常用染料的激发与发射

1、常用荧光染料的激发和发射波长Fluorescent Dye （6 染料）Excitation（激发波长，nm ）Emission（发射波长，nm ）Cy2 ?489506GFP（Red Shifted）488507YO-PRO ? -1491509YOYO ?-1491509Calcein494517FITC494518FluorX494519Alexa ? 488490520Rhodamine 110496520ABI,5-FAM494522Oregon Green ?500503522Oregon Green ? 488496524RlboGreen ?500525Rhodamine Gr

2、een ?502527Rhodamine123507529Magnesium Green ?506531Calcium Green ?506533TO-PRO ?-1514533TOTO-1514533ABI,JOE520548BODIPY? 530/550530550Dil549565BODIPY?R542568BODIPY558/568558568BODIPY564/570564570Cy3 ?550570Alexa ? 546555570TRITC547572Magnesium Orange ?550575Phycoerythrin,R & B565575Rhodamine Ph

3、alloidin550575Calcium Orange ?549576Pyronin Y555580Rhodamine B555580ABI,TAMRA560582Rhodamine Red ?570590Cy3.5 ?581596ABI,ROX588608Calcium Crimson ?590615Alexa ? 594590615Texas Red595615Nile Red549628YO-PRO ? -3612631YOYO ? -3612631R-Phycocyanin618642C-Phycocyanin620648TO-PRO ? -3642660TOTO-3642660Di

4、D DilC ' (5)644665Cy5 ?649670Thiadicarbocyanine651671Cy5.5675694备注：发射波长的颜色及频率颜色波长频率红色约625 740纳米约480 405兆赫橙色约590 625纳米约510 480兆赫黄色约565 570纳米约530510兆赫绿色约500 565纳米约600 530兆赫青色约485 500纳米约620 600兆赫蓝色约440 485纳米约680 620兆赫紫色约380 440纳米约790 680兆赫荧光染料的使用口丫噬橙：口丫噬橙是最经典的灵敏的荧光染料， 它可对细胞中的DNAF口 RNAW时染 色而显示不同颜色的荧

5、光，DNA呈绿色荧光，RNA呈橙红色荧光。EB:染色DNA 和RN砍光素双醋酸酯（FDA）: FAD?：身无荧光,无极性,可透过完整的原生质膜。 一旦进入原生质体后，由于受到酯酶分解而产生具有荧光的极性物质荧光素。它 不能自由出入原生质膜，因此有活力的细胞能产生荧光，无活力的原生质体不能分解FAD无荧光产生。5mgFDA容于1ml丙酮中，避光4c下贮存，使用时取 0.22mlFDA贮存液加入5ml0.65mol/L甘露醇中.使用时，使最终浓度为0.01%。荧 光染料Ho33342和若丹明123:?活细胞双荧光染色观察细胞核和线粒体。一般的生物染料不能穿透细胞膜，只有当细胞被固定后改变了细胞膜的

6、通透性，染料才能进入细胞内。但有些活体染料能进入活细胞，并对细胞不产生毒性作用。荧光染料Ho33342和若丹明123都是活体染料。Ho33342能与细胞中DNA1行特异的结合， 若丹明 123 能与线粒体进行特异的结合。采用两种荧光染料的混合染液可对一个活细胞的核和线粒体同时染色。荧光组化实验中应注意的几个问题：1.每种荧光染料，均有自己的最适 PH值,此时荧光最强。当pH 改变时，不仅荧光强度减弱，而且波长将有所改变，因此荧光检测时要在一定的PH值的缓冲液中进行。2. 一放荧光染色在20c以下时荧光比较稳定，温度升高常出现温度猝灭。3在荧光观察中，常因激发光的增强而使样品荧光很快衰竭，造成观察和照相困难。为此最好用能量小的长波长光进行观察，需照相时再适当增强激发光。4一