临床基因扩增检验质量保证1

1、会计学1临床基因扩增检验质量保证临床基因扩增检验质量保证1第1页/共150页第2页/共150页第3页/共150页第4页/共150页第5页/共150页第6页/共150页正态分布的基本统计学含义可用均数（X）、标准差（s）和概率来说明。第7页/共150页第8页/共150页第9页/共150页第10页/共150页第11页/共150页第12页/共150页第13页/共150页第14页/共150页第15页/共150页第16页/共150页第17页/共150页第18页/共150页第19页/共150页第20页/共150页第21页/共150页第22页/共150页第23页/共150页理想的核酸扩增实验室设计理想的核酸

2、扩增实验室设计A产物分析区产物分析区空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间专用走廊专用走廊工作流向工作流向扩增区扩增区标本制备区标本制备区试剂准备区试剂准备区第24页/共150页产物分析区产物分析区空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间专用走廊专用走廊工作流向工作流向扩增区扩增区标本制备区标本制备区试剂准备区试剂准备区理想的核酸扩增实验室设计理想的核酸扩增实验室设计B第25页/共150页“十六字口诀十六字口诀”第26页/共150页门门试剂准备区试剂准备区标本制备区标本制备

3、区扩增区扩增区产物分析区产物分析区外走廊外走廊门门门门门门门门试剂准备区试剂准备区标本制备区标本制备区扩 增 及 产 物扩 增 及 产 物分析区分析区外走廊外走廊门门门门门门门门AB第27页/共150页试剂准备区试剂准备区标本制备区标本制备区扩 增 及 产扩 增 及 产物分析区物分析区门门门门门门门门空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向第28页/共150页走廊走廊走廊走廊试剂准备区试剂准备区标本制备区标本制备区扩增和产扩增和产物分析区物分析区空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他

4、实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室第29页/共150页门试剂准备区试剂准备区标本制备区标本制备区扩 增 及 产扩 增 及 产物分析区物分析区门门门空气流向空气流向空气流向空气流向+空气流向空气流向+走廊走廊试 剂 准 备试 剂 准 备区区标 本 制 备标 本 制 备区区扩增和产扩增和产物分析区物分析区空气流向空气流向+空气流向+其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室空气流向第30页/共150页产物分析区产物分析区空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间专用走廊专用走廊工作流向工作流向扩增区扩

5、增区标本制备区标本制备区试剂准备区试剂准备区传递窗传递窗传递窗第31页/共150页第32页/共150页仪器设备仪器设备质控方法质控方法 频频 度度失控标准失控标准扩增仪仪器校验实验当仪器移动时实验失败热电偶监测温度扩增功能检测每月一次每 4 个月一次 如靶温度或温度差异超出允许范围待测孔未出现扩增，检测温度程序打印每次测定时打印程序不对加样器校准每年 2 次不符合要求水浴箱温度检测每次实验不符合要求酶标仪预防性维护及校准每年 2 次不符合要求第33页/共150页第34页/共150页第35页/共150页第36页/共150页第37页/共150页SDSDSDabc222.第38页/共150页第39页

6、/共150页第40页/共150页第41页/共150页第42页/共150页第43页/共150页第44页/共150页第45页/共150页第46页/共150页第47页/共150页第48页/共150页XXX单位XXX实验室XXX标准操作程序编号：启用日期：版本：第 页 共 页一目的：二适用范围：三职责或责任人：四（方法原理）五（检测设备和试剂）六（所需的环境条件）七操作步骤： 1 2 3 五、本操作程序变动程序：六、相关的文件七、相关的记录表格和报告编写人审核人批准人第49页/共150页第50页/共150页第51页/共150页第52页/共150页第53页/共150页第54页/共150页第55页/共15

7、0页第56页/共150页第57页/共150页第58页/共150页第59页/共150页第60页/共150页第61页/共150页第62页/共150页第63页/共150页第64页/共150页第65页/共150页第66页/共150页第67页/共150页第68页/共150页第69页/共150页第70页/共150页第71页/共150页第72页/共150页第73页/共150页第74页/共150页第75页/共150页第76页/共150页 临床临床PCRPCR检验流程记录表检验流程记录表 检验日期检验日期 检验项目：检验项目： 扩增仪中保存文件名：扩增仪中保存文件名： 使用说明：使用说明：1本记录表须严格遵循试

8、剂准备区标本制备区扩增区（产物分析区）单一流向移动，严禁逆向移动。2各项工作执行后，在相应叙述前的“”内打“”。3本记录表最后与相应的标本接收记录等归档保存于扩增区的专用文件柜内，以备查找。实验前准备实验前准备 试剂在有效期内 扩增仪、加样器和温度计在校准的有效期内 生物安全柜的滤膜在使用有效期内 消毒溶液在有效期内 洗眼器内无菌生理盐水在有效期内 离心管、带滤芯吸头已经过质检合格 操作者操作者： 第77页/共150页 试剂准备区（试剂准备区（1 1区）区）实验前实验前 ： 打开通风设备 实验台面清洁（水或70%酒精擦拭） 冰箱温度：冷藏室（28） ； 冷冻室（182） 实验室温度： （允许范

9、围：1030）；相对湿度： （允许范围：30%80%）PCR试剂来源： （可直接列出有关厂家名称） 批号：XXXXXXX 检验项目： 本次实验用量： 人份，剩余量： 人份。其他有关试剂配制： 按XXX（将有关SOP编号列出）SOP配制1%含氯消毒液 毫升； 按XXX（将有关SOP编号列出）SOP配制4NaOH溶液 毫升； 按XXX（将有关SOP编号列出）SOP配制0.1%焦磷酸二乙酯 毫升； 按XXX（将有关SOP编号列出）SOP配制 毫升； 其他： 仪器设备使用：仪器设备使用：离心机： 正常 不正常 振荡器： 正常 不正常 超净台： 正常 不正常实验后：实验后： 按XXX（将有关SOP编号列

10、出）SOP清洁实验室台面、地面、加样器和离心机，并进行紫外照射30分钟以上。 按XXX（将有关SOP编号列出）SOP处理实验废弃物。 操作者：操作者： 第78页/共150页 标本制备区（标本制备区（2 2区）区）实验前：实验前： 打开通风设备 实验台面清洁（水或70%酒精擦拭） 冰箱（柜）温度：冷藏室（28） ； 冷冻室（182） 实验室温度： （允许范围：1030）；相对湿度： （允许范围：30%70%）阳性室内质控物来源： 浓度及批号： 扩增位置： 阴性室内质控物来源： 批号： 扩增位置： 所取理的标本（对应标本接收的唯一编号）及拟扩增位置：所取理的标本（对应标本接收的唯一编号）及拟扩增位

11、置：1 19 917172525 3333414149 2 2101018182626 34344242503 3111119192727 35354343514 4121220202828 36364444525 5131321212929 37374545536 6141422223030 383846 547 7151523233131393947 558 8161624243232404048 56核酸提取及加样过程核酸提取及加样过程：按XXX（列出编号）SOP进行。仪器设备使用：仪器设备使用： 生物安全柜： 正常 不正常 恒温仪温度校准： 离心机： 正常 不正常 振荡器： 正常 不正

12、常实验后：实验后： 按XXX（将有关SOP编号列出）SOP清洁实验室台面、地面及仪器设备。 按XXX（将有关SOP编号列出）SOP处理实验废弃物。 操作者：操作者： 第79页/共150页 扩增及产物分析区（扩增及产物分析区（3 3区）区）实验前实验前 打开通风设备 实验台面清洁（水或70%酒精擦拭） 实验室温度： （允许范围：1030）；相对湿度： （允许范围：30%70%）扩增仪操作： 开机自检及运行正常 按XXX（列出编号）SOP进行编程、参数设定标准曲线计算值：标准曲线计算值：Slope值值： （ ）Intercept值值： （ ） r值值： （ ）室内质控结果：室内质控结果：结果： 填

13、写室内质控记录、描质控图 是否失控：是否失控：否 是 实验结果：实验结果：见所附扩增仪打印结果实验后：实验后： 按XXX（将有关SOP编号列出）SOP清洁实验室台面、地面及仪器设备。 按XXX（将有关SOP编号列出）SOP处理实验废弃物。 操作者：操作者： 失控原因及分析：（失控判断标准及原因分析按XXXSOP进行）第80页/共150页第81页/共150页第82页/共150页第83页/共150页基本的工作基本的工作需要需要 仪器设备使用、维护和校准 知识更新 基本实验技能分析所做分析所做的的工作程序不到位？仪器设备操作、维护、校准？人员操作？质控方法？患者或医生患者或医生投诉投诉 结果解释错误

14、？ 与临床沟通不够？ 检测程序、仪器设备有问题？ 质控问题？第84页/共150页第85页/共150页第86页/共150页第87页/共150页第88页/共150页第89页/共150页第90页/共150页第91页/共150页第92页/共150页第93页/共150页第94页/共150页第95页/共150页第96页/共150页第97页/共150页第98页/共150页第99页/共150页第100页/共150页第101页/共150页第102页/共150页第103页/共150页第104页/共150页第105页/共150页第106页/共150页第107页/共150页第108页/共150页第109页/共150页

15、第110页/共150页第111页/共150页第112页/共150页第113页/共150页第114页/共150页第115页/共150页第116页/共150页第117页/共150页第118页/共150页第119页/共150页阳性质控样本测定结果偏低或为阴性阳性质控样本测定结果偏低或为阴性结果偏低结果偏低阴性阴性临床标本中临床标本中无强阳性无强阳性临床标本中临床标本中有较强阳性有较强阳性临床标本临床标本中有阳性中有阳性临床标本临床标本全为阴性全为阴性观察临床标本情况观察临床标本情况所用离所用离心管含心管含抑制物抑制物Taq酶酶活性降活性降低低核酸提核酸提取试剂取试剂效率低效率低更换进更换进口离心口离

16、心管管更换更换Taq酶酶再检测再检测更换核更换核酸提取酸提取试剂试剂所有标本重新检测所有标本重新检测核酸提核酸提取中靶取中靶核酸丢核酸丢失失核酸提核酸提取中抑取中抑 抑物残抑物残留留核酸提核酸提取试剂取试剂混入混入扩增仪扩增仪孔间温孔间温度差异度差异随机误差检测质控样本及检测质控样本及35份已份已知阳性样本知阳性样本质控样本质控样本测定正常测定正常且阳性样且阳性样本有些值本有些值增加增加质控及已质控及已知阳性样知阳性样本测定仍本测定仍异常异常按系统误按系统误差途径分差途径分析析重新提取或已知浓度重新提取或已知浓度DNA在同一孔内扩增在同一孔内扩增结果正常结果正常结果仍低结果仍低进行扩增进行扩增

17、仪孔温度仪孔温度校准后再校准后再检测检测Taq酶或酶或逆转录酶逆转录酶失活失活第120页/共150页第121页/共150页阴性质控样本测定为阳性阴性质控样本测定为阳性临床标本亦全为阳性临床标本亦全为阳性临床标本中有阳性也有阴性临床标本中有阳性也有阴性扩 增 产 物扩 增 产 物“污染污染”试剂试剂“污染污染”同时检测的标本情况同时检测的标本情况扩 增 产 物 轻扩 增 产 物 轻度度“污染污染”标 本 间 交 叉标 本 间 交 叉“污染污染”35空管室空管室内静置内静置58份水样份水样本检测本检测试剂直接试剂直接扩增检测扩增检测验证验证验证验证58份水份水样本检测样本检测暂停日常检验，实暂停日

18、常检验，实验室清洁、通风验室清洁、通风更换试剂更换试剂措施措施有阳性，则确认有阳性，则确认有实验室有实验室“污染污染”无阳性，说明为无阳性，说明为标本交叉标本交叉“污染污染”改善操作改善操作措施措施第122页/共150页第123页/共150页第124页/共150页第125页/共150页第126页/共150页第127页/共150页第128页/共150页第129页/共150页第130页/共150页第131页/共150页第132页/共150页第133页/共150页第134页/共150页第135页/共150页第136页/共150页第137页/共150页第138页/共150页第139页/共150页第140页/共150页第141页/共150页染色体差异染色体差异1.23%(Fujiyama A,et al. Science, 2002,295(5552):131-4)谢谢谢谢！第142页/共150页第143页/共150页第144页/共150页走廊走廊走廊走廊试剂准备区试剂准备区标本制备区标本制备区扩增和产扩增和产物分析区物分析区空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室第145页/共150页第146页/共150页XXX单位XXX实验室X