血清天门冬氨酸氨基转移酶IFCC推荐方法测定-检验科生化室作业书

1、【实用】检验科SOP文件血清天门冬氨酸氨基转移的IFCC推存方法测定1.实验原理：国际临床化学学会IFCCt荐的紫外连续监测法.L-天门冬氨酸+-酮戊二酸ASTW乙酸+L卷氨酸草酰乙酸+NADH+H+MD畔臬酸月氢酶L寺果酸+NAD+H2O2标本：1.1病人准备：12小时禁食.1.2类型：血清,肝素或EDTAB浆.3.标本存放：3天内的活性损失：28c保存：8%;1525c保存：10%;标本稳定性：-20C保存至少可稳定3个月.4.标本运输：常温条件下保存运输.5.标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本.6.实验材料6.1试剂：申能AST测定试剂盒货号:141260171701试剂1:6X64

2、ml;试剂2:6X16ml6.1.1试剂组成试剂1R1:Tris缓冲液pH7.880mmol/LL-天门冬氨酸240mmol/LMDH洋果酸月氢酶A600U/LLDH乳酸脱氢酶A600U/L试齐【J2R2:a-酮戊二酸12mmol/L药海无涯学无止境专注医学领域【实用】检验科SOP文件NADH0.18mmol/L磷酸毗哆醛试剂：GoodS缓冲液pH9.60.7mmol/L磷酸口比哆醛0.09mmol/L6.1.2试剂准备：试剂为即用式.6.1.3试剂稳定性与贮存试剂保存于28C,假设无污染,可稳定至失效期.试剂不可冰冻.6.1.4变质指示：当试剂有看得见的微生物生长,有浊度,或者未开盖的液体有

3、沉淀时,说明试剂已变质,不能继续使用.6.1.5考前须知：试剂中含叠氮钠0.95g/L为防腐剂.不可入口！防止接触皮肤及粘膜.应采取必要的预防举措使用试剂.6.2校准品：使用DiaSys公司提供的TruCalU校准品对自动分析仪进行校准,具体参见生化检验校准品和质控品.SOPt件.6.3质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件.7.仪器：奥林巴斯AU1000生化分析仪8.操作步骤8.1工程根本参数：参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪项目测定参数.SOPt件8.2仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪操作规程.SO项件9.检验结果的判断与分析10.质量限制：

4、在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析,以2s为质控警告限,3s为失控限,绘制质控药海无涯学无止境专注医学领域【实用】检验科SOP文件图,判断是否在控.质控规那么参见生化室室内质控操作规程.SOPt件.11.计算方法：以TruCalU复合校准品AST校准值校准仪器后,在病人结果可报告范围内,仪器直接报告可靠的检测结果.不使用校准品进行AST活力检测,可以直接使用AA/min均值乘以计算因子得到结果,但是这样所得结果的可靠性不如使用校准品.计算ALT活力的计算因子见下表：A/minX因子=AST舌力U/L底物起始的反响37C样品起始的反响37C340nm2143174

5、5334nm21841780365nm3971323512.参考值范围4不含磷酸毗哆醛含磷酸毗哆醛女性31U/L1035U/L男性37U/L1050U/L参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差异.根据好的实验室经验,每个实验室应建立自己的参考值.13.临床意义1,2丙氨酸氨基转移酶 ALT旧称谷丙转氨酶 GPT ,天门冬氨酸氨基转移酶AST旧称谷草转氨酶GOT.它们是氨基转移酶类的典型代表.氨基转移酶催化氨基从氨基酸转移给-酮酸的反响.ALT是肝脏的特异性酶,仅在肝胆疾病时显著升高.而AST水平的升高和心肌或骨骼肌损伤,以及肝组织损害等都有关.因此同时进行药海无涯学无止境专注医学领域【实

6、用】检验科SOP文件ALTffiAST的检测用于鉴别肝损伤和心肌或骨骼肌损伤.AST/ALTt匕率可用于肝病的鉴别诊断.比率1预示中度的肝损伤；比率1和严重肝病有关,常见慢性肝病.14.操作性能14.1线性范围2-800U/L.14.2精密度： 精密度的评估是根据NCCLS隹荐的标准方法,AU1000批内精密度小于3%,总精密度小于3%.用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS勺规那么.不含磷酸毗哆醛批内精密度n=20 x(U/L)s(U/L)CV(%)天间精密度n=20X(U/L)s(U/L)CV(%)样品125.10.823.25样品0样品251.31.57

7、3.06样品248.60.671.38样品31160.900.77样品31150.800.69含磷酸毗哆醛批内精密度n=20X(U/L)s(U/L)CV(%)天间精密度n=20X(U/L)s(U/L)CV(%)样品1样品144.01.593.61样品274.51.792.41样品277.03.053.97样品31743.181.83样品31873.371.8014.3方法学比拟：不含磷酸毗哆醛药海无涯学无止境专注医学领域【实用】检验科SOP文件本公司不含磷酸毗哆醛的试剂盒y与某商品化试剂盒x,同时对78个样品进行AST活力检测,将检测结果作方法学比拟,其统计结果如下：y

8、=0.98x-0.51U/Lr=0.999.含磷酸毗哆醛本公司含磷酸毗哆醛的试剂盒y与某商品化试剂盒x,同时对80个样品进行AST活力检测,将检测结果作方法学比拟,其统计结果如下：y=0.97x-0.79U/Lr=0.995.14.4灵敏度：本试剂的检测限为2U/L.14.5病人结果可报告范围2-800U/L.15.超出范围结果处理： 本法对AST活力检测白勺最大A/min在340、334nm为0.16,在365nm为0.08.当样品测定值超过上限时,应将样品用9g/L氯化钠溶液作1+9稀释,重新测定,结果乘以10.16.病危报警值的处理无.17.方法局限性17.1本法对AST活力检测的最大A

9、/min在340、334nm为0.16,在365nm为0.08.当样品测定值超过上限时,应将样品用9g/L氯化钠溶液作1+9稀释,重新测定,结果乘以10.17.2干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度1704mol/L,胆红素浓度684mol/L,甘油三酯浓度22.6mmol/L时没有观察到干扰.红细胞内富含AST,因此溶血血清检测结果明显偏高.18.补救举措：当仪器发生故障时,迅速联系仪器厂家进行维修.19.参考文献：ThomasL.AlanineaminotransferaseALT,AspartateaminotransferaseAS药海无涯学无止境专注医学领域【实用】检验科SOP文件T).I

10、n:ThomasL,editor.ClinicalLaboratoryDiagnostics.1sted.FrankfurtTH-BooksVerlagsgesellschaft;1998.p.55-65.MossDW,HendersonAR.Clinicalenzymology.InBurtisCA,AshwoodER.editors.TietzTextbookofClinicalChemistry.3rded.Philadelphia:W.B.SaundersCompany;1999.617-721.BergmeyerHU,HorderM,RejR.InternationalFederat

11、ionofClinicalChemistry(IFCC)ScientificCommittee,Analyticalsectionapprovedrecommendation(1985)onIFCCmethodsforthemeasurementofcatalyticconcentrationofenzymes.Part3.IFCCmethodforalanineaminotransferase(L-alanine2-oxoglutarateaminotransferase,EC).JClinChemClinBiochem1986;24:481-95.4.LorentzK,RohleG,SiekmannL.EinfuhrungderneuenSt