人教版教学课题3血红蛋白的提取和鉴定课件

1、人教版教学课题3血红蛋白的提取和鉴定人教版教学课题3血红蛋白的提取和鉴定每个肽链环绕一个每个肽链环绕一个亚铁血红素基团，亚铁血红素基团，此基团可携带此基团可携带一分子氧或一分子二一分子氧或一分子二氧化碳，氧化碳，血红蛋白因含有血红蛋白因含有血红素血红素而而呈呈红色。红色。人教版教学课题3血红蛋白的提取和鉴定课题课题3 血红蛋白的提取和分离血红蛋白的提取和分离专题专题5 DNA5 DNA和蛋白质技术和蛋白质技术人教版教学课题3血红蛋白的提取和鉴定一、基础知识一、基础知识: :学生活动学生活动1:1:1 1 、分离生物大分子的基本思路是什么？、分离生物大分子的基本思路是什么？2 2 、不同蛋白质的

2、特性在哪些方面存在差异？、不同蛋白质的特性在哪些方面存在差异？3 3 、本课题我们将利用血红蛋白与杂质蛋白哪、本课题我们将利用血红蛋白与杂质蛋白哪方面的差异进行提纯？方面的差异进行提纯？4 4 、为什么不用鸡的血红细胞而用人的血红细、为什么不用鸡的血红细胞而用人的血红细胞作为实验材料？胞作为实验材料？5 5 、用什么方法分离相对分子质量不同的蛋白、用什么方法分离相对分子质量不同的蛋白质质 ？人教版教学课题3血红蛋白的提取和鉴定凝胶色谱法凝胶色谱法人教版教学课题3血红蛋白的提取和鉴定 凝胶色谱法（分配色谱法）：凝胶色谱法（分配色谱法）： 1、什么是凝胶？、什么是凝胶？ 2、什么是、什么是凝胶色谱

3、法？凝胶色谱法？学生活动学生活动2:2:3、凝胶色谱法的原理是什么？、凝胶色谱法的原理是什么？4、请用自己的话总结出凝胶色谱法分离、请用自己的话总结出凝胶色谱法分离相对分子质量不同蛋白质的具体过程。相对分子质量不同蛋白质的具体过程。人教版教学课题3血红蛋白的提取和鉴定人教版教学课题3血红蛋白的提取和鉴定1 、什么是缓冲液？、什么是缓冲液？2、 缓冲液的作用是什么？缓冲液的作用是什么？学生活动学生活动3:3:3、 缓冲液是如何配置的？你所学过的人体缓冲液是如何配置的？你所学过的人体血液的缓冲液有哪些？血液的缓冲液有哪些？4、 本实验加的是什么缓冲液？为何要本实验加的是什么缓冲液？为何要加缓冲液？

4、加缓冲液？（二）、缓冲溶液（二）、缓冲溶液人教版教学课题3血红蛋白的提取和鉴定1 、什么是电泳？、什么是电泳？2、 影响电泳迁移速度的因素有哪些？影响电泳迁移速度的因素有哪些？学生活动学生活动4:4:4、电泳分离各种分子的原理是什么？电泳分离各种分子的原理是什么？（三）、电泳（三）、电泳3、 如何消除电荷对电泳迁移速度的影响？如何消除电荷对电泳迁移速度的影响？5 、请描述电泳的过程？、请描述电泳的过程？人教版教学课题3血红蛋白的提取和鉴定人教版教学课题3血红蛋白的提取和鉴定人教版教学课题3血红蛋白的提取和鉴定电泳检测结果电泳检测结果人教版教学课题3血红蛋白的提取和鉴定二、实验操作二、实验操作

5、蛋白质的提取和分离一般分为四步：蛋白质的提取和分离一般分为四步：（1）样品处理：包括洗涤红细胞；血红蛋）样品处理：包括洗涤红细胞；血红蛋白稀释；离心等操作收集到的血红蛋白白稀释；离心等操作收集到的血红蛋白溶液。溶液。（2）粗分离：透析除去分子较小的杂质。）粗分离：透析除去分子较小的杂质。（3）纯化：通过凝胶色谱法将分子量较大）纯化：通过凝胶色谱法将分子量较大的杂质蛋白质除去。的杂质蛋白质除去。（4）纯度鉴定：通过聚丙烯酰胺凝胶电泳）纯度鉴定：通过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。鉴定。人教版教学课题3血红蛋白的提取和鉴定（一）样品处理（一）样品处理n1、红细胞的洗涤：、红细胞的洗涤：n目的是去除杂蛋白。

6、要加入柠檬酸钠防止血液凝目的是去除杂蛋白。要加入柠檬酸钠防止血液凝固；离心将血液分层，用胶头吸管吸出黄色血浆；固；离心将血液分层，用胶头吸管吸出黄色血浆；用生理盐水洗涤。用生理盐水洗涤。n2、血红蛋白的释放：、血红蛋白的释放：n在蒸馏水和甲苯作用下，红细胞破裂释放在蒸馏水和甲苯作用下，红细胞破裂释放n3、分离血红蛋白溶液：、分离血红蛋白溶液：n离心分层；滤纸过滤去除脂溶性沉淀层；分液漏离心分层；滤纸过滤去除脂溶性沉淀层；分液漏斗分出红色透明液体。斗分出红色透明液体。n4、透析：、透析：n装入透析袋并置于磷酸缓冲液中（装入透析袋并置于磷酸缓冲液中（PH为为7.0）透）透析。析。人教版教学课题3血

7、红蛋白的提取和鉴定透析过程人教版教学课题3血红蛋白的提取和鉴定（二）凝胶色谱操作（二）凝胶色谱操作 取长取长40厘米，内径厘米，内径1.6厘米的玻璃管，厘米的玻璃管，两端需用砂纸磨平。两端需用砂纸磨平。底塞的制作：底塞的制作：打孔打孔挖出凹穴挖出凹穴安装移液管头部安装移液管头部覆盖尼龙网，再用覆盖尼龙网，再用100目尼龙纱包好，目尼龙纱包好，插到玻璃管的一端插到玻璃管的一端。：底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，否则难以铺实尼龙网，还会导致液体残留，蛋白质分离不塞的凹穴底面，否则难以铺实尼龙网，还会导致液体残留，蛋白质分离不彻底。彻底。顶塞的制

8、作：顶塞的制作：打孔打孔安装玻璃管安装玻璃管。组装：组装：将上述三者按相应位将上述三者按相应位置组装成一个整体置组装成一个整体。安装其他附属结构。安装其他附属结构。人教版教学课题3血红蛋白的提取和鉴定A、材料：、材料：交联葡聚糖凝胶（交联葡聚糖凝胶（G-75）。）。B、代表意义：、代表意义：“G”表示凝胶的交联程度，膨胀程度表示凝胶的交联程度，膨胀程度及分离范围及分离范围。75表示凝胶的得水值，即每克凝胶膨胀表示凝胶的得水值，即每克凝胶膨胀时吸水时吸水7.5克。克。配置凝胶悬浮液：配置凝胶悬浮液：计算并称取一定计算并称取一定量的凝胶浸泡于蒸馏水或洗脱液中充分溶胀后，配成量的凝胶浸泡于蒸馏水或洗

9、脱液中充分溶胀后，配成凝胶悬浮液。凝胶悬浮液。A、固定：、固定：将色谱柱装置将色谱柱装置固定在支架上。固定在支架上。B、装填：、装填：将凝胶悬浮液一次性的装将凝胶悬浮液一次性的装填入色谱柱内，装填时轻轻敲动色谱柱，使凝胶填装填入色谱柱内，装填时轻轻敲动色谱柱，使凝胶填装均匀。均匀。注意：注意：1、凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗、凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。粒之间的空隙。 2、装填凝胶柱时不得有气泡存在：、装填凝胶柱时不得有气泡存在：因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果离效果。人教版教学课题3血红蛋白的提取和鉴定装

10、填完毕后，装填完毕后，立即用缓冲液洗脱瓶，在立即用缓冲液洗脱瓶，在50cm高的操作压下，用高的操作压下，用300ml的的20mmol/l的的磷酸磷酸缓冲液（缓冲液（pH为为7.0）充分充分洗涤平衡洗涤平衡12小时小时。1、液面不要低于凝胶表、液面不要低于凝胶表面，否则可能有气泡混入，面，否则可能有气泡混入，影响液体在柱内的流动与影响液体在柱内的流动与最终生物大分子物质的分最终生物大分子物质的分离效果。离效果。2、不能发生洗、不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒脱液流干，露出凝胶颗粒的现象的现象。人教版教学课题3血红蛋白的提取和鉴定打开下端出口，使柱内缓冲液缓慢下降打开下端出口，使柱内缓冲液缓慢下降

11、到与凝胶面平齐，关闭出口。到与凝胶面平齐，关闭出口。 吸管吸吸管吸1ml1ml样品加到色谱柱的顶端，滴加样品加到色谱柱的顶端，滴加样品时，吸管管口贴着管壁环绕移动加样，同时注意不要破坏样品时，吸管管口贴着管壁环绕移动加样，同时注意不要破坏凝胶面。凝胶面。 加样后打开下端出口，使样品渗入凝加样后打开下端出口，使样品渗入凝胶床内，等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口。胶床内，等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口。 小心加入小心加入pH=7.0 pH=7.0 的的20mmol/l20mmol/l的磷酸缓冲液到适当的磷酸缓冲液到适当高度，连接缓冲液洗脱瓶，打开下端出口进行洗脱。高度，连接缓冲液洗脱瓶，

12、打开下端出口进行洗脱。待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每流出液，每5ml5ml收集一试管，连续收集。收集一试管，连续收集。（在分离过程中，如（在分离过程中，如果红色区带均匀一致的移动，说明色谱柱制作成功）果红色区带均匀一致的移动，说明色谱柱制作成功）正确的加样操作：正确的加样操作：1 1、不要触及并破坏凝胶面。、不要触及并破坏凝胶面。2 2、贴壁加样。贴壁加样。3 3、使吸管管口沿管壁环绕移动。、使吸管管口沿管壁环绕移动。人教版教学课题3血红蛋白的提取和鉴定练习巩固1、随着人类跨入蛋白质组时代，对蛋、随着人类跨入蛋白质组时代，对蛋白质

13、的研究和应用越来越深入，首先要白质的研究和应用越来越深入，首先要做的一步是做的一步是A 弄清各种蛋白质的空间结构弄清各种蛋白质的空间结构B 弄清各种蛋白质的功能弄清各种蛋白质的功能C 弄清各种蛋白质的合成过程弄清各种蛋白质的合成过程D 获得高纯度的蛋白质获得高纯度的蛋白质人教版教学课题3血红蛋白的提取和鉴定2、用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中，、用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中，关于蛋白质的叙述，正确的是关于蛋白质的叙述，正确的是A 相对分子质量较小的蛋白质行程大于相对分子质量较小的蛋白质行程大于相对分子质量较大的蛋白质相对分子质量较大的蛋白质B 相对分子质量较小的蛋白质行程小于相对分子质量较小的

14、蛋白质行程小于相对分子质量较大的蛋白质相对分子质量较大的蛋白质C 相对分子质量较小的蛋白质行程等于相对分子质量较小的蛋白质行程等于相对分子质量较大的蛋白质相对分子质量较大的蛋白质D 二者根本无法比较二者根本无法比较人教版教学课题3血红蛋白的提取和鉴定3、使用、使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于同蛋白质的电泳迁移率完全取决于A 电荷的多少电荷的多少 B 分子的大小分子的大小C 肽链的多少肽链的多少 D 分子形状的差异分子形状的差异4、在采血容器中加入柠檬酸钠的目的是、在采血容器中加入柠檬酸钠的目的是A 调节调节pH B 维持红细胞的能量供应维持红细胞的能量供应C 防止微生物生长