主要荧光素一览表

1、(1)荧光素类Fluorescein标准荧光素(Reference standard )之一,在其根底上进行结构改造,可产生一系列荧光素衍生物.Fluorescein 适用于Argon-ion Laser的488nm光谱线,有相对高的荧光吸收,较好的荧光产率以及良好的水溶性.标记蛋白时通常不会产生蛋白沉淀.与其他荧光素类衍生物一样,Fluorescein 具有光淬灭率高,pH敏感性强与发射波谱宽的缺点.主要应用于聚焦激光扫描微阵列( Confocal laser scanning microscopy )和流式细胞计应用(Flow cytometry ).FITC异硫氧酸荧光素,Fluores

2、cein isothiocyanate ,是荧光素衍生物的一种,5-FITC较6-FITC更经常使用.FITC的异硫氧酸基能与氨基反响,可用于标记氨基修饰DNA 一旦形成,产物极为稳定.适用于Argon-ion Laser 的 488nm光谱线,Abs/Em=492/519nm (pH=9.0).与蛋白的结合力也强.FITC具有荧光素衍生物的普遍特性.在水中易变坏,不能长久保存.FITC-Oligo 广泛用于杂交探针；FITC-多肽用于Edman降解蛋白测序；FITC也经常被用于蛋白电泳检 测(即使是毛细管电泳)和荧光能量激发转移测试.FAM竣基荧光素,Carboxyfluorescein ,

3、是荧光素衍生物的一种,5-FAM较6-FAM更经常使用.Carboxyfluorescein-5-succimidyl ester ,即 5-FAM (NHS 广泛存在于荧光标记试剂盒.与FITC相比,FAM与氨基反响更快,产物也更稳定,但 FITC结合蛋白的量更大且进程更易于限制.FAM也适用于 Argon-ion Laser的488nm光谱线,Abs/Em=492/518nm (pH=9.0),具有荧光素衍生物的普遍特性,在水中稳定.5-FAM主要应用于DNA自动测序中,标记其中的d/ddCTP (PE公司),也经常用于 PCFT物定量,核酸探针等.TET四氯荧光素,Tetrachloro

4、 fluorescein ,是荧光素衍生物的一种.TET以及HEX均是在FAM根底上加以改良的,氯原子使FAM的Abs与Em值都产生一定的红移,并在一定程度上减弱了 pH敏感性.TET也适用于 Argon-ion Laser 激发光源,Abs/Em=521/536nm.TET, HEX FAMffi TAMRAT配合用于 DNA自动测序中,其中TET用于标记d/ddATP,HEX用于标记d/ddGTP 或 d/ddATP (PE公司)HEX,是荧光素衍生物的一种六氯荧光素,Hexachloro fluorescein适用于 Argon-ion Laser 激发光源,Abs/Em=535/556

5、nm.(请参见 TET介绍)JOE竣基-4',5'- 二氯-2',7'- 二甲氧基荧光素,Carboxy-4',5'-dichloro-2' , 7'-dimethoxyfluorescein , 是荧光素衍生物的一种,6-JOE更被广泛使用.JOE荧光产量高,pH敏感性弱,适合于标记蛋白.6-JOE也适合于Argon-ion Laser激发光源,Abs/Em=520/548 (pH=9.0)常用于DNA自动测序,标记d/ddATP,也经常被用于进行电泳检测与PC*物定量.(2)罗丹明类(Rhodamine dye)R 110标准

6、荧光素(Reference standard )之一,在其根底上进行结构改造,即可产生一系列罗丹明类衍生物.与Fluorescein 类衍生物相比,罗丹明类荧光素具有更强的光稳定性,更高的荧光产量以及更低的pH敏感性罗丹明类荧光素极为适合于标记寡核甘酸,但蛋白会引起大多数罗丹明类荧光素的荧光淬灭,故大多 数不适宜用于标记蛋白.R110被用于DNA自动测序.TAMRA全称竣基四甲基罗丹明,即Carboxytetramethylrhodamine ,是罗丹明类荧光素衍生物,6- TAMRA被广泛使用.TAMRA1少数几个能用于标记蛋白的,6- TAMRA!用于Argon-ion Laser激发光源

7、,Abs/Em=547/573nm(Ph=8.0) , 6-TAMRA(NHS常用于荧光标记试剂盒中.6- TAMRA主要用于DNA自动测序中.Texas RedTexas Red是一个长波长荧光素,与Fluorescein 几乎没有波谱重叠,只适合于 Ar-Kr Laser 的568nm 光谱线或 He-Ne Laser 的 594 光谱线,比 Tetramethylrhodamine 和 LissamineTM Rhodamine B 波长更长, 荧光量更高.Texas Red在荧光微阵列和流式细胞计中更被经常作为第三波长标记(Third labels) .(3) BODIP偿BODIP偿

8、荧光素是由分子探针公司开发,以用来替代那些有局部缺陷的传统荧光素,普遍具有荧光产量高,pH敏感性低(无离子变化),光稳定性强以及发射波谱窄的优点,故BODIP淮荧光素已被广泛用于核酸,脂肪酸,磷脂以及各种受体.同时,由于在电泳过程中对序列片段影响小,故已被逐渐用于DNA自动测序.但相对而言,BODIPY类荧光素并不特别适合标记蛋白.BODIPY FL可代替 FluoresceinBODIPY R6(M代替 Rhodamine 6GBODIPY TMFRH弋替 TetramethylrhodamineBODIPY TR可代替 Texas Red这些BODIPY类荧光素具有与被替代物几乎类似的光谱

9、特征,能共用同样的光过滤器与激发光源,但更具优点.(4)其他荧光素Cascade blueCascade blue是在在(pyrene)结构根底上改造得来的,即sulfonated pyrene,它是一种短波长紫外激 发荧光素,与另一种常用的紫外荧光素 Aminocoumarin相比,Cascade blue 的Em与Fluorescein 有更小的 光谱重叠,有更高的荧光吸收和更大的荧光产量 .Cascade blue在376nm处存在第二个吸收峰,水中不稳定.Cascade blue主要用于标记蛋白,作为极性示踪子(polar tracer)可进行膜蛋白定位等.但也能用于标 记核酸和葡聚糖

10、.Aminocoumarin一种短波长紫外激发荧光素,通常使用的是7-amino-4-methylcoumarin,红移现象明显,比Cascadeblue有更长的发射波长,肉眼观察明显,更适用于confocal.表1:主要荧光激发光源Excitation sourcePrincipal spectrum lines(nn)Mercury-arc Lamp366,405,436,546,578Xenon-arc Lamp250-1000(continous)Tungsten-halogen Lamp350-1000(continous)Cr:LiSAF Laser430Helium-cadmiu

11、m Laser325,442Argon-ion Laser488,514Nd:YAG Laser532Helium-neon Laser543,594,633Krypton-ion Laser568,647表2 :主要荧光素一览表DyeAbs/Em Max(nm)NotesAcridine orange500/526green fluorescence bound to DNA, and red shift to 650 upon association with RNA, useful for flow cytometry.FAM492/518Most widely used green f

12、luorescein, absorption overlaps the 488 nm spectral line of the argon-ion laser, prone to photobleaching, pH sensitive betweenpH 5-8,is widely used for automated DNA sequencingFITC494/519Subject to argon-ion laser, widespread use for hybridization, immunoreagent, protein sequencing and FRETHEX535/55

13、6pH insensitive, used for automated DNA sequencingJOE520/548Intermediate-wavelength spectra, important dye for automated DNA sequencing.Lissaminerhodamine B570/590Optimal for 568 nm excitation photostable,used in confocal laser scanning microscope.easier to label protein than TMR.Pyrene340/378Excime

14、r:470Long excited-state lifetime, spectral shifts due to excimer emission,used in protein comformation and oxygen sensors.ROX570/590spectra between Lissamine rhodamine B and Texas Red, used in automated DNA sequencing.TET521/536pH insensitive, used for automated DNA sequencingTetramethylrhodamine555

15、/580pHinsensitive , photostable,Widely used for automatedDNA sequencingTexas Red595/615Suited for the Ar-Kr 568nm and He-Ne 594nm spectra, brighter and lower background than other red dyes as third label, used in confocal laser scanning microscopesDansyl Chloride372/NDEnvironmentally sensitive, larg

16、e stokes shift for protei sequencingDabcyl453/noneBroad absorption, no fluorescence, as a quenching group useful for fluorescence resonance energy transfer (FRET)CR-6G525/555Spectral between fluorescein andtetramethylrhodamine, good photostable, preferred nucleotide off proteinCascade Blue400/420Resistant to quenching upon protein conjugation, Water soluble.BODIPY R6G528/547Substitute for rhodamine