临床真菌学检验基本技术

1、整理ppt1临床真菌学检验基本技术整理ppt2临床真菌基础总论临床真菌基础总论一、真菌的基本介绍一、真菌的基本介绍二、真菌分类及存在形式二、真菌分类及存在形式三、真菌的一般检查三、真菌的一般检查 一般镜检一般镜检 常规染色常规染色 培养及鉴定方式培养及鉴定方式四、真菌的致病性四、真菌的致病性五、真菌的防治原则五、真菌的防治原则整理ppt3一、真菌的基本介绍一、真菌的基本介绍整理ppt4二、真菌分类及存在形式二、真菌分类及存在形式A A、真菌分类从米奇里（、真菌分类从米奇里（P.A.MicheliP.A.Micheli，17291729）开始，）开始，至今已有近至今已有近280280年的历史，这

2、期间经过世界上无数真年的历史，这期间经过世界上无数真菌科学工作者的努力，使真菌分类的工作有了极大地菌科学工作者的努力，使真菌分类的工作有了极大地发展。发展。B B、但是由于真菌分类存在着无数困难，现有的真菌、但是由于真菌分类存在着无数困难，现有的真菌分类系统还有待进一步发展与完善（尚未有一个大家分类系统还有待进一步发展与完善（尚未有一个大家供认的系统）。供认的系统）。 （1）、真菌的分类）、真菌的分类整理ppt51、Ainsworth（1973）分类系统）分类系统 特点：成立菌物界，分特点：成立菌物界，分2 2门，真菌门下分成门，真菌门下分成5 5个亚门；取个亚门；取消藻状菌纲，依据鞭毛的有无

3、划分成鞭毛菌亚门、接合消藻状菌纲，依据鞭毛的有无划分成鞭毛菌亚门、接合菌亚门。菌亚门。2、Alexopoulos & Mims （1979） 分类系统分类系统特点：成立菌物界，菌物界特点：成立菌物界，菌物界MyceteaeMyceteae、FungiFungi分分3 3个门；真个门；真菌类依鞭毛的有无分菌类依鞭毛的有无分2 2门。门。3、菌物分别归属藻界、真菌界、和原生生物界的分类系统、菌物分别归属藻界、真菌界、和原生生物界的分类系统特点：将藻界、真菌界、和原生生物界分开成三个特点：将藻界、真菌界、和原生生物界分开成三个独立的界属独立的界属二、真菌分类及存在形式二、真菌分类及存在形式整理ppt

4、6与医学有关的真菌有四个亚门与医学有关的真菌有四个亚门F接合亚门：毛霉、根霉等接合亚门：毛霉、根霉等F子囊霉亚门：酵母菌属、小孢子霉属等子囊霉亚门：酵母菌属、小孢子霉属等F担子霉亚门：新生隐球菌、灵芝、食用菌等担子霉亚门：新生隐球菌、灵芝、食用菌等F半知霉亚门：假丝酵母菌属、球孢子菌属等半知霉亚门：假丝酵母菌属、球孢子菌属等最新的真菌分类最新的真菌分类接合菌门接合菌门子囊菌门子囊菌门担子菌门担子菌门壶菌门壶菌门整理ppt7根据菌落形态分类：根据菌落形态分类：F酵母菌酵母菌F酵母样菌酵母样菌F霉菌霉菌F双相真菌双相真菌整理ppt8二、真菌分类及存在形式二、真菌分类及存在形式（2）、真菌的存在形式

5、）、真菌的存在形式A、真菌的菌丝先端为生长点，通过顶端延长而生长。菌丝生长生出、真菌的菌丝先端为生长点，通过顶端延长而生长。菌丝生长生出分枝，使其与营养基质接触面积增大，提高吸收力。菌丝内原生质从衰分枝，使其与营养基质接触面积增大，提高吸收力。菌丝内原生质从衰老部分流向幼嫩部分，使菌丝不断伸长，这就是生长。老部分流向幼嫩部分，使菌丝不断伸长，这就是生长。B、在一定条件下由生长转入发育阶段即产生繁殖体，生长与发育受、在一定条件下由生长转入发育阶段即产生繁殖体，生长与发育受环境控制，多数真菌在贫养和低温条件下转入有性阶段，少数菌在高温环境控制，多数真菌在贫养和低温条件下转入有性阶段，少数菌在高温下

6、转入有性阶段。还有些真菌在其不同的发育阶段，必须在不同的寄主下转入有性阶段。还有些真菌在其不同的发育阶段，必须在不同的寄主植物上渡过，即转主寄主（现象）植物上渡过，即转主寄主（现象）。C、只要是专门生殖的细胞，正常情况下不需要两两结合就可以单个、只要是专门生殖的细胞，正常情况下不需要两两结合就可以单个细胞发育成一个个体，这就是孢子。细胞发育成一个个体，这就是孢子。 整理ppt9菌丝的形态：菌丝的形态： 螺旋状、球拍状、结节状、鹿角状、梳状等，螺旋状、球拍状、结节状、鹿角状、梳状等，菌丝形态有助于鉴别真菌。菌丝形态有助于鉴别真菌。孢子的形态：孢子的形态：有性孢子：同一个菌体或不同菌体上两个细胞有

7、性孢子：同一个菌体或不同菌体上两个细胞融合成经减数分裂形成。融合成经减数分裂形成。无性孢子：细胞分化或出芽形成。形态有分生无性孢子：细胞分化或出芽形成。形态有分生孢子、叶状孢子和孢子囊孢子。孢子、叶状孢子和孢子囊孢子。整理ppt10整理ppt11整理ppt12三、真菌的一般检查三、真菌的一般检查（1）、一般镜检）、一般镜检A、氢氧化钾法、氢氧化钾法 将标本置于在玻片上，加一滴将标本置于在玻片上，加一滴10%KOH浮载液，盖上盖玻片浮载液，盖上盖玻片放置放置510分钟后或直接在火焰上快速通过分钟后或直接在火焰上快速通过23次微加热，轻压盖次微加热，轻压盖玻片驱逐气泡并将标本压薄后置于显微镜下检查

8、。先在低倍镜下玻片驱逐气泡并将标本压薄后置于显微镜下检查。先在低倍镜下观察有无菌丝和孢子，然后用高倍镜观察孢子和菌丝的形态特征、观察有无菌丝和孢子，然后用高倍镜观察孢子和菌丝的形态特征、大小和排列等。对于角质标本，必要时可在大小和排列等。对于角质标本，必要时可在10%KOH溶液中，加溶液中，加入终浓度为入终浓度为40%二甲亚砜，促进其溶解。此法适用于皮屑、甲屑、二甲亚砜，促进其溶解。此法适用于皮屑、甲屑、毛发、痂皮、痰、组织、耵聍、粪便等标本的直接涂片检查。毛发、痂皮、痰、组织、耵聍、粪便等标本的直接涂片检查。整理ppt13B、胶带粘贴法、胶带粘贴法三、真菌的一般检查三、真菌的一般检查（1）、

9、一般镜检）、一般镜检 用透明胶带直接贴于取材部位，数分钟后揭用透明胶带直接贴于取材部位，数分钟后揭下，充分展平后，直接置贴于加有一滴浮液的载下，充分展平后，直接置贴于加有一滴浮液的载玻片上此液可以是玻片上此液可以是10%20%的的KOH，也可以采，也可以采用乳酸酚棉蓝染液（易于观察）。该法常用于花用乳酸酚棉蓝染液（易于观察）。该法常用于花斑癣患处的直接检查。斑癣患处的直接检查。整理ppt14三、真菌的一般检查三、真菌的一般检查（2）、常规染色）、常规染色 乳酸酚棉蓝染色乳酸酚棉蓝染色传统染色法，酵母菌细胞、菌丝体和产孢结构传统染色法，酵母菌细胞、菌丝体和产孢结构等皆可被染成亮蓝色；背景为暗淡的

10、蓝色。等皆可被染成亮蓝色；背景为暗淡的蓝色。 过碘酸过碘酸-雪夫染色雪夫染色（P.A.S）在寻找真菌孢子、鉴别真菌、观看真菌结构、在寻找真菌孢子、鉴别真菌、观看真菌结构、等方面有意义等方面有意义 其他染色法其他染色法六胺银法、爱先蓝（六胺银法、爱先蓝（alcian blue）法、）法、革兰氏革兰氏染色法染色法、以及特殊染色法、以及特殊染色法整理ppt15 于洁净载玻片上，滴1-2滴乳酸酚棉蓝染色液，用解剖针从霉菌菌落的边缘外取少量带有孢子的菌丝置于染色液中，再细心地将菌丝挑散开，然后小心地盖上盖玻片(加热或不加热)，注意不要产生气泡。置显微镜下先用低倍镜观察，必要时再换高倍镜。乳酸酚棉蓝染色乳

11、酸酚棉蓝染色整理ppt16 革兰染色法革兰染色法在鉴别细菌、选择抗菌药物、研究细菌致病性在鉴别细菌、选择抗菌药物、研究细菌致病性等方面有意义等方面有意义 （真菌的简单染色也可以）（真菌的简单染色也可以）所有的真菌、放线菌均为革兰染色阳性，呈紫所有的真菌、放线菌均为革兰染色阳性，呈紫黑色。适用于酵母菌、孢子丝菌、组织胞浆菌、黑色。适用于酵母菌、孢子丝菌、组织胞浆菌、诺卡菌及放线菌等培养物的形态检查。诺卡菌及放线菌等培养物的形态检查。石膏样小孢子菌石膏样小孢子菌整理ppt17整理ppt18三、真菌的一般检查三、真菌的一般检查（3）、培养及鉴定方式）、培养及鉴定方式营养营养-水、盐、氮源、碳水、盐、

12、氮源、碳水化合物水化合物环境环境-弱酸性（弱酸性（pH 46）温度（温度（2228），充），充分氧气分氧气对紫外线及一般消毒剂耐受性强对紫外线及一般消毒剂耐受性强对热的抵抗力不强，对热的抵抗力不强，60以上以上1小时即可杀死孢子及菌丝小时即可杀死孢子及菌丝在在1%3%石炭酸石炭酸2.5%碘酊、碘酊、0.1%升汞及升汞及10%甲醛中可被灭甲醛中可被灭活活用甲醛气体熏蒸被真菌污染的衣用甲醛气体熏蒸被真菌污染的衣物用具，可杀灭真菌菌丝及其物用具，可杀灭真菌菌丝及其孢子孢子整理ppt19三、真菌的一般检查三、真菌的一般检查（3）、培养及鉴定方式）、培养及鉴定方式沙保氏培养基沙保氏培养基血平板血平板柯马

13、佳等柯马佳等常规培养常规培养鉴别鉴别整理ppt20三、真菌的一般检查三、真菌的一般检查（3）、培养及鉴定方式）、培养及鉴定方式一、形态学鉴定1、致病真菌的鉴定，、致病真菌的鉴定，需要光镜，现在更加需要光镜，现在更加上荧光显微镜和细胞上荧光显微镜和细胞化学，还有各种染色化学，还有各种染色法。法。2、需要培养来鉴定菌、需要培养来鉴定菌种，选择合适的培养种，选择合适的培养基培养鉴定菌种，是基培养鉴定菌种，是常用的方法。常用的方法。3、现、现 代代 形形 态学技术，态学技术，如自动成像分析、电如自动成像分析、电子颗粒体积、分数几子颗粒体积、分数几何学分析形态学的特何学分析形态学的特点。点。二、分子生物

14、学鉴定1、表型、表型 分分 类类 受限，受限，生理生化技术在丝状生理生化技术在丝状真菌鉴定方面，或是真菌鉴定方面，或是费时费事或是结果不费时费事或是结果不准。准。2、PCR技术，可以技术，可以分析少量真菌细胞，分析少量真菌细胞，甚至单个真菌抱子。甚至单个真菌抱子。3、选择通用寡核昔酸、选择通用寡核昔酸对真菌种特异性引物，对真菌种特异性引物，测定其核昔酸序列。测定其核昔酸序列。三、其他鉴定1、次级代谢产物、次级代谢产物的测定：它是一个的测定：它是一个与分了有关的混合与分了有关的混合物，有特殊的和极物，有特殊的和极罕见的化学结构。罕见的化学结构。常见的是固醇、菇、常见的是固醇、菇、类碱、香豆素等，

15、类碱、香豆素等，某些是真菌毒素。某些是真菌毒素。2、细胞壁组份的、细胞壁组份的测定等测定等整理ppt21A、真菌的侵犯部位不同，其致病性也不相同、真菌的侵犯部位不同，其致病性也不相同&浅部真菌侵犯表皮角质层、毛发和甲板浅部真菌侵犯表皮角质层、毛发和甲板&深部真菌侵犯真皮及以下组织、粘膜和内脏。深部真菌侵犯真皮及以下组织、粘膜和内脏。B、真菌的致病性表现、真菌的致病性表现1. 1. 浅部真菌感染（外源性真菌）浅部真菌感染（外源性真菌）: :手足癣、体癣、股癣、甲癣手足癣、体癣、股癣、甲癣2.2.条件致病性真菌感染（内源性真菌条件致病性真菌感染（内源性真菌/ /机会致病性真菌）如：白假丝酵母机会致

16、病性真菌）如：白假丝酵母菌（白色念珠菌）引起的鹅口疮菌（白色念珠菌）引起的鹅口疮3.3.深部真菌感染深部真菌感染: :新生（型）隐球菌：侵犯中枢神经系统引起慢性脑膜炎新生（型）隐球菌：侵犯中枢神经系统引起慢性脑膜炎4.4.真菌毒素的致病作用真菌毒素的致病作用: :急性中毒：毒蕈中毒，慢性真菌中毒：黄曲霉素、急性中毒：毒蕈中毒，慢性真菌中毒：黄曲霉素、青霉素（霉变食物）青霉素（霉变食物）5. 5. 真菌超敏反应性疾病真菌超敏反应性疾病: :敏感患者吸入真菌孢子，引起敏感患者吸入真菌孢子，引起型超敏反应医学型超敏反应医学 教育网搜集整理。如：寻痲疹、哮喘、变应性鼻炎等。教育网搜集整理。如：寻痲疹、哮喘、变应性鼻炎等。四、真菌的致病性四、真菌的致病性整理ppt22五、真菌的防治原则五、真菌的防治原则 卫生、干燥、消毒（福