抗生素类药物分析没有幻灯片标题ppt课件

1、第十一章第一节第一节 概述概述抗生素的定义抗生素的定义 抗生素是细菌、放线菌和真抗生素是细菌、放线菌和真菌等微生物的代谢产物，对各种菌等微生物的代谢产物，对各种病原微生物有强大的抑制或杀灭病原微生物有强大的抑制或杀灭作用。作用。一一 抗生素药物的特点抗生素药物的特点生物发酵，生物发酵， 化学纯化，精化学纯化，精致，化学修饰等过程，最致，化学修饰等过程，最后制成制剂，构造，组成后制成制剂，构造，组成更复杂。更复杂。 化学纯度低，有三多：同化学纯度低，有三多：同系物多，异构体多，降解物多。系物多，异构体多，降解物多。发酵过程不易控制。消费工艺发酵过程不易控制。消费工艺复杂易受污染。分子构造大多复杂

2、易受污染。分子构造大多不稳定，降解后疗效下降、失不稳定，降解后疗效下降、失效或添加毒副作用。活性产物效或添加毒副作用。活性产物易发生变异。易发生变异。 发酵液中杂质发酵液中杂质 无机盐、脂无机盐、脂肪、各种蛋白质、各种降解产肪、各种蛋白质、各种降解产物、色素、热原、毒性物质物、色素、热原、毒性物质 检查检查 添加异常毒性、细菌内添加异常毒性、细菌内毒素、热原、降压物质、无菌毒素、热原、降压物质、无菌 二二 质量分析的测定方法质量分析的测定方法一生物学方法一生物学方法1 1 测定抗生素抑菌或杀菌的才干测定抗生素抑菌或杀菌的才干优点优点1 1、与临床效果一致、与临床效果一致2 2、灵敏度高、灵敏度

3、高3 3、干扰物质少、干扰物质少缺陷缺陷1 1、操作繁琐、操作繁琐2 2、培育时间长、培育时间长2 2、测定误差大、测定误差大2 2化学及物理化学方法化学及物理化学方法以理化方法测定主药含量以理化方法测定主药含量优点优点 1. 1. 准确度高准确度高2. 2. 简单、快速简单、快速1. 1. 不一定代表生物效价不一定代表生物效价缺陷缺陷2. 2. 易受杂质干扰易受杂质干扰三三 分类按构造与性质：分类按构造与性质： 内酰胺类、氨基糖苷类、内酰胺类、氨基糖苷类、 四环素类、大环内酯类、四环素类、大环内酯类、 氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类 林可霉素类、其他抗生素类林可霉素类、

4、其他抗生素类NSCH3CH3COOHOHN1234567RCO母核（6-氨基青霉烷酸）第二节第二节 内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素 青霉素类青霉素类头孢菌素类头孢菌素类7654321NONHSCH2R1COOH母核（7-氨基头孢菌烷酸）RCOCONSOHNCOOHCH3CH3CH2青霉素青霉素青霉素G G、苄青霉素、苄青霉素NH2CONSOHNCOOHCH3CH3CH2氨苄西林氨苄西林氨苄青霉素氨苄青霉素阿莫西林阿莫西林羟氨苄青霉素羟氨苄青霉素NH2CONSOHNCOOHCH3CH3HOCH2C2H5 2NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCCH2NH2普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉

5、素头孢氨苄NONHSCH3COOHOCNH2CH2头孢拉定CH2NH2CONONHSCH3COOH头孢羟氨苄NONHSCH3COOHOCNH2CH2HO头孢噻吩钠SCH2CONONHSCH2OCOCH3COONaNSOHNCOOKCH3CH3OCCH2一一 构造与性质构造与性质一羧基一羧基 酸性酸性NaNa与碱金属与碱金属(Na+(Na+、K+)K+)成盐易溶于水成盐易溶于水 与有机碱与有机碱( (普鲁卡因普鲁卡因) )成盐难溶于水成盐难溶于水 普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素C2H52NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCCH2NH2NSO1234567二手性二手性C C 旋光性

6、旋光性87654321NOS(5%(5%头孢唑啉钠溶液头孢唑啉钠溶液 18 182424) )20D 青霉素类青霉素类 C3 C5 C3 C5 C6C6头孢菌素类头孢菌素类 C6 C7 C6 C7 三共轭体系三共轭体系 UVUV青霉素类母核无明显青霉素类母核无明显UVUV，多数有苯环，多数有苯环取代基取代基头孢菌素类头孢菌素类 母核有共轭体系母核有共轭体系 NSONOS 青霉素钠青霉素钠UV7-20四四内酰胺内酰胺环环 枯燥纯真时枯燥纯真时 - - 稳定稳定水溶液：水溶液： 不稳定不稳定 不稳定不稳定性要素性要素四元环张力大四元环张力大酰胺键易水解酰胺键易水解某些金属离子某些金属离子温度温度失

7、失效效降降解解青青霉霉素素类类酸酸、碱碱、青青霉霉素素酶酶某些氧化剂某些氧化剂例例青霉素的降解反响青霉素的降解反响青青霉霉素素青霉噻唑酸青霉噻唑酸H2O/OH青霉素酶青霉素酶青霉酸青霉酸H2OpH2100青霉噻青霉噻唑酰基羟唑酰基羟胺酸胺酸NH2OH青霉烯酸青霉烯酸pH4青霉胺青霉胺CO2青霉醛青霉醛HgCl2失失效效降降解解头头孢孢菌菌素素类类酸酸、碱碱、胺胺类类内内酰酰胺胺酶酶 二二 鉴别鉴别一呈色反响一呈色反响1. 1. 羟肟酸铁反响羟肟酸铁反响 -内酰胺类内酰胺类NaOHNaOH HClNOHH内内酰酰胺胺类类呈色呈色羟肟酸衍生物羟肟酸衍生物Fe3+/3Fe3+/3H+H+NSONSC

8、OHNHOHH2NOH HClNSCHNHOFe3+3OH+Fe3+/3 红、棕、褐红、棕、褐NH2CONSOHNCOOHCH3CH3CH22.2.类似肽键的反响类似肽键的反响 茚三酮反响茚三酮反响 - -氨基氨基蓝蓝紫紫色色氨氨基基茚茚三三酮酮 -氨基、伯胺氨基、伯胺某些羟基胺类某些羟基胺类酮式酮式烯醇式烯醇式茚三酮茚三酮茚三酮茚三酮缩合缩合蓝紫色蓝紫色+H2OCNCH2RC OH2RCHH2NCOOH2OHCCOCOCOHNH2CCOCOCOCOHCNCCOCOCOCOHCHRNCCOCOCO CONH紫紫内内酰酰胺胺类类碱碱性性酒酒石石酸酸铜铜 开环分解开环分解双缩脲反响双缩脲反响 -内

9、酰胺类内酰胺类2OHCONH2CuCOHNCCH3COONaCH3SNHNCH3CH3COONaCSNOHOHOOCH2NH2CH2HH蓝紫色蓝紫色3 3其他显色反响其他显色反响 与变色酸与变色酸- -硫酸反响硫酸反响青霉素青霉素 阿莫西林阿莫西林 氨苄西林氨苄西林活泼活泼“-CH2-HCHOCHSOH ”羰羰基基侧侧链链含含“分解分解变色酸变色酸显色显色NH2CONSOHNCOOHCH3CH3HOCH2 变变色色酸酸阿阿莫莫西西林林HCHOSOH150缩合缩合色色褐褐SO3HSO3HHOHOSO3HSO3HHOHOOHOHHO3SHO3SCHHCHO 缩合缩合与重氮苯磺酸反响与重氮苯磺酸反响

10、 头孢哌酮头孢哌酮橙橙黄黄色色重重氮氮苯苯磺磺酸酸 OHHC巧合巧合酚羟基酚羟基SNOHCONHCHCONHH5C2OONNOCOOHCH2SNNNNCH3NClNNaO3S OH巧合巧合NNNNCH3SNOHCONHCHCONHH5C2OONNOCOOHCH2SNNNaO3S与与H2SO4 - HNO3反响反响亮亮黄黄红红棕棕黄黄色色头头孢孢噻噻肟肟钠钠头头孢孢噻噻吩吩钠钠头头孢孢氨氨苄苄 HNOSOH头孢菌素类头孢菌素类二二 K+、Na+反响反响 焰色焰色鲜黄色鲜黄色 + 醋酸氧铀锌醋酸氧铀锌黄黄 Na+ 焰色焰色紫色紫色 + 0.1%四苯硼钠四苯硼钠 + Ac白白 K+与铜盐反响与铜盐反

11、响 CuSOHAc头头孢孢氨氨苄苄橄榄绿色橄榄绿色NaOH专属反响专属反响沉淀反响沉淀反响1. 1. 遇酸遇酸白白青青霉霉素素青青霉霉素素钠钠青青霉霉素素钾钾 H有机胺盐反响有机胺盐反响1 1重氮化重氮化 - - 巧合反响巧合反响 青霉素青霉素普鲁卡因普鲁卡因普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素 H重氮化重氮化- -巧合反响巧合反响红红 芳伯氨基芳伯氨基C2H5 2NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCH+C2H52CH2NH2H2NCOOCH2CH2N普鲁卡因普鲁卡因普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素NCH2CH2OOC2C2H5N+Cl-N2C2H5COOCH2CH2NNH2HClNaN

12、O2 2 2与三硝基苯酚反响与三硝基苯酚反响 三三硝硝基基苯苯酚酚二二苄苄基基乙乙二二胺胺苄苄星星青青霉霉素素NaOH二苄基乙二胺二苄基乙二胺三硝基苯酚三硝基苯酚H2OHOH-HCONSOHNCOOHCH3CH3CH2CH2NCH2CH2NHCH2OHNO2O2NNO2CH2NCH2CH2NHCH2光谱法光谱法三三1、 IR法法阿莫西林的红外光谱图阿莫西林的红外光谱图117401815 cmVOC116901710 cmVOC-内酰胺环内酰胺环酰胺酰胺青霉素青霉素2、 UV法法 样品、分解产物样品、分解产物A,Emin,max,%1cm1 光光谱谱图图nm339HA 苯苯唑唑青青霉霉烯烯酸酸苯

13、苯唑唑青青霉霉素素Cu2+头孢氨苄头孢氨苄 max = 262nm max = 262nm青霉素青霉素V钠钠 A280nm/A264nm = 1.301.50 取本品，加醋酸取本品，加醋酸- -醋酸钠缓冲醋酸钠缓冲溶液溶液pH3.8pH3.8，制成，制成50ug/ml50ug/ml的溶液，的溶液，取取10ml10ml，水浴加热，以未加热的共，水浴加热，以未加热的共试品为空白。测定，吸收度试品为空白。测定，吸收度0.60.6。NOCONHCH3NOSCH3CH3COONaNOCHCH3OCOCNHNCHHCCH3CH3SHCHCOOHCu2+pH3.8氯唑青霉素氯唑青霉素 341 0.682双氯

14、青霉素双氯青霉素 342 0.653苯唑青霉素苯唑青霉素 339 1.328max %1cm1E(nm) ml/g50 四色谱法四色谱法 对照品对照法对照品对照法1、 TLC法法和和斑斑点点颜颜色色比比较较供供试试品品对对照照品品相相同同条条件件fR2、 HPLC法法Rt比比较较供供试试品品对对照照品品相相同同条条件件特殊杂质的检查特殊杂质的检查一一 聚合物聚合物 中国药典规定，头包曲松，中国药典规定，头包曲松，哌酮，噻肟需检查聚合物。用哌酮，噻肟需检查聚合物。用HPLCHPLC，以他啶为例。，以他啶为例。 对照溶液的制备对照溶液的制备 取对照取对照品适量，精细称定，加水制成品适量，精细称定，

15、加水制成100ug/ml100ug/ml溶液，摇匀。溶液，摇匀。 测定法测定法 取对照品适量，取对照品适量，精细称定，加水制成，精细称定，加水制成，20ug/ml20ug/ml进样。含聚合物不得超越头孢进样。含聚合物不得超越头孢他定的他定的0.3%0.3%。 二有关物质和异构体二有关物质和异构体P273P273 头孢氨苄中有关物质的检查头孢氨苄中有关物质的检查反相反相TLCTLC法头孢氨苄以青霉素钾法头孢氨苄以青霉素钾为原料，经氧化、扩环、裂解得为原料，经氧化、扩环、裂解得7-7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸氨基去乙酰氧基头孢烷酸7-ADCA7-ADCA，再与侧链，再与侧链a-a-苯甘氨酸缩合而成苯

16、甘氨酸缩合而成。这两种原料有能够成为主要杂质。这两种原料有能够成为主要杂质。用茚三酮显色，。用茚三酮显色， a-a-苯甘氨酸和苯甘氨酸和7-ADCA7-ADCA斑点显橙黄色。斑点显橙黄色。 三杂质吸收度的检查三杂质吸收度的检查 青霉素钠钾：青霉素钠钾：取本品，加水，取本品，加水，1.80mg/ml1.80mg/ml。280nm280nm不得大于不得大于0.100.10，264nm264nm应为应为0.80-0.80-0.880.88。264nm264nm的吸收值用来控制青的吸收值用来控制青霉素钠钾的含量。霉素钠钾的含量。280nm280nm的吸的吸收用来控制杂质。收用来控制杂质。四、 含量测定

17、含量测定碘量法碘量法一一-内酰胺类内酰胺类ChPChP利用其分子本身不耗费碘，而降利用其分子本身不耗费碘，而降解产物耗费碘，用剩余碘量法测解产物耗费碘，用剩余碘量法测定，以规范对比法计算。定，以规范对比法计算。 IINaOH头头孢孢菌菌素素族族青青霉霉素素族族水解水解 H1.1.原理原理水解产物水解产物 OSNaNaIOSNaI定量过量定量过量剩余剩余反响分两步进展：反响分两步进展：1. 1. 水解反响水解反响 ( (按化学计算量进展按化学计算量进展) )2. 2. 氧化氧化- -复原反响复原反响 ( (无固定的量关无固定的量关系，受温度、系，受温度、PHPH值和时间等要素影值和时间等要素影响

18、，应严厉控制反响条件并采用规响，应严厉控制反响条件并采用规范品平行对照测定范品平行对照测定) )NSCH3CH3COOHOHNRCORCOHHNCOONaCH3CH3SNCOONaI24+ 5H2O+ 2HClNaOHCCH3CH3SO3HCHNH2COOHCHNHCORCOOH2+2NaCl+8HI第一步第一步第二步第二步例例注射用普鲁卡因青霉素注射用普鲁卡因青霉素 含量测定含量测定 取装量差别项药典附录取装量差别项药典附录P7P7下的内容物，精细称取约下的内容物，精细称取约0.12g0.12g，置置100ml100ml量瓶中，加水使溶解并稀量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，精细量取释至

19、刻度，摇匀，精细量取5ml5ml，置碘瓶中，加置碘瓶中，加1mol/L1mol/L氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液1ml1ml放置放置2020分钟，分钟， 再加再加1mol/L1mol/L盐酸溶液盐酸溶液1ml1ml与醋与醋酸酸- -醋酸钠缓冲液醋酸钠缓冲液(pH4.5)5ml(pH4.5)5ml，精细，精细参与碘滴定液参与碘滴定液(0.01mol/L)15ml(0.01mol/L)15ml，密，密塞，摇匀，在塞，摇匀，在20202525暗处放置暗处放置2020分分钟，用硫代硫酸钠滴定液钟，用硫代硫酸钠滴定液0.01mol/L0.01mol/L滴定，滴定，至近终点时加淀粉指示液，继续滴至近终点时加淀粉

20、指示液，继续滴定并强力振摇，至蓝色消逝；另精定并强力振摇，至蓝色消逝；另精细量取供试品溶液细量取供试品溶液5ml5ml，置碘瓶中，置碘瓶中，加醋酸，加醋酸- -醋酸钠缓冲液醋酸钠缓冲液pH4.5pH4.55ml5ml，精细参与碘滴定液，精细参与碘滴定液0.01mol/L0.01mol/L15ml15ml，密塞，摇匀，密塞，摇匀，在暗处放置在暗处放置2020分钟，用硫代硫酸分钟，用硫代硫酸钠滴定液钠滴定液0.01mol/L0.01mol/L滴定，滴定，作为空白。同时用青霉素钠对照作为空白。同时用青霉素钠对照品同法测定作对照，算出供试品品同法测定作对照，算出供试品的含量。的含量。V V样样空空V

21、V样样对照液对照液+ +缓冲液缓冲液+ +碘液碘液+ +回滴回滴+ +碱碱+ +酸酸+ +缓冲液缓冲液+ +碘液碘液+ +回滴回滴 V V对空对空V V对对供试液供试液+ +缓冲液缓冲液+ +碘液碘液+ +回滴回滴+ +碱碱+ +酸酸+ +缓冲液缓冲液+ +碘液碘液+ +回滴回滴2.2.方法方法 空白实验空白实验A A、消除样品已降解产物的干扰、消除样品已降解产物的干扰B B、消除样品中其他耗费碘的杂、消除样品中其他耗费碘的杂 质的干扰质的干扰C C、消除碘挥发呵斥的误差、消除碘挥发呵斥的误差 以未经水解的样品作空白测定以未经水解的样品作空白测定空白空白样品样品I2Na2S2O3I-I2 采用

22、规范品平行对照测定采用规范品平行对照测定A A、可消除温度、可消除温度、pHpH、操作、环、操作、环 境等条件的影响境等条件的影响B B、使本法测定结果与微生物检定、使本法测定结果与微生物检定 法一致法一致3.3.条件条件1 1弱酸性弱酸性 pH4.5 pH4.5碱碱 I2 IO3- + I- I2 IO3- + I-酸酸普鲁卡因与碘在酸性条件普鲁卡因与碘在酸性条件下会产生复盐沉淀下会产生复盐沉淀2 2温度温度 24 242626温度温度38 38 未水解的供试品亦耗费碘未水解的供试品亦耗费碘3 3水解时间水解时间以水解以水解2020分钟后的耗碘量最大分钟后的耗碘量最大4 4反响时间反响时间反

23、响反响2020分钟后，耗碘量随时间分钟后，耗碘量随时间的的变化较小，可减小含量测定的变化较小，可减小含量测定的误误差。差。1 1灵敏度高灵敏度高样品样品 : : 碘碘 = 1 : 8 = 1 : 82 2反响条件、实验操作要求高反响条件、实验操作要求高V V对、对、V V对空对空V V样、样、V V样空样空1 1份含量份含量4I28I-4I28I-4.4.特点特点加试剂次序、反响时间、滴定速度一样加试剂次序、反响时间、滴定速度一样%WWVVVV对对照照品品）（）（含含量量样样对对对对对对空空样样样样空空 5.5.计算计算 原料原料降解产物或杂质可耗费碘而影响降解产物或杂质可耗费碘而影响测定，因

24、此用未经水解的样品做测定，因此用未经水解的样品做空白。碘量法是青霉素族的经典空白。碘量法是青霉素族的经典的测定方法。的测定方法。 1.1. 原理原理SHROH 青霉素族青霉素族水解水解HgRS ）（ChP ChP 青霉素族青霉素族 Hg .pH二电位配位滴定法汞量法二电位配位滴定法汞量法2.2.方法方法 总总样样VNOHgHNONaOH 醋酸盐缓冲液醋酸盐缓冲液pH4.6滴定滴定水解水解 降降空空醋醋酸酸盐盐缓缓冲冲液液VNOHg pH4.6滴定滴定样样品品 以未经水解的样品作空白测定以未经水解的样品作空白测定例例 苯唑西林钠苯唑西林钠 含量测定含量测定 取本品约取本品约50mg50mg，精细

25、，精细称定，加水称定，加水5ml5ml溶解后，加溶解后，加1mol/L1mol/L氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液5ml5ml，摇匀，放置，摇匀，放置1515分钟，加分钟，加1mol/L1mol/L硝酸溶液硝酸溶液5ml5ml，醋，醋酸盐缓冲液酸盐缓冲液(pH4.6)20ml(pH4.6)20ml及水及水20ml20ml，摇匀，摇匀，照电位滴定法照电位滴定法( (附录附录 A), A),用铂电极为指示电极，汞用铂电极为指示电极，汞- -硫酸亚硫酸亚汞电极为参比电极，在汞电极为参比电极，在35354040，用硝酸汞滴定液，用硝酸汞滴定液(0.02mol/L)(0.02mol/L)缓缓慢滴定，慢滴定，控制

26、滴定过程约为控制滴定过程约为1515分钟，分钟，不计第一个等当点，计算第二个不计第一个等当点，计算第二个等当点时耗费滴定液的量。每等当点时耗费滴定液的量。每1ml1ml硝酸汞滴定液硝酸汞滴定液(0.02mol/L)(0.02mol/L)相当于相当于8.029mg8.029mg的总苯唑西林的总苯唑西林( (按按C19H19N3O5SC19H19N3O5S计算计算) )。另取本品约另取本品约0.5g0.5g，精细称定，加，精细称定，加水与上述醋酸盐缓冲液各水与上述醋酸盐缓冲液各25ml25ml，振摇使完全溶解，在室温下，立振摇使完全溶解，在室温下，立刻用硝酸汞滴定液刻用硝酸汞滴定液(0.02mol

27、/L)(0.02mol/L)滴定，终点判别方法同上。滴定，终点判别方法同上。每每1ml1ml硝酸汞滴定液硝酸汞滴定液0.02mol/L0.02mol/L相当于相当于8.029mg8.029mg的的降解物按降解物按C19H19N3O5SC19H19N3O5S计算计算。总苯唑西林的百分含量与降。总苯唑西林的百分含量与降解物的百分含量之差值即为苯解物的百分含量之差值即为苯唑西林的含量。唑西林的含量。3 3、讨论、讨论1 1水解必需完全水解必需完全2 2空白实验空白实验 消除已降解产消除已降解产物干扰物干扰4 4优点优点 不需规范品不需规范品2 2反响摩尔比反响摩尔比 1 : 11 : 1%WFTV%

28、WFTV% 空空空空样样样样含含量量%FTWVWV% ）（含量含量空空空空样样样样4 4、计算、计算1 1原理原理青青霉霉烯烯酸酸硫硫醇醇汞汞盐盐青青霉霉素素族族 HgCl咪唑咪唑nmmax ChP ChP 青霉素族青霉素族三可见三可见-紫外分光光度法紫外分光光度法1、硫醇汞盐法、硫醇汞盐法HgClCH3CH3COONaSNHCONCH2NHCOCH3NSOHNCOONaCH3CH3OCCH2NHCOCH3 HgCl咪唑咪唑nmmax 2 2方法方法对照品法对照品法%WWAA%对对照照品品样样标标标标样样 计算计算标标样样咪咪唑唑硼硼酸酸缓缓冲冲液液标标准准液液供供试试液液AAHgCl 2pH

29、 9pH 9例例 氨苄西林钠氨苄西林钠 含量测定含量测定( (参考教材参考教材277)277) 取本品约取本品约60mg 60mg 置置100ml100ml量瓶中，量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精细加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精细量取量取5ml5ml，置另一，置另一100ml100ml量瓶中，加水量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，再精细量取稀释至刻度，摇匀，再精细量取5ml5ml，置置25ml25ml量瓶中，加硼酸缓冲液量瓶中，加硼酸缓冲液2.5ml2.5ml与与醋酐的乙腈溶液醋酐的乙腈溶液1501500.25ml0.25ml，放，放置置5min5min后，加咪唑溶液至刻度，摇匀，后，加咪唑

30、溶液至刻度，摇匀，置置6060水浴水浴中，加热中，加热30min30min，取出冷却，照分，取出冷却，照分光光度法附录光光度法附录 A A ，在，在325nm325nm的波优点测定吸收度；另取的波优点测定吸收度；另取氨苄西林三水合物规范品，按同氨苄西林三水合物规范品，按同法测定，计算，即得。法测定，计算，即得。 3 3讨论讨论 咪唑催化的水解产率高，咪唑催化的水解产率高， 硫醇汞盐稳定硫醇汞盐稳定3h3hb. b. 侧链有侧链有-NH2-NH2时，需加醋酐先时，需加醋酐先 将其乙酰化后才干发生上述反响将其乙酰化后才干发生上述反响NSOHNCOOCH3CH3OCCH2NH2NaNSOHNCOON

31、aCH3CH3OCCH2NHCOCH3 OCHCH pH94 4特点特点A A、简便快速、简便快速B B、用规范品对照，重现性良、用规范品对照，重现性良 好，好，RSD1%RSD1%nmCupHA 青青霉霉烯烯酸酸青青霉霉素素族族水解水解稳定剂稳定剂青霉素族青霉素族2 2、酸水解法铜盐法、酸水解法铜盐法1 1原理原理CH2COCONHHCCH3CH3CCOOHCCNHSHCONSOHNCOOHCH3CH3CH2 pHACu 2 2方法方法标标样样枸枸橼橼酸酸硫硫酸酸铜铜标标准准液液供供试试液液AAnmA 3203 3特点特点实验条件随各药物稳定性不同而定实验条件随各药物稳定性不同而定规范品对照

32、法规范品对照法%WWAA标标准准品品含含量量样样标标标标样样 4 4计算计算Fe3+/3H+红色红色-内酰胺类内酰胺类NaOH HClNOHH内内酰酰胺胺类类羟羟肟肟酸酸衍衍生生物物3 3、羟肟酸比色法、羟肟酸比色法特点特点 快速、高效、灵敏快速、高效、灵敏 专属性强、重现性好专属性强、重现性好一法多用鉴别、检查、含测一法多用鉴别、检查、含测五、生物样品中五、生物样品中B-B-内酰胺类抗生素分析内酰胺类抗生素分析人血浆中阿莫西林浓度测定人血浆中阿莫西林浓度测定C18C18，第三节第三节 氨基糖苷类抗生素氨基糖苷类抗生素苷苷苷苷元元糖糖缩缩合合 氨氨基基糖糖苷苷苷苷元元氨氨基基糖糖缩缩合合 链霉

33、素链霉素 双氢链霉素双氢链霉素新霉素新霉素 卡那霉素卡那霉素庆大霉素庆大霉素 巴龙霉素巴龙霉素链霉胍 + 链霉糖 + N-甲基-L-葡萄糖胺 苷元苷元糖糖链霉双糖胺链霉双糖胺链霉素链霉素NH CNHNH2HOOHOHNHCH2NNHOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNHCH3链霉胍链霉胍链霉糖链霉糖N-N-甲基甲基-L-L-葡萄糖胺葡萄糖胺NH CNHNH2HOOHOHNHCH2NNHOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNHCH3链霉胍链霉胍链霉糖链霉糖N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺 糖糖 苷元苷元绛红糖胺绛红糖胺 + 脱氧链霉胺脱氧链霉胺 + 加洛糖胺加洛糖胺 糖糖 庆大霉

34、素庆大霉素ROC R1R2HNNH2OOHH2NNH2OOOHNHCH3OHCH3绛红糖胺绛红糖胺紫素胺紫素胺2-2-脱氧链霉胺脱氧链霉胺加洛糖胺加洛糖胺N-N-甲基甲基-3-3-去氧去氧-4-4-甲甲基戊糖胺基戊糖胺庆大霉素庆大霉素C C复合物复合物 庆大霉素庆大霉素C1 R=H R1C1 R=H R1、R2=CH3R2=CH3 庆大霉素庆大霉素C2 R=R2=H C2 R=R2=H R1=CH3R1=CH3 庆大霉素庆大霉素C1a RC1a R、R1R1、R2=HR2=H 庆大霉素庆大霉素C2a R=CH3 R1= C2a R=CH3 R1= R2=H R2=H 庆大霉素庆大霉素C2b R

35、=R1=H R2=CH3C2b R=R1=H R2=CH3一、 构造与性质构造与性质链霉素链霉素 3 3个个庆大霉素庆大霉素 5 5个个碱性中心碱性中心一碱性与溶解性一碱性与溶解性多与硫酸成盐多与硫酸成盐溶解性：水溶性溶解性：水溶性链霉素链霉素 pH5 pH57.57.5庆大霉素庆大霉素 pH2 pH212 12 稳定稳定UV四四三稳定性与链霉素水解产物反响三稳定性与链霉素水解产物反响旋光性旋光性二二NH CNHNH2HOOHOHNHCH2NNHOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNHCH3坂口反响坂口反响N-N-甲基葡萄甲基葡萄糖胺反响糖胺反响麦芽酚反响麦芽酚反响蓝蓝紫紫色色庆庆大大霉

36、霉素素链链霉霉素素茚茚三三酮酮二、鉴别二、鉴别一茚三酮反响一茚三酮反响 羟基胺构造羟基胺构造取庆大霉素取庆大霉素5mg5mg水水1ml1ml，0.1%0.1%茚三酮的水茚三酮的水饱和正丁醇溶液饱和正丁醇溶液1ml,1ml,吡啶吡啶0.5ml,0.5ml,水浴加水浴加热热5min,5min,显紫色。显紫色。二二MolischMolisch实验实验具有五碳糖或六碳糖构造的氨具有五碳糖或六碳糖构造的氨基糖苷类抗生素经酸水解后，基糖苷类抗生素经酸水解后，在盐酸或硫酸作用下脱水，成在盐酸或硫酸作用下脱水，成糠醛五碳或羟甲基糠醛糠醛五碳或羟甲基糠醛六碳糖。这些产物遇六碳糖。这些产物遇a-a-萘酚萘酚或蒽酮

37、成色。或蒽酮成色。甲甲基基葡葡萄萄糖糖胺胺庆庆大大霉霉素素链链霉霉素素水水解解 N乙酰丙酮乙酰丙酮OH-OH-吡咯衍生物吡咯衍生物对二甲氨基苯甲醛对二甲氨基苯甲醛H+H+红色红色Elson-MorganElson-Morgan反响反响三三 N-N-甲基葡萄糖胺反响甲基葡萄糖胺反响NHCH3NHNHNH C NH2HOOHOHNHCH2NOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNCH3COCH3HHOCH2CHOH3(缩合缩合)323COCHCOCHCH OHHHH3CH3CCHNNCOCH3CH3COCH3CH3N红色红色对二甲氨基苯甲醛对二甲氨基苯甲醛H+NCH3COCH3HHOCH2CH

38、OH3 链霉糖特有反链霉糖特有反响响链链霉霉糖糖链链霉霉素素 OH麦麦芽芽酚酚紫紫红红色色 3FeH+分子重排分子重排四麦芽酚四麦芽酚MaltolMaltol反响反响NH C NH2HOOHOHNHCH2NOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNHNHNHCH3H2O NaOHOOOHCH3OOCH3Fe3+H+OFe33+/紫红紫红麦芽酚麦芽酚链霉胍特有反响链霉胍特有反响橙橙红红羟羟基基喹喹啉啉链链霉霉胍胍链链霉霉素素次次溴溴酸酸钠钠 8OH或或-萘酚萘酚NOH8-8-羟基喹啉羟基喹啉坂口反响坂口反响五五 - -萘酚萘酚OHONBrRNHCO NH六六 24SO反响反响白白 BaSOSO

39、BaH+八光谱法八光谱法 IRIR法法庆大霉素无庆大霉素无UVUV吸收吸收nmmax 链链霉霉素素七七 TLCTLC法法UVUV法法 方法方法 TLCTLC中的对照品法中的对照品法 BPBP1. 1. 来源来源 反响中间体反响中间体三、特殊杂质检查及组分分析一链霉素中链霉素一链霉素中链霉素B甘露甘露糖链霉素杂质糖链霉素杂质二硫酸奈替米星中有关物二硫酸奈替米星中有关物质的检查略质的检查略对微生物的活性无明显差别对微生物的活性无明显差别毒副作用和耐药性不同毒副作用和耐药性不同发酵菌种不同发酵菌种不同工艺差别工艺差别C C组分比例组分比例不一致不一致规定控制各组分的相对百分含量规定控制各组分的相对百

40、分含量ChPUSPBPJP三庆大霉素三庆大霉素C C组分的测定组分的测定 .pH吲吲哚哚衍衍生生物物巯巯基基醋醋酸酸邻邻苯苯二二醛醛氨氨基基max = 330nmmax = 330nm衍生化原理衍生化原理 1.1.1-1-烷基硫代烷基硫代-2-2-烷基烷基异吲哚衍生物异吲哚衍生物RNH2+HSCH2COOHOH-CHOCHONRSCH2COOH 规定规定 C1 2550% C1 2550% C1a 1540% C1a 1540% C2a +C2 2050% C2a +C2 2050%AAAAA%ACCCCiiaa 3. 3. 计算计算 峰面积归一化法峰面积归一化法2.2.方法方法 RPRPHP

41、LCHPLC四硫酸盐测定四硫酸盐测定 EDTAEDTA络合滴定法络合滴定法四、含量测定链霉素、庆大霉素微生物检定法本法系利用抗生素在琼脂培育基内的分散作用量反响平行线原理的设计，比较规范品与供试品两者对接种的实验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。血清中庆大霉素的血清中庆大霉素的HPLCHPLC法法 血浆样品的预处置血浆样品的预处置 离子对色谱法的目的：离子对色谱法的目的： 除去氨基酸、肽、胺的干扰除去氨基酸、肽、胺的干扰 选用选用OPAOPA为荧光衍生化试剂为荧光衍生化试剂 采用柱后衍生化法采用柱后衍生化法 2CH3NRR3HOHCONH2OOHOHOOHR2R1第四节第四节 四

42、环素类抗生素四环素类抗生素ABCD2CH3NRR3HOHCONH2OOHOHOOHR2R11234567891011122CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HO四环素四环素TCTCtetracyclinetetracycline2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HOCl金霉素金霉素 (CTC) chlortetracycline(CTC) chlortetracycline氯四环氯四环素素2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HOOH土霉素土霉素 (OTC) oxytetracycline氧四环素氧四环素2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3OH多

43、西环素多西环素 (DOTC) doxycycline(DOTC) doxycycline脱氧土霉素脱氧土霉素美他环素美他环素METCMETC metacyclinemetacyclineHOHCONH2OOHOHOOHN CH3 2OHCH22CH3NRR3HOHCONH2OOHOHOOHR2R1一、 构造与性质构造与性质1.1.与酸、碱均能成盐与酸、碱均能成盐2.2. 强酸或强碱中溶解度强酸或强碱中溶解度 酚羟基、烯醇型羟基酚羟基、烯醇型羟基 弱酸性弱酸性二甲胺基二甲胺基 弱碱性弱碱性一酸碱性与溶解度一酸碱性与溶解度 两性两性具有吸湿性，多含结晶水具有吸湿性，多含结晶水与金属离子生成有色配位

44、化合物与金属离子生成有色配位化合物Ca2+ Mg2+ Fe3+ Al3+ Ca2+ Mg2+ Fe3+ Al3+ UVUV三三pH3 7.5 pH3 7.5 荧光荧光 二旋光性二旋光性四与金属离子络合四与金属离子络合HOHOCaOOOOHOHOO1.1.差向异构化差向异构化差差向向金金霉霉素素差差向向四四环环素素金金霉霉素素四四环环素素 pH淡黄淡黄黑黑蓝色荧光蓝色荧光五不稳定性五不稳定性OHCONH2OOHOHOOHCH3HCH3 2NHO差向四环素差向四环素2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HO2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHR2R1HO土霉素、多西环素不易差向异构

45、化土霉素、多西环素不易差向异构化1 1酸性下降解酸性下降解脱脱水水金金霉霉素素脱脱水水四四环环素素金金霉霉素素四四环环素素 pHmax = 445nmmax = 435nm橙黄色橙黄色2. 2. 降解反响降解反响2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HON CH3 2HOHCONH2OOHOOHCH3OH脱水四环素脱水四环素2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HOpH26pH26TCOHCONH2OOHOHOOHCH3HCH3 2NHOETCN CH3 2HOHCONH2OOHOOHCH3OHATCN2CH3OHCONH2OOHOHOHOCH3HEATCpH2pH22 2

46、碱性下降解碱性下降解异异四四环环素素四四环环素素 OH荧光荧光HOHCONH2OOHOHOOHCH3ON CH3 2二、 鉴别实验鉴别实验H2SO4H2SO4反响反响一一黄色黄色朱红色朱红色绿绿蓝蓝深紫色深紫色盐酸多西环素盐酸多西环素盐酸土霉素盐酸土霉素盐酸金霉素盐酸金霉素盐酸四环素盐酸四环素 SOHFeCl3FeCl3反响反响二二褐色褐色橙褐色橙褐色深褐色深褐色红棕色红棕色盐酸多西环素盐酸多西环素盐酸土霉素盐酸土霉素盐酸金霉素盐酸金霉素盐酸四环素盐酸四环素 FeClEDTA EDTA 抑制痕量金属呵斥的抑制痕量金属呵斥的 拖尾景象拖尾景象三三 TLC法正相分配薄层法正相分配薄层 色谱色谱四H

47、PLC 4- 4-差向四环素差向四环素ETCETC 脱水四环素脱水四环素ATCATC 差向脱水四环素差向脱水四环素EATCEATC 盐酸金霉素盐酸金霉素CTCCTC 有关物质有关物质一一HPLCHPLC法法20002000版版规范品对照法规范品对照法三、特殊杂质的检查 盐酸四环素吸收度吸收度二二nmmax 、盐酸四环素盐酸四环素CTC).(Anm 控控制制杂质吸收度杂质吸收度EATCATC.Anm、控制控制 异异四四环环素素控控制制 .Anm 注注射射用用四、 含量测定含量测定 ChP、USPHPLCHPLC法外标法法外标法系统适用性实验系统适用性实验 1. 1. 防护柱防护柱2. 2. 预试

48、溶液预试溶液4-4-差向脱水四环素差向脱水四环素四环素四环素3. RSD2.0%3. RSD2.0%90.tR 01.tR .RJP JP 比色法规范曲线法比色法规范曲线法标标nmHCl.dHCl.dA 标标准准液液标标调调零零标标准准液液空空样样nmHCl.dHCl.dA 供供试试液液样样调调零零供供试试液液空空原理原理脱脱水水四四环环素素四四环环素素 pH1. 1. 熟习抗生素类药物分析的特点及其熟习抗生素类药物分析的特点及其常规检验工程。了解抗生素类药物的分常规检验工程。了解抗生素类药物的分析现状，熟习生物学法与物理化学法测析现状，熟习生物学法与物理化学法测定效价的原理及优缺陷。定效价的

49、原理及优缺陷。2. 2. 掌握掌握内酰胺类抗生素的构造、内酰胺类抗生素的构造、 性质、鉴别及含量测定。性质、鉴别及含量测定。第十一章第十一章 复习内容复习内容3. 3. 掌握氨基糖苷类抗生素的构造、掌握氨基糖苷类抗生素的构造、性性 质及鉴别，了解其检查及含量质及鉴别，了解其检查及含量测定测定4. 4. 掌握四环素类抗生素的构造及掌握四环素类抗生素的构造及性质，了解其鉴别、检查及含量性质，了解其鉴别、检查及含量测定测定5. 5. 了解抗生素类药物的质量调查了解抗生素类药物的质量调查方法方法以下哪个药物会发生羟肟酸以下哪个药物会发生羟肟酸 铁反响铁反响 A. A. 青霉素青霉素 B. B. 庆大霉

50、素庆大霉素 C. C. 红霉素红霉素 D. D. 链霉素链霉素 E. E. 维生素维生素C C 中国药典中国药典(2019(2019年版年版) )测定头测定头 孢菌素类药物的含量时，多数采用的孢菌素类药物的含量时，多数采用的方法是方法是 A. A. 微生物法微生物法 B. B. 碘量法碘量法 C. C. 汞量法汞量法 D. D. 正相高效液相色谱法正相高效液相色谱法 E. E. 反相高效液相色谱法反相高效液相色谱法属于属于- -内酰胺类的抗生素药物内酰胺类的抗生素药物有有 A. A. 青霉素青霉素 B. B. 红霉素红霉素 C. C. 头孢菌素头孢菌素D. D. 庆大霉素庆大霉素 E. E.

51、四环素四环素能和茚三酮发生呈色反响的物质有能和茚三酮发生呈色反响的物质有 A A链霉素链霉素 B B庆大霉素庆大霉素 C C土霉素土霉素 D D氨基酸氨基酸 E E苯巴比妥苯巴比妥青霉素类药物可用下面哪些方法测定青霉素类药物可用下面哪些方法测定 A. A. 三氯化铁比色法三氯化铁比色法 B. B. 汞量法汞量法 C. C. 碘量法碘量法 D. D. 硫醇汞盐法硫醇汞盐法 E. E. 酸性染料比色法酸性染料比色法能发生重氮化一巧合反响的抗生素能发生重氮化一巧合反响的抗生素类药物是类药物是 A. A. 青霉素青霉素 B. B. 庆大霉素庆大霉素 苄星青霉素苄星青霉素 盐酸四环素盐酸四环素E. E.

52、 普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素以下反响可适用的药物以下反响可适用的药物 A. A. 青霉素青霉素 B. B. 链霉素链霉素 C. C. 两者均能两者均能 D. D. 两者均不能两者均不能KoberKober反响反响羟肟酸铁反响羟肟酸铁反响坂口反响坂口反响NN甲基葡萄糖胺反响甲基葡萄糖胺反响在酸性溶液中水解在酸性溶液中水解D DA AB BB BC C可以鉴别的药物是可以鉴别的药物是 A. A. 链霉素链霉素 B. B. 庆大霉素庆大霉素 C. C. 两者均可两者均可 D. D. 两者均不可两者均不可用用KoberKober反响反响用坂口反响用坂口反响 用麦芽酚反响用麦芽酚反响用三氯化铁反响用三

53、氯化铁反响用茚三酮反响用茚三酮反响DAADC问题问题 A. A. 茚三酮反响茚三酮反响 B. B. 麦芽酚反响麦芽酚反响 C. C. 坂口反响坂口反响 D. FeC13D. FeC13反响反响 E. E. 羟肟酸铁反响羟肟酸铁反响头孢唑林钠头孢唑林钠金霉素金霉素 链霉素链霉素庆大霉素庆大霉素 青霉素青霉素EDEAABC四环素在酸性条件下的降解产物四环素在酸性条件下的降解产物是是 A. A. 差向四环素差向四环素 B. B. 脱水四环素脱水四环素 C. C. 异四环素异四环素 D. D. 去甲四环素去甲四环素 E. E. 去甲氧四环素去甲氧四环素课 件 素 材NSOHNCOOKCH3CH3OCC

54、H2酸性酸性构造与性质构造与性质一、NaNa与碱金属与碱金属(Na+(Na+、K+)K+)成盐成盐 一羧基一羧基 易溶于水易溶于水 与有机碱与有机碱(普鲁卡因普鲁卡因)成盐成盐 难溶于水难溶于水普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素C2H52NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCCH2NH2NSO1234567二手性C 87654321NOS(5%头孢唑啉钠溶液头孢唑啉钠溶液 1824)20D 头孢菌素类头孢菌素类 C6 C7青霉素类青霉素类 C3 C5 C6 旋光性旋光性 三共轭体系 NSO头孢菌素类头孢菌素类 母核有共轭体系母核有共轭体系 青霉素类青霉素类 母核无明显母核无明显UV

55、多数有苯环取代基多数有苯环取代基 NOS UV青霉素钠青霉素钠UV7-20四内酰胺环 水溶液水溶液 不稳定不稳定 枯燥纯真枯燥纯真 稳定稳定 不稳定不稳定性要素性要素四元环张力大四元环张力大 酰胺键易水解酰胺键易水解 某些金属离子某些金属离子温度温度失失效效降降解解青青霉霉素素类类酸酸、碱碱、青青霉霉素素酶酶某些氧化剂某些氧化剂例例青霉素的降解反响青霉素的降解反响青青霉霉素素青霉噻唑酸青霉噻唑酸H2O/OH青霉素酶青霉素酶青霉酸青霉酸H2OpH2100青霉噻唑青霉噻唑酰基羟胺酸酰基羟胺酸NH2OH青霉烯酸青霉烯酸pH4青霉胺青霉胺CO2青霉醛青霉醛HgCl2失效失效降解降解头孢菌素类头孢菌素类

56、酸、碱、胺类酸、碱、胺类内酰胺酶内酰胺酶 (头孢噻吩钠水溶液头孢噻吩钠水溶液2524h失活失活8%)二、二、K+、Na+反响反响一一鉴别鉴别 焰色焰色鲜黄色鲜黄色 + 醋酸氧铀锌醋酸氧铀锌黄黄 Na+ 焰色焰色紫色紫色 + 0.1%四苯硼钠四苯硼钠 + Ac白白 K+二呈色反响二呈色反响1. 羟肟酸铁反响羟肟酸铁反响 -内酰胺类内酰胺类NaOH HClNOHH内内酰酰胺胺类类呈色呈色羟肟酸衍生物羟肟酸衍生物Fe3+/3H+NSONSCOHNHOHH2NOH HClNSCHNHOFe3+3OH+Fe3+/3 红、棕、褐红、棕、褐例：ChP(2000)头孢哌酮鉴别 取本品10mg，加水2ml与盐酸

57、羟胺溶液取34.8%盐酸羟胺溶液1份，醋酸钠-氢氧化钠溶液1份，乙醇4份3ml，振摇溶解后，放置5min，加酸性硫酸铁铵试液1ml，摇匀，显红棕色。2、 与与H2SO4 - HNO3反响反响蓝绿色蓝绿色红棕红棕黄色黄色头孢噻啶头孢噻啶头孢噻吩钠头孢噻吩钠头孢氨苄头孢氨苄 HNOSOH头孢菌素类头孢菌素类NH2CONSOHNCOOHCH3CH3CH23. 茚三酮反响茚三酮反响蓝蓝紫紫色色氨氨基基茚茚三三酮酮 -氨基、伯胺氨基、伯胺某些羟基胺类某些羟基胺类酮式酮式烯醇式烯醇式茚三酮茚三酮茚三酮茚三酮缩合缩合蓝紫色蓝紫色+H2OCNCH2RC OH2RCHH2NCOOH2OHCCOCOCOHNH2C

58、COCOCOCOHCNCCOCOCOCOHCHRNCCOCOCO4. 双缩脲反响双缩脲反响-内酰胺类内酰胺类 CONH紫紫内酰胺类内酰胺类碱性酒石酸铜碱性酒石酸铜 开环分解开环分解2OHCONH2CuCOHNCCH3COONaCH3SNHNCH3CH3COONaCSNOHOHOOCH2NH2CH2HH蓝紫色蓝紫色5. 与变色酸与变色酸-硫酸反响硫酸反响活泼活泼“-CH2-青霉素青霉素阿莫西林阿莫西林氨苄西林氨苄西林HCHOCHSOH ”羰羰基基侧侧链链含含“分解分解变色酸变色酸显色显色 变变色色酸酸阿阿莫莫西西林林HCHOSOH150缩合缩合NH2CONSOHNCOOHCH3CH3HOCH2色

59、色褐褐SO3HSO3HHOHOSO3HSO3HHOHOOHOHHO3SHO3SCHHCHO 缩合缩合6. 与重氮苯磺酸反响与重氮苯磺酸反响橙橙黄黄色色重重氮氮苯苯磺磺酸酸 OHHC巧合巧合酚羟基酚羟基头孢哌酮头孢哌酮SNOHCONHCHCONHH5C2OONNOCOOHCH2SNNNNCH3NClNNaO3S OH巧合巧合NNNNCH3SNOHCONHCHCONHH5C2OONNOCOOHCH2SNNNaO3S7. 与铜盐反响与铜盐反响 CuSOHAc头孢氨苄头孢氨苄橄榄绿色橄榄绿色NaOH专属反响专属反响三沉淀反响三沉淀反响1. 遇酸遇酸白白青青霉霉素素青青霉霉素素钠钠青青霉霉素素钾钾 H2

60、. 有机胺盐反响有机胺盐反响1重氮化重氮化 - 巧合反响巧合反响 青霉素青霉素普鲁卡因普鲁卡因普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素 H重氮化重氮化-巧合反响巧合反响红红 芳伯氨基芳伯氨基C2H52NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCH+C2H52CH2NH2H2NCOOCH2CH2N普鲁卡因普鲁卡因普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素NCH2CH2OOC2C2H5N+Cl-N2C2H5COOCH2CH2NNH2HClNaNO2 2与三硝基苯酚反响与三硝基苯酚反响 三硝基苯酚三硝基苯酚二苄基乙二胺二苄基乙二胺苄星青霉素苄星青霉素NaOH二苄基乙二胺二苄基乙二胺三硝基苯酚三硝基苯酚H2OHOH-