动态比浊法定量检测复方氨基酸注射液(3AA)中的细菌内毒素

1、如文档对您有帮助，欢迎下载支持，谢谢！动态比浊法定量检测复方氨基酸注射液（3AA）中的细菌内毒素【关键词】动态【关键词】复方氨基酸注射液；动态比浊法；细菌内毒素；干扰 试验；鲎试剂1材料与方法1 . 1材料与试剂细菌内毒素检查用水（BET水）（批号030510,规 格10 ml /支,厦门宜试剂厂）；邕试剂（动态浊度法宜试仪专用， 批号030725,规格0.15 m 1 /支,厦门宜试剂厂）；细菌内毒素工 作品（批号030610,规格10EUT支，厦门宜试剂厂）；复方氨基酸注射 （3AA）批号 200304012, 200304121,200305093, 200305161, 2003062

2、22, 规格250m 1/瓶，湖北峰江）；BET-3 2型细菌内毒素测定仪（天津 大学无线电厂）；ZH-2自动漩涡混合器（天津药典标准仪器厂）；实验 所用玻璃器皿经铬酸洗液处理后，再经250干烤1h 以上， 除去外源性内毒素。1 . 2方法与结果1.2. 1实验条件：检测温度为37C;检测波长为660 nm; 最长检测时间为8400 s ;1.3. 2细菌内毒素限值（L）的确定1 :按公式L = K/M, K为静脉注射给药的细菌内毒素阈剂量=5 . 0 EU &#12539；m 1 1 , M为病人每千克体重每小时最大给药剂量。本文采用家兔热原剂量 Mk 1 0 ml &#12

3、539; k g - 1 ・ h 1 ,则复方氨基酸 注射液（3AA）细菌内毒素限值（L）为0.5 E U&#12539；m 1 - 1 o1.4. 3标准曲线制备及可靠性：取细菌内毒素工作品 1支加 BET水1.0 ml,用封口膜封口，置漩涡混合器上混合15 min, 进行10倍稀释，然后2倍稀释，且各步置漩涡混合器上混合30 s, 使其最终内毒素浓度为 1.0、0.5、0.25、0.125、0.06 25、0.0312、0.0156EU &#12539；m 1 1 稀释系列， 各取0.15 m 1分别加到预先加有0.15 m 1赏试剂的反应管内，混 合

4、均匀，插入浊度仪进行检测，每一浓度平行 3管，同时用BET水做 2管阴性对照（NC）,结果见表1。表1标准曲线的可靠性内毒素浓度 EUj/m 1 K略R1.5. 4供试品溶液配制及干扰试验：供试品最大有效稀释 倍数（MVD计算：按公式MVD=LXC/入，L为复方氨基酸注射液 （3AA）的内毒素限值0.5EU&#12539；m 1 - 1 ,入为标准曲线最低浓度 0.0156EU&#12539；m 1 - 1 , C 为供试液浓度，当 L 以 EU&#12539m1 1得样品试验时最大有效稀释倍数（MVD）为32倍。干扰预试验： 将3批复方氨基酸注射液（3AA）用BET水

5、稀释为2、4、6、8倍溶液， 每个浓度分别取 0.15 ml加0.15 ml赏试剂作为样品检查（E t ）:同时另取5管，进行同样倍数稀释，并在各浓度溶液中强化0.125 EU&#12539；m 1 1的内毒素作为样品阳性对照液（Es）,分别取上 述各液0.15 ml加入预先加有0.15 ml赏试剂的反应管内进行检 测，每个浓度重复3 管，并设阴性对照，分别测定各浓度样品液及阳性样品的内毒素含量Et和Es,按下式计算回收率（R） 。 R（Es E t） /0.1 2 5 X 1 0 0 %,结果见表 2。表 2 供试品干扰预实验样品批号略3 讨论实验结果表明：各倍稀释液对鲎试剂不存在干扰作用，4 倍可以得到很好的回收率，且动态浊度法进行细菌内毒素定量检测，使用计算机全过程监控，样品反映情况能在显示屏上直观地反映出来，与传统的家兔法相比，避免了动物个体差异及人为判断误差所造成的假阳性或假阴性结果，具有灵敏、简便、结果准确等优点，其检测结果与家兔热原检查结果一致。因此，用动态浊度法检测复方氨基酸注射液(3AA)中