黄酮吸附特征

1、编号 091202115 毕业论文（ 2013 届本科）题 目： 葡萄籽黄酮在X-5树脂上的吸附特征 学 院： 农业与生物技术学院 专 业： 生物科学 作者姓名： zhangs 指导教师： sdd峰 职称： 讲师 完成日期： 2013 年 6 月 8 日 二 一 三 年 六 月目 录河西学院本科生毕业论文（设计）诚信声明1河西学院本科生毕业论文（设计）开题报告2摘要5Abstract5引言61 材料与方法61.1 材料与试剂61.2 仪器与设备61.3 试验方法62 结果与讨论82.1 大孔吸附树脂的筛选结果82.2 黄酮浓度与吸附率的关系92.3 吸附样品量与树脂量之比与吸附率的关系92.4

2、 静态动力学试验102.5 吸附等温线的绘制102.6 pH值对吸附的影响112.7 动态吸附试验113 结论14参考文献16致谢17附录 河西学院农业与生物技术学院生物科学专业2013届本科生毕业论文 河西学院本科生毕业论文（设计）诚信声明本人郑重声明：所呈交的本科毕业论文（设计），是本人在指导老师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，成果不存在知识产权争议，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名：二O一 三 年 六 月 八 日河西学

3、院本科生毕业论文（设计）开题报告论文题目葡萄籽黄酮在X-5树脂上的吸附特征学生姓名XXX所属学院农业与生物技术学院专业生物科学年级2009级指导教师XXX所在单位河西学院职称讲师开题日期2012.10选题的根据：选题的理论、实际意义并综述有关本选题的研究动态和自己的见解葡萄这种世界性水果栽培面积和产量长期居世界水果首位，其中80%的葡萄用于酿酒，13%用于食用，7%用于加工果汁及其他葡萄制品。酿酒后的葡萄籽与葡萄皮很多被作为工业废渣排放，这不仅浪费资源而且污染环境。截止2009年，甘肃省酿酒葡萄种植面积达14万亩，有多家葡萄酒生产企业，产能接近10万吨，年产量达2.41万吨，且酿酒葡萄种植基地

4、以及葡萄酒生产企业主要集中在河西地区，这说明河西地区每年会有大量葡萄酒生产下脚料产生，为保护环境，充分利用资源，需要对葡萄酒生产下脚料进行再利用。葡萄籽与葡萄皮中含有黄酮，现代科学证明黄酮具有多种保健功能，因此，对黄酮类化合物的研究与利用越来越受到人们的重视，其在食品，医药，保健品和化妆品等领域也将具有广阔应用前景。在实验室条件下，可以利用大孔吸附树脂对黄酮等植物天然成分进行分离，纯化，大孔吸附树脂具有物理化学稳定性高、吸附选择性独特、再生简便、解吸条件温和、使用周期长、易于循环利用、成本低等诸多优点。本研究主要立足于大孔吸附树脂对葡萄籽黄酮的吸附，通过比较几种树脂对葡萄籽黄酮吸附和解吸附能力

5、，确定使用X-5大孔吸附树脂对葡萄籽黄酮进行分离提纯，以及研究不同实验条件对X-5大孔吸附树脂吸附黄酮能力的影响。其实际意义有以下几点：1.比较几种大孔吸附树脂对葡萄籽黄酮的吸附与解吸附能力，确定本实验室对葡萄籽黄酮提取与纯化需使用的大孔吸附树脂2.通过研究X-5大孔吸附树脂对葡萄籽黄酮的静态吸附和动态吸附，确定分离提纯葡萄籽黄酮的各种最佳条件，优化分离提纯工艺3.通过对葡萄酒厂下脚料葡萄籽中黄酮的分离纯化研究，可以充分利用资源，废物利用，减少废料对环境的污染论文的主要内容、基本要求及其主要的研究方法：本研究的主要内容：主要从6种大孔吸附树脂中筛选出分离纯化葡萄籽黄酮的最佳树脂，然后分别进行静

6、态吸附试验和动态吸附试验。其中静态吸附试验研究上样黄酮浓度，上样量与树脂量比（V/m），上样液pH对吸附率的影响及静态动力学试验；动态吸附试验使用湿法装柱，研究上柱液流速对树脂动态吸附性能的影响，乙醇浓度、洗脱体积、洗脱流速对解吸率的影响，从而确定较佳的吸附工艺条件。基本要求：试验数据的记录真实、客观、准确；文章格式要求写作规范、主题突出、层次分明；熟练地掌握计算机操作，解决和处理毕业论文（设计）相关问题。要积极主动地与指导老师联络，以便论文完成顺利，为论文答辩做好充分准备。主要研究方法如下:最佳大孔树脂筛选；NaNO2-Al(NO3)3比色法测定计算黄酮浓度；湿法装柱；静态吸附特征研究；动态

7、吸附特征研究。论文进度安排和采取的主要措施：进度安排：2012年11月 选题准备阶段2012年12月 整理阅读主要资料2013年 2月 设计与确定实验方案，样品采购，药品准备2013年 3月 树脂选择，静态吸附试验及数据整理2013年 4月 动态吸附试验及数据整理，完成初稿2013年 5月 初稿修改，完成终稿2013年 6月 论文答辩、上交采取的主要措施：一、根据论文题目参阅有关文献资料，写出综述报告二、整理阅读主要资料设计与确定实验方案三、筛选最佳大孔吸附树脂并进行静态、动态吸附试验四、解吸附试验主要参考资料和文献：李凤英,李润丰(2002).葡萄籽中主要化学成分及其开发应用.河北职业技术师

8、范学院学报 (02):26-31.吴嘉慧,袁春龙,宋洋波(2011).葡萄籽功能性成分及其应用.日用化学工业 41(3):216-221.王克勤,罗军武,刘仲华等(2009).葡萄皮中黄酮类化合物的提取分离与鉴定.食品与机械 25(6):212-215.张 来,杨碧昌,何绍红等(2011).植物黄酮类化合物的基础研究及应用.安顺学院学报 13(3):132-135.刘彬果,郭文勇(2003).大孔树脂吸附技术在中药制剂中的应用.解放军药学学报 19(6):452.张亚梅,张晓娟,简 晖等(2009).大孔吸附树脂树脂纯化山腊梅叶中总黄酮的研究.中草药40(8):1226-1229.彭世顺,彭拓

9、华,张少俊等(2011).大孔树脂吸附人参总皂苷的使用寿命及强化再生的研究.今日药学21(5):272-276.张德一,张秀荣(2010).大孔吸附树脂在中药有效成分分离纯化中的应用.吉林医药学院学报31(6):356-359.任荣军(2008).大孔树脂吸附技术在黄酮类成分分离与纯化中的应用.中国药业 17(6):71-73.指导教师意见：签 名： 年 月 日教研室意见负责人签名：年 月 日学院意见 负责人签名：年 月 日18 河西学院农业与生物技术学院生物科学专业2013届本科生毕业论文 葡萄籽黄酮在X-5树脂上的吸附特征摘 要：为分离、纯化葡萄籽黄酮，比较了6种大孔树脂的静态吸附过程，筛

10、选出适合吸附葡萄籽黄酮的树脂；研究了葡萄籽黄酮在大孔吸附树脂上的静态和动态吸附特性，并确定分离葡萄籽黄酮的最佳条件，结果表明：X-5大孔吸附树脂对葡萄籽黄酮有较好的吸附分离性能，其对葡萄籽黄酮的静态吸附平衡时间为4小时，吸附形式为单分子吸附，吸附样液最适pH值为5.0；操作流速、葡萄籽黄酮浓度、pH等工艺条件对X-5树脂的动态吸附动力学曲线都有影响，确定树脂柱的较佳操作条件为：上样流速1mL·min-1，吸附浓度2mg·mL-1，洗脱剂为95%乙醇，洗脱体积1.6BV，洗脱流速1mL·min-1。关键词：葡萄籽；黄酮；大孔吸附树脂Adsorption Charac

11、ter Of Flavonoids From Qrape Pip By X-5 ResinAbstract：For the separation and purification of flavonoids from grape pip, compared the static absorption process of 6 different kinds of macroporous resin, screened out the proper resin which can absorb the flavonoids from grape pip. Also researched the

12、static and dynamic adsorption characteristic of flavonoids from grape pip ape pip on the macroporous resin and determined the optimal conditions of separation of flavonoids from grape pip. X-5 macroporous resin has a better performance of absorption and separation to the flavonoids from grape pip. T

13、he equilibrium time of X-5 macroporous resin to the static absorption of flavonoids from grape pip is 4h. The absorption form is single molecular adsorption, and the optimum pH value of absorption sample solution is 5.0. The flow rate of the operation, the concentration of the flavonoids from grape

14、pip, the pH value other and technological conditions have an impact on dynamic absorption kinetic curve of the X-5 macroporous resin. Finally, ascertained the best operation condition of resin column is like below. The sampling flow rate is 1mL·min-1, the adsorption concentration is 2mg·mL

15、-1, the eluent is 95% ethanol, the elution volume is 1.6BV and the flow rate of elution is 1mL·min-1.Key words：Grape pip;Flavonoids;Macroporous adsorption resin引言葡萄是一种世界性水果，栽培面积和产量长期居世界水果首位，其中80%的葡萄用于酿酒，13%用于食用，7%用于加工果汁及其他葡萄制品（刘崇怀 2012）。酿酒后的葡萄籽很多被作为工业废渣排放，这不仅浪费资源而且污染环境（李华和绍建辉 2004）。葡萄酿酒或进行果汁加工的

16、下脚料主要是葡萄皮与葡萄籽，两者约占鲜果重量的20%（李凤英和李润丰 2002）。葡萄籽与葡萄皮中含有黄酮（吴嘉慧等 2011；王克勤等 2009），现代科学研究证明黄酮类化合物具有抗氧化、抗菌消炎、抗过敏、抗病毒、抗癌（赵梅和周琴 2013）、抗衰老、降血糖、抑制高血压高血脂及预防心血管疾病、护胃保肝等多种药理作用（刘金霞等 2002；曹杰 2010；李荣和李俊 2005）。因此，对黄酮类化合物的研究与利用越来越受到人们的重视，其在食品，医药，保健品和化妆品等领域也将具有广阔应用前景（张来等 2011；黄池宝和罗宗铭 2000；郭芳彬 2005）。大孔吸附树脂具有物理化学稳定性高、吸附选择性

17、独特、再生简便、解吸条件温和、使用周期长、易于循环利用、成本低等诸多优点，广泛应用于天然产物的提取分离，在植物天然活性成分的分离、纯化中得到广泛应用（张亚梅等 2009；张德一和张秀荣 2010；彭世顺等 2011；刘彬果和郭文勇 2003）。本实验采用X-5大孔吸附树脂对葡萄酒下脚料中葡萄籽黄酮进行分离与纯化，并对葡萄籽黄酮在大孔吸附树脂上的静态和动态吸附特性进行初步研究，为葡萄籽黄酮进行深加工奠定基础。1 材料与方法1.1 材料与试剂葡萄籽：购于滨河集团的葡萄酒酿造下脚料；芦丁、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、无水乙醇为分析纯；大孔吸附树脂：D301，001×7，AB-8，D301，

18、X-5，717。1.2 仪器与设备 722型可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司），HZ-D3型循环水式多用真空泵（常州国华电器有限公司），BT300FJ型恒流泵（保定申辰泵业有限公司），PL203型电子天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司），XO-SM50型超声波发生器（南京先欧仪器制造公司）。1.3 试验方法1.3.1 葡萄籽黄酮粗提液制备葡萄籽粉碎，用50%乙醇，料液比为1:5（m/V）混合，超声处理10min，抽滤得滤液，测黄酮含量备用。1.3.2 黄酮含量测定 本实验采用NaNO2-Al(NO3)3比色法（张斌等 2010）测定黄酮含量，在510nm处测吸光值。利用贾贵华等的方法

19、得到标准曲线方程为：Y=1.2450X0.0024（R2=0.9992），其中X黄酮浓度(mg·mL-1)；YOD值。1.3.3 大孔吸附树脂的预处理新树脂孔内含有合成树脂时残留的致孔剂等杂物，故应将其出去，用95%乙醇浸泡树脂，倾去上浮的杂物，然后将树脂装柱：在柱内加入约柱体积1/4的乙醇，将树脂小心沿管壁导入柱中。通入乙醇，控制流速每分钟为树脂柱床体积的1/25，直至流出液与蒸馏水混合不产生浑浊为止。再用蒸馏水洗至流出液无醇味即可，最后用蒸馏水浸泡备用。使用时真空抽滤，成为抽干树脂。1.3.4 静态吸附试验1.3.4.1 大孔吸附树脂材料的确定准确称取经过预处理后抽干的6种树脂各

20、1g装入三角瓶中，分别加入吸附样品6mL，室温放置12h，测定吸附后的溶液中黄酮浓度，根据式（1）、（2）计算各树脂室温下的吸附量和吸附率。再将饱和吸附后的树脂过滤并用蒸馏水洗，抽干后加入10mL无水乙醇洗脱12h，测定无水乙醇中黄酮浓度，根据式（3）计算解吸率。然后根据吸附率与解吸率选择最佳树脂。 Q=(C0Ce)V1/m （1） E=(C0Ce)/C0×100 （2） D=CxV2/(C0Ce)V1×100 （3） Qt=(C0Ct)V1/m （4）式中Q吸附量（mg·g-1）；C0初始浓度（mg·mL-1）；Ce平衡浓度（mg·mL-1）

21、；V1加入的原液体积（mL）；m树脂用量（g）；E吸附率（%）；D解吸率（%）；Cx洗脱液浓度（mg·mL-1）；V2洗脱液体积（mL）；Qtt时刻树脂吸附量（mg·g-1）；Ctt时刻吸附液浓度（mg·mL-1）。1.3.4.2 黄酮浓度与吸附率的关系分别称取筛选出的树脂0.5g装入6个三角瓶中，然后在6个三角瓶中分别加入浓度为4mg·mL-1、3.5mg·mL-1、3mg·mL-1、2.5mg·mL-1、2mg·mL-1、1mg·mL-1的吸附样品，室温静置12h，测定并计算不同浓度下树脂对葡萄籽黄酮

22、的吸附率。1.3.4.3 吸附样品量与树脂量之比与吸附率的关系分别称取筛选出的树脂0.5g装入6个三角瓶中，然后在6个三角瓶中分别加入2mL、4mL、6mL、8mL、10mL、12mL葡萄籽黄酮溶液，即V/m分别为1:4、1:8、1:12、1:16、1:20、1:24，室温静置12h，测定并计算不同浓度下树脂对葡萄籽黄酮的吸附率。1.3.4.4 静态动力学试验综合1.3.4.2、1.3.4.3步骤筛选出的最佳体积与浓度进行吸附试验，每隔1h测定其黄酮含量，根据（4）式计算吸附量，绘制静态动力学曲线。1.3.4.5 吸附等温线的绘制分别称取筛选出的树脂0.5g装入6个三角瓶中，然后在6个三角瓶中

23、分别加入浓度为4mg·mL-1、3.5mg·mL-1、3mg·mL-1、2.5mg·mL-1、2mg·mL-1、1mg·mL-1的吸附样品，静置12h，测定并计算不同浓度下树脂对黄酮的吸附量，以静态吸附量和对应的平衡浓度作图，即为该温度下吸附树脂对葡萄籽黄酮的吸附等温线。1.3.4.6 吸附液pH值的选择准确称取抽干的树脂0.5g，置于三角瓶中，再依次加入不同pH值分别为3、4、5、6、7、8的葡萄籽黄酮溶液各4mL，测定其葡萄籽总黄酮的静态吸附量，研究其对葡萄籽总黄酮吸附性能的影响，确定适宜上柱的pH值。1.3.5 动态吸附试验树脂

24、湿法装柱（2.6cm×40cm），葡萄籽黄酮提取液以一定的流速通过吸附柱，测定流出液中葡萄籽黄酮浓度，流出液与上样液中葡萄籽黄酮浓度比值的百分数为漏出率，漏出率对上样液体积作图，为树脂的动态吸附曲线。研究上柱液流速对树脂动态吸附性能的影响，乙醇浓度、洗脱体积、洗脱流速对解吸率的影响，从而确定较佳的吸附工艺条件。2 结果与讨论2.1 大孔吸附树脂的筛选结果6种大孔吸附树脂对于葡萄籽黄酮的吸附率与解吸率见表1，由表1可以看出树脂D301、X-5、717吸附率较高，而D101、AB-8、X-5解吸率较高。综合吸附率与解吸率，可以看出树脂X-5对于葡萄籽黄酮有较好的吸附性能与解吸性能，因此本

25、实验选用X-5大孔吸附树脂来分离、纯化葡萄籽黄酮。表1 不同树脂的静态吸附与解吸特性比较Tab.1 Comparsions of static adsorption and desorption performance of different resins树脂型号D101001×7AB-8D301X-5717吸附率73%64%69%96%75%87%解吸率17%10%13%5%34%5%2.2 黄酮浓度与吸附率的关系图1 黄酮浓度对吸附特性的影响Fig.1 Effect of concentration on the absorption performance分别测定葡萄籽黄酮溶

26、液在不同浓度4mg·mL-1、3.5mg·mL-1、3mg·mL-1、2.5mg·mL-1、2mg·mL-1、1mg·mL-1时的静态吸附量，结果如图1所示，由图1可以看出在浓度2mg·mL-1时，大孔吸附树脂X-5对于葡萄籽黄酮有较好的吸附效果，因此确定浓度2mg·mL-1为宜。图2 吸附样品量与树脂量之比对吸附特性的影响Fig.2 Effect of ratio between the absorption sample amount and the resin amount on the absorption

27、 performance2.3 吸附样品量与树脂量之比与吸附率的关系分别称取筛选出的树脂0.5g装入6个三角瓶中，然后在6个三角瓶中分别加入2mL、4mL、6mL、8mL、10mL、12mL葡萄籽黄酮溶液，静置12h，测定计算不同浓度下树脂对葡萄籽黄酮的吸附率作图如图2所示，可见在上样量为4mL即树脂量与上样量之比为1:8时有较高的吸附效果，故选择吸附树脂量与上样量之比（m/V）为1:8为宜。2.4 静态动力学试验大孔吸附树脂的静态吸附动力学曲线如图3所示，该曲线反映了树脂吸附量与时间的变化关系。由图3可知，在2h内，X-5树脂对葡萄籽黄酮类物质的吸附为快速平衡型，起始阶段吸附量较大，可以称之

28、为第一阶段。第二阶段为慢速吸附过程，到4h后，吸附量变化平稳，其静态吸附基本达到平衡。因此X-5大孔吸附树脂的静态平衡吸附时间为4h。根据Langmuir提出的吸附动力学方程：LnQe/(QeQt)=kt （5）式中Qtt时刻树脂吸附量（mg·g-1）；Qe平衡树脂吸附量（mg·g-1）；k平衡速率常数（min-1）。图3 X-5大孔吸附树脂的静态吸附动力学曲线Fig.3 Adsorption kinetic curve of celery flavones on x-5macroporous adsorbent resin以-ln(QeQt)/Qe对时间t作图，拟合后得一

29、直线方程-ln(QeQt)/Qe=t，拟合相关系数为0.9785，根据斜率可得X-5树脂的平衡速率常数为1.3718min-1，表现为单分子吸附形式，该形式的起始瞬间吸附速率极大。这种吸附速率快、容量大的特点使X-5大孔吸附树脂对葡萄籽黄酮的吸附具有较高的工业应用价值。2.5 吸附等温线的绘制树脂的吸附等温线见图4，用Langmuir公式和Freundlich公式进行拟合。根据Langmuir等温方程：Ce/Qe=Ce/Qmax+1/aQmax （6）式中Qmax每克湿树脂的最大吸附量（mg·g-1）；Qe平衡树脂吸附量（mg·g-1）；a常数；以Ce/Qe对Ce作图得一直

30、线，斜率为1/Qmax，截距为1/aQmax，进行方程回图4 X-5吸附树脂吸附等温线Fig.4 Adsorption isotherm curve of celery flavoneson X-5 macroporous adsorbent resin归，并计算其决定系数R12。根据Freundlich等温方程:Qe=KCn （7）式中n、K常数，在双对数坐标下作图，lnQe=nlnC+lnK，得线性方程，进行方程回归，并计算其决定系数R22，结果见表2。由表2可以看出，Langmuir模型比Freundlich模型能够更好地描述葡萄籽黄酮在X-5树脂上的吸附平衡过程。表2 模拟方程参数Ta

31、b.2 Calculated results of model parametersLangmuir方程Freundich方程Qmax（mg.g-1）R2nK（×10-3）R239.533112.600.84360.04130.01910.6551图5 pH值对吸附特性的影响Fig.5 Effect of pH value on the absorption performance2.6 pH值对吸附的影响分别测定葡萄籽黄酮溶液在不同pH值3、4、5、6、7、8时的静态吸附量，结果如图5所示，由图5可以看出，一定的酸性条件有利于葡萄籽黄酮的吸附。其原因可能是黄酮类化合物含有酚羟基，在

32、酸性条件下以分子状态存在，主要以范德华力与树脂进行物理吸附。而在碱性条件下，以离子状态存在，不易与树脂发生物理吸附作用，因此确定吸附pH值5为宜。2.7 动态吸附试验2.7.1 动态吸附特征曲线图6 X-5树脂动态吸附曲线Fig.6 The dynamic absorption kinetic curve of the resin将浓度为5.08mg·mL-1的黄酮样品液以1mL·min-1的流速通过装有X-5树脂（2.6cm×40cm）的层析柱进行动态吸附，分段收集流出液，每2mL为1份，共收集了13份。通常情况下流出液的目标物浓度达到上样液目标物浓度的1/10

33、时，认为达到了目标物的泄漏点。由图6可看出，X-5树脂在此试验条件下对葡萄籽黄酮有比较好的吸附性能，泄漏点为16mL左右。2.7.2 上样流速的确定图7 上样流速对吸附率的影响Fig.7 The influences of sampling flow rate on the adsorption rate将浓度为3mg·mL-1葡萄籽粗黄酮样液20mL以不同的流速通过柱状大孔树脂，收集流出液并测定流出液中总黄酮的吸附量，计算不同流速下树脂对黄酮的吸附率。由图7可以看出，上样流速对吸附率有很明显的影响，流速越慢吸附率越高，选择1mL·min-1的上样流速为宜。2.7.3 水洗

34、体积的确定使用蒸馏水洗涤树脂柱，起到了很好的除杂作用，经水洗后的产品呈黄褐色脆性固体，而不用水洗时产物呈黄褐色粘稠物，具有明显的甜味。一般当流出的水洗剂清亮透明时说明大部分杂质已经被去除。用水洗时，开始流出的溶液颜色较深，当水洗剂用量为40mL时，流出液已经清亮，此时已基本把水溶性杂质洗脱下来。所以水洗体积确定为40mL即0.8BV。2.7.4 解吸剂浓度的确定常用的解吸剂是以最能溶解吸附质为原则，但要求沸点低，易于蒸馏回收，且同时要考虑环境保护等问题，综合考虑以上因素，选用水溶性好、低沸点的极性有机溶剂乙醇作解吸剂最好。用含有62mg黄酮的吸附液进行吸附，待吸附液完全进入层析柱后关闭阀门，饱

35、和吸附30min，然后用40mL蒸馏水正向洗脱，然后分别取50mL55%、65%、75%、85%、95%的乙醇溶剂进行洗脱，解吸流速控制为1mL·min-1，分别收集水洗液和醇洗液并分别测定其中的总黄酮。图8 乙醇浓度对解吸率的影响Fig.8 The influences of ethanol concentration on the absorption rate 由图8可以看出，解吸率是随着乙醇浓度升高而升高，所以选择95%的乙醇作为洗脱剂。2.7.5 洗脱液体积的确定在确定洗脱剂的最佳浓度后，对洗脱剂的最佳用量进行确定，在充分洗脱所吸附的物质的前提下，尽量节省洗脱剂的用量。用含

36、有66mg黄酮的吸附液进行吸附，待吸附液完全进入层析柱后关闭阀门，饱和吸附30min，用10mL蒸馏水洗脱，然后分别用40mL、50mL、60mL、70mL、80mL、90mL、100mL的95%乙醇、流速控制为1mL·min-1正向洗脱，分别测定每份洗脱液中黄酮含量和水洗部分黄酮的含量。图9 洗脱体积对解吸率的影响Fig.9 The influences of elution volume on the desorption rate由图9可以看出，在洗脱体积达到80mL后解吸率幅度变化很小，从试验时间和洗脱剂用量两方面考虑，选择乙醇洗脱体积为80mL即1.6BV。2.7.6 洗脱

37、流速的确定解吸流速一般都要求慢，这是因为流速过快，洗脱性能差，洗脱不完全。但是流速过慢，会延长生产周期，增加成本。因此有必要选择一个合适的洗脱流速使之既能达到一定的洗脱率又能尽可能的缩短洗脱时间。用含有66mg黄酮的吸附液进行吸附，待吸附液完全进入层析柱后关闭阀门，饱和吸附30min，然后用10mL蒸馏水正向洗脱，收集水洗液。将吸附好的树脂均以80mL的95%乙醇用不同流速进行洗脱，分别收集洗脱液并测定其中黄酮含量。图10 洗脱流速对解吸率的影响Fig.10 The influences of the flow rate of elution on the desorption rate由图1

38、0可以看出，洗脱率随洗脱流速加快而降低，综合洗脱率和生产周期选择1mL·min-1的流速洗脱。3 结论弱极性大孔树脂X-5是吸附葡萄籽黄酮类化合物较为理想的树脂；树脂表现为单分子吸附，吸附平衡速率常数为1.3718min-1，静态平衡吸附时间为4h；20时，吸附等温线符合Langmuir方程。一定的酸性条件下，有利于树脂对葡萄籽黄酮类物质的吸附，适宜的pH值为5.0。影响X-5大孔吸附树脂动态动力学曲线的因素有流速、吸附液浓度、上样量与树脂用量之比；吸附柱较佳工作条件：流速1.0mL·min-1，吸附液浓度0.4 mg·mL-1，上样量与树脂用量比为1:8。吸附后

39、树脂洗脱蒸馏水体积为0.8BV，洗脱流速1.0mL·min-1；解吸剂为95%乙醇，用量1.6BV，洗脱流速亦为1.0mL·min-1。参考文献曹 杰(2010).蔬菜和水果中黄酮类化合物检测方法及应用研究.哈尔滨:哈尔滨医科大学.郭芳彬(2005).蜂产品中黄酮类化合物的保健作用.养蜂科技 (2):28-31.黄池宝,罗宗铭(2000).黄酮类化合物在食品中应用.广州化工 28(4):35-37.贾贵华,任雪峰,吴冬青等(2013).响应面分析法优化党参总黄酮提取工艺研究.中兽医医药杂志 (1):12-16李 华,邵建辉(2004).葡萄酒酿造过程中“关键质量控制点”的确

40、定与控制.西北农林科技大学学报(自然科学版) (10):48-52.李凤英,李润丰(2002).葡萄籽中主要化学成分及其开发应用.河北职业技术师范学院学报 (02):26-31.李 荣,李 俊(2005).黄酮类化合物药理活性及其构效关系研究进展.安徽医药 9(7):481-483.刘彬果,郭文勇(2003).大孔树脂吸附技术在中药制剂中的应用.解放军药学学报 19(6):452.刘崇怀(2012).中国葡萄属(Vitis L.)植物分类与地理分布研究.郑州:河南农业大学.刘金霞,邓淑华,杨贺松等(2002).黄芩茎叶总黄酮的抗炎作用机制的研究.中国药理学通报 18(6):713-714.彭世

41、顺,彭拓华,张少俊等(2011).大孔树脂吸附人参总皂苷的使用寿命及强化再生的研究.今日药学 21(5):272-276.任荣军(2008).大孔树脂吸附技术在黄酮类成分分离与纯化中的应用.中国药业 17(6):71-73.吴嘉慧,袁春龙,宋洋波(2011).葡萄籽功能性成分及其应用.日用化学工业 41(3):216-221.王克勤,罗军武,刘仲华等(2009).葡萄皮中黄酮类化合物的提取分离与鉴定.食品与机械 25(6):212-215.王克勤,罗军武,刘仲华等(2007).XDA21大孔树脂对葡萄籽黄酮分离纯化的研究.食品与机械 23(3):65-69.张 斌,孙兰萍,马 龙等(2010)

42、.大孔树脂分离纯化花生壳总黄酮的研究.中国粮油学报 25(2):126-130.赵 梅,周 琴(2013).黄芩中黄酮类化合物抗肿瘤作用的研究进展.中国药房 24(11):1050-1052.张 来,杨碧昌,何绍红等(2011).植物黄酮类化合物的基础研究及应用.安顺学院学报 13(3): 132-135.张亚梅,张晓娟,简 晖等(2009).大孔吸附树脂树脂纯化山腊梅叶中总黄酮的研究.中草药 40(8):1226-1229.张德一,张秀荣(2010).大孔吸附树脂在中药有效成分分离纯化中的应用.吉林医药学院学报 31(6):356-359.致 谢本论文是在ssdd老师的指导和本人的努力以及同

43、实验室同学的帮助下共同完成的。在整个论文完成的过程中，从最初的课题设计到其后的具体操作、结果分析、论文撰写，张老师都给予了大量的指导。其中，张老师所表现出的对于科学研究的开拓创新、严谨求实精神以及对于本职工作的一丝不苟、吃苦耐劳精神值得我终生学习，在此我谨向张老师表示最诚挚的谢意！同时，本次论文的完成同几年来培养我的各位农生院的老师是分不开的，在此也特别感谢你们！同时还要感谢和我同组的实验人员及帮助过我的一些同学，正是有了他们的帮助，我才能顺利地完成毕业论文。感谢农业与生物技术学院对我的支持和关怀！感谢母校河西学院对我四年的培养和教育！在论文即将完成之际，再次向所有关心和帮助过我的各位老师、同学、朋友致以我最诚挚的谢意和最衷心的祝福！附录:河西学院本科生毕业论文（设计）题目审批表学院：农业与生物技术学院 专业：生物科学学生姓名XXX班 级09（1）学 号