1乙肝表面抗原检测操作规程

1、乙型肝炎病毒表面抗原检测（ELISA）1原理：在微孔板上预包被被纯化的乙肝表面抗体（HBsAD ,配以酶标记抗体（HbsAb-HRP及TMB等其它试剂，采用夹心 法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗原（HBsA。2试剂：2.1 试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）2.2 试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司2.3 包装规格：96Test/Kit2.4 试剂盒组成：HbsAb预包被微孔板（包被HbsAb）, HbsAg 酶标抗体（含 HRP标记HbsAb） , HbsAg阳性对照（含基因 工程HbsAg）, HbsAg阴性对照（正常人血清），HbsAg样品稀 释液（含B

2、SA缓冲液），浓缩洗涤液（PBS-T缓冲液），底物 A （含H2O2,底物B （含TMB,终止液（含 H2SO4,封板 膜，自封袋，说明书。2.5 试剂储存条件及有效期：28 c避光保存，有效12个 月。3样本采集：取静脉血3-4ml于干净容器中分离由血清或血浆标本， 如不及时测定可置于4 c冰箱保存，如长期保存需置于-15至-20 C冻存，并避免样本反复冻融。高脂血、高胆红素及 溶血样本可能会影响试验结果的准确性，建议不使用。4所需仪器4.1 全自动酶免分析仪4.2 新鲜蒸储水或去离子水4.3 酶标仪（单波长 450nm或双波长450nm/630nm）4.4 微量移液器4.5 37 C恒温箱

3、或水浴箱4.6 洗板机或洗瓶5检验方法5.1 平衡：将试剂盒各组分从盒中取由，平衡至室温 （1825C）,微孔板板开封后，余者即时以自封袋封存。5.2 配液：浓缩洗涤液配置前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸储水去离子水按1: 19稀释后使用。5.3 编号：取所需数量微孔条固定于支架，按序编号。5.4 稀释：每孔加入20ul样品稀释液。5.5 加样：分别在相应孔中加入100ul阴、阳性对照血清或待测样本。5.6 温育：置 37c温育60min。5.7 加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50ul。5.8 温育：置 37c温育30min。5.9 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次、洗涤后扣干（每

4、次应保持3060s的浸泡时间）。5.10 显色：每孔加入底物 A、B各50ul ,轻拍混匀，37 C 暗置30min。5.11 终止：每孔加入终止液 50ul ,混匀。5.12 测定：用酶标仪单波长 450nm或双波长450nm/630nm测定各孔OD固（用单波长测定时，需用空白对照调零），并记录结果。6结果判定与分析临界值（C.O.）的计算：临界值=阴性对照孔O阡均值*2.1 ; 阴性对照OD均值小于0.05时以0.05计算。结果判定：样本 OD固S/C.O.=1者为HbsAg阳性样本ODW S/C.O.0.1或阳性对照均值0.4时， 实验无效，应重新试验。7质量控制每次试验用HBsAg的质

5、控血清同步检测，S/CO值应在控制范 围内；如失控，检查试剂校期、储藏温度、试验温度是否正 常、操作步骤是否正确，直至从新试验使其在控。8参考范围阴性9临床意义在血清或血浆中HbsAg的存在表明有急性乙肝或慢性乙肝 或为无症状携带者。10操作性能灵敏度为ng/ml ,特异性高11方法的局限性11.1 此方法仅适用于个体的血清或血浆样本的检测，不适合与混合血清或血浆样本及其他体液样本。11.2 该方法仅作为定性检测乙型肝炎病毒表面抗原。11.3 试剂盒中的阳性对照不能作为灵敏度的考核指标，阳性对照仅用于按照说明书步骤操作时，验证试剂盒中的组分是否有效。11.4 由于方法学的局限性，本实验结果仅作

6、为判断疾病的 一项依据，如需对患者进行确诊，建议施于其它检验手段予 以确认。12注意事项12.1 试验前请详细阅读试剂说明书，任何违反试剂说明书的使用或操作行为，都可能得到不准确的结果。12.2 所有样本、试剂和各种废弃物应按传染物处理，严格防止交叉感染，严格健全和执行消毒隔离制度。对于含有传 染病和怀疑含有传染源的物质，应有合适的生物安全保证制 度，下列为有关注意事项，但不仅限于此：1.1 ）戴手套处理样本和试剂；1.2 ）不要用嘴吸样；1.3 ）不可在处理这些物品时吸烟、进食、喝饮料、美容和 处理隐形眼镜等；1.4 ）用消毒剂对溅曲的样本和试剂进行消毒；1.5 ）按科室有关条列来消毒和处理

7、所有样本、试剂和潜在 的污染物。12.3 加试剂前应先将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。建议使用加液器进行加液，并经常对加液器进行校准。加液时注 意勿使加液枪头接触孔内液体，避免液体间相互污染。仔细 操作，避免加样时在孔中产生气泡。12.4 每板设阴、阳性对照各两孔，设空白对照1孔，空白对照不加样本和酶标抗体、其余各步相同。12.5 避免在孵育和保存过程中试剂被阳光暴晒和接触次 氯酸等强氧化性物质。12.6 孵育温度要保持在 37C+-1 C,温度过高或者过低可 能会影响检测结果的准确性。12.7 封模板为一次性使用，重复使用可能导致污染。12.8 洗板机在使用结束后要使用新鲜蒸储水或高品质去离子

8、水冲洗干净，以防止管路堵塞和腐蚀。洗涤时各孔军需 加满但不溢由，防止孔内有残留物未能洗净。12.9 每次洗涤结束请尽早进行后续加液操作，避免长时间暴露而引起错误结果。12.10 使用全自动生化仪器时，封板和洗版后扣干步骤可 以省略。但需要注意保证洗涤液的加液量，保证洗涤后将微 孔板孔中的洗液充分吸干，以免对实验造成错误的结果。12.11 确保反应孔板的底清洁干燥，在读板前要确保孔中液体没有气泡。12.12 终止后尽早用酶标仪进行读数测量（建议在 10min 内完成读值），避免放置过长时间而引起的错误结果。12.13 检测结果用酶标仪进行读数测量。样本的检测读数与样本中抗原的浓度不一定呈正相关。12.14 检测结果呈阴性的样本，不能绝对保证样本中没有 低浓度抗原的存在，不能完全排除HB靡染的可能。12.15 该免疫测试不能绝对排除非特异性反应