒毛血管数(个)血管占绒毛面积比(横切面)绒毛面密度(绒毛面积与总面积

14、比)胎盘重量(g)IUGR组232.600.701)0.18990.09762)0.42650.05634)437.3043.775)、6)巨大儿组153.100.693)0.48790.18753)0.45560.0817625.5035.915)正常对照组253.300.580.36590.09960.44480.042521.1044.351)P0.05与正常对照组和巨大儿组比较，2)P0.05三组比较，5)P0.05与正常对照组比较，6)P0.01与巨大儿组比较 研究结果表明，IUGR表达密度较正常对照组和巨大儿组明显增加，而绒毛面密度(绒毛面积与总场面积比值)则无明显改变，提示胎盘绒

15、毛EGFR的表达增加与IUGR病变有关。研究同时表明IUGR儿胎盘末梢绒毛内不仅毛细血管数减少，而且血管占绒毛横断面积比也显著减小。此外，我们观察IUGR胎盘绒毛还较多伴细胞滋养细胞增生和血管细胞合体膜减少现象。这些提示IUGR儿胎盘绒毛存在发育不良或迟缓。既往研究表明，随妊娠进展胎盘EGFR表达密度逐渐减弱2，3。因而，我们认为IUGR儿胎盘滋养细胞中EGFR表达密度的增加可能与其胎盘绒毛发育不良有关。关于二者的关系可有两种解释：一方面可能由于胎盘绒毛发育不良，滋养细胞功能下降，致使产生EGF减少，从而刺激滋养细胞上EGFR生成增多，此可视为一种代偿反应。既往有研究表明IUGR儿羊水及脐血中

16、EGF水平均较正常儿下降5，6，可以推测在IUGR胎盘微环境中，EGF与EGFR间存在某种形式负反馈调节，研究证明EGF对滋养细胞功能调节属受体水平调节，不同浓度EGF对其受体具有不同的调节作用，小剂量EGF可使EGFR数量增加，而大剂量EGF则使受体数量减少7。另一方面更可能由于某些病理因素或基因变化导致绒毛滋养细胞中EGFR表达数目增加而活性下降，终致滋养细胞发育不良及细胞功能低下。因此我们认为，即便IUGR胎儿胎盘中EGFR含量增加，但其磷酸化活性可由于基因表达类型改变、滋养细胞分化异常或EGF反应减弱等原因而降低，而EGFR活性下降或功能蛋白减少可导致滋养细胞分化不良及功能低下，从而终

17、致胎儿胎盘绒毛发育障碍，影响胎儿-胎盘单位的功能。研究中，巨大儿胎盘末梢绒毛血管数、血管绒毛横断面积比及绒毛面密度分别与正常对照组比较无显著性差异，其胎盘EGFR表达密度也无明显改变。提示巨大儿无胎盘绒毛发育障碍及胎儿灌流不良，胎盘功能基本正常。Varner等5也证明巨大儿羊水中EGF水平与正常儿比较无改变。上述研究结果提示EGFR及其配子作为调节因子与IUGR的发生及其胎盘病变有关，从而在胎儿胎盘的生长发育中起重要作用。但是，其中的具体调节及作用机制还需进一步探讨研究。作者单位：李贵瑜（贵阳医学院妇产科550004）孙长学（贵阳医学院妇产科550004）参考文献1，Morrish DW,Bh

18、ardwai D,Dabbagh LK,et al.Epidermal growth factor induces differentiation and secretion of human chorionic gonadotropin and placental lactogen in normal human placenta.J Clin Endocrinol Metab,1987;65(5):12822，Cecilia A,Takeshi M,Augustos,et al.Cytologic localization of EGF and its receptor in developing human placenta varies over the course of pregnancy.Am J Obstet Gynecol,1991;165(5):13773，马军，王作清，苏宝山.表皮生长因子、C-erBb2基因产物及人胎盘催乳素在人正常胎盘滋养细胞中的免疫组化定位.