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文档简介

1、细胞计数及活力测定一、原理培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好，所以要进行细胞计 数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞，总细胞中活细胞所占的百分 比叫做细胞活力，由组织中分离细胞一般也要检查活力，以了解分离的过程对细胞是 否有损伤作用。复苏后的细胞也要检查活力，了解冻存和复苏的效果。用台盼兰染细胞，死细胞着色，活细胞不着色，从而可以区分死细胞与活细胞。利 用细胞内某些酶与特定的试剂发生显色反应，也可测定细胞相对数和相对活力。二、仪器、用品与试剂1、仪器与用品：普通显微镜、血球计数板、试管、吸管、酶标仪 （

2、或分光光度 计2、试剂:0.4%台盼兰,0.5%四甲基偶氮唑盐（MTT、酸化异丙醇3、材料:细胞悬液三、操作步骤（一细胞计数1、将血球计数板及盖片用擦试干净，并将盖片盖在计数板上。2、将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间。3、静置3分钟。4、镜下观察,计算计数板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按 下式计算:细胞数/ml=4大格细胞总数/ 4采0000注意:镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团占 10%以上,说明分散不好，需重新制备细胞悬液。匚细胞活力1、将细胞悬液以0.5ml加入试管中。2、加入0.5ml 0.4%台盼兰染液，染

3、色2一 3分钟。3、吸取少许悬液涂于载玻片上，加上盖片。4、镜下取几个任意视野分别计死细胞和活细胞数，计细胞活力。死细胞能被台盼兰染上色，镜下可见深兰色的细胞，活细胞不被染色，镜下呈无色 透明状。活力测定可以和细胞计数合起来进行，但要考虑到染液对原细胞悬液的加倍稀 释作用。（三MTT法测细胞相对数和相对活力活细胞中的琥珀酸脱氢酶可使 MTT分解产生兰色结晶状甲赞颗粒积于细胞内 和细胞周围。其量与细胞数呈正比，也与细胞活力呈正比。1、细胞悬液以1000rpm离心10分钟，弃上清液。2、沉淀加入0.5-1ml MTT,吹打成悬液。3、37C下保温2小时。4、加入4 5 ml酸化异丙醇（定容。打匀5、1000 rpm离心，取上清液酶标仪或分光光度计 570nm比色，酸化异丙醇调零 点。注意:MTT法只能测定细胞相对数和相对活力，不能测定细胞绝对数。附:1、0.4%台盼兰染液配制：台盼兰0.4克加双蒸水至100 ml。2、MTT配制：MTT 0.5克，溶于100 ml的

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