第9章环境卫生微生物检验(共30页)

1、精选优质文档-倾情为你奉上第九章 环境卫生微生物检验第一节 化妆品微生物检验化妆品是指以涂擦、喷洒或者其他类似的方法，散布于人体表面任何部位（皮肤、毛发、支架、口唇等），以达到清洁、消除不良气味、护肤、美容和修饰目的的日用化学工业产品。在正常以及合理的、可预见的使用条件下，化妆品不得对人体健康产生危害。化妆品的微生物学质量应符合下列规定：眼部化妆品及口唇等黏膜用化妆品以及婴儿和儿童用化妆品菌落总数不得>500CFU/mL或500CFU/g。其他化妆品菌落总数不得>1000CFU/mL或1000CFU/g。每克或每毫升产品中不得检出粪大肠菌群、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌。化妆品中霉

2、菌和酵母菌总数不得>100CFU/mL或100CFU/g。化妆品的直接接触容器材料必须无毒，不得含有或释放可能对使用者造成危害的有毒物质。一、样品的采集及注意事项1、所采集的样品，应具有代表性，一般视每批化妆品数量大小，随机抽取相应数量的包装单位。检验时，应分别从两个包装单位以上的样品中共取10g或10mL。包装量<20g的样品，采集量可以适当增加，其总量应>16g。2、供检验样品，应严格保持原有的包装状态。进口产品应为市售包装。容器不应有破裂，在检验前不得打开，防止样品被污染。3、接到样品后，应立即等级，编写检验序号，并按检验要求尽快检验。如不能及时检验，样品应放在室温音量

3、干燥处，不要冷藏或冷冻。4、若只有一个样品而同时需做多种分析，如细菌、毒理、化学等，应先做微生物检验，再将剩余样品做其他分析。5、在检验过程中，从打开包装到全部检验操作结束，均需防止微生物的在污染和扩散，所用采样用具、器皿及材料均应事先灭菌，全部操作应先在无菌室内进行，或在相应条件下，按无菌操作规定进行。6、若检出粪大肠菌群或其他致病菌，自报告发出之日起该菌种及备检样品应保存一个月。二、供检样品的制备（一）液体样品1、水溶性的液体样品可量取10mL加到90mL灭菌生理盐水中，如样品少于10mL，仍按10倍稀释法进行。如为5mL则加到45mL灭菌生理盐水中，混匀后，制成1:10检液。2、油性液体

4、样品取样品10mL，先加到5mL灭菌液状石蜡混匀，再加10mL灭菌的吐温80，在4044水浴中振荡混合10分钟，加入灭菌生理盐水75mL（在4044水浴中预温），在4044水浴中乳化，制成1:10的悬液。（二）膏、霜、乳剂半固体状样品1、亲水性样品称取10g，加到装有玻璃珠及90mL灭菌生理盐水的三角瓶中，充分振荡混匀，静置15分钟。用其上清液作为1:10检液。2、疏水性样品称取10g，放到灭菌的研钵中，加10mL灭菌液状石蜡，研磨成黏稠状，再加入10mL灭菌吐温80，研磨待溶解后，加70mL灭菌生理盐水，在4044水浴中充分混合，制成1:10检液。 （三）固体样品称取10g，加到90mL灭菌

5、生理盐水中，充分振荡混匀，使其分散混悬，静置后，取上清液作为1:10检液。如有均质器，上述水溶性膏、霜、粉剂等，可称10g样品加入90mL灭菌生理盐水，均质12分钟；疏水性膏、霜及眉笔、唇膏等，称10g样品，加10mL灭菌液状石蜡，10mL灭菌吐温80,70mL灭菌生理盐水均质35分钟。三、化妆品微生物指标检验方法（一）菌落总数菌落总数（aerobic bacterial count）是指化妆品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度、培养时间、pH、需氧性质等），1g（1mL）检样中所含菌落的总数。所得结果只包含一群本方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧性菌落总数。测定菌落总数

6、便于判明样品杯细菌污染的程度，是对样品进行卫生学总评价的综合依据。1、检验步骤 （1）用灭菌吸管吸取1：10稀释的检液2mL，分别注入到两个灭菌平皿内，每皿1mL。另取1mL注入到9mL灭菌生理盐水试管中（注意勿使吸管接触液面），更换一支吸管，并充分混匀，制成1:100检液。吸取2mL，分别注入到两个灭菌平皿内，每皿1mL。如样品含菌量高，还可再稀释成1：1000、1：10000、，每种稀释度更换一支吸管。（2）将融化并冷至4550的卵磷脂吐温80营养琼脂培养基倾注到平皿内，每皿约15mL，随即转动平皿，使样品与培养基充分混合均匀，待琼脂凝固后，翻转平民，置36±1培养箱内培养48&

7、#177;2小时。另取一个不加样品的灭菌空平皿，加入约15mL卵磷脂吐温80营养琼脂培养基，待琼脂凝固后，翻转平皿，置36±1培养箱内培养48±2小时，为空白对照。（3）为便于区别化妆品中的颗粒与菌落，可在没100mL卵磷脂吐温80营养琼脂中加入1mL0.5%的TTC溶液，如有细菌存在，培养后菌落呈红色，而化妆品的颗粒颜色无变化。2、菌落计数方法先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大510倍的放大镜检查，以防遗漏。记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。若平皿中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时，该平皿不宜计数。若片状菌落不到平皿中的一半，而其余一半

8、中菌落数分布很均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘以2，以代表全皿菌落数。3、菌落计数及报告方法（1）首先选取平均菌落数在30300个之间的平皿，作为菌落总数测定的范围，每当有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即以该平皿菌落数乘其稀释倍数（见表9-1中例1）。（2）若有两个稀释度，其平均菌落数均在30300个之间，则应求出两菌落总数之比值来决定，若其比值小于或等于2，应报告其平均数，若大于2则报告期中稀释度较低的平皿的菌落数（见表9-1中例2及例3）。（3）若所有稀释度的平均菌落数均>300个，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表9-1例4）。（4）若所有稀释度的平均菌落

9、数均<30个，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表9-1例5）。（5）若所有稀释度的平均菌落数均不在30300个之间，其中一个稀释度>300个，而相邻的另一稀释度<30个时，则以接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表9-1中例6）（6）若所有的稀释度均无菌生长，报告数为每克或每毫升<10CFU。（7）菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告之，>100时，采用两位有效数字，在两位有效数字后面的数值，应以四舍五入法计算。为了缩短数字后面零的个数，可用10的指数来表示（见表9-1报告方式栏）。在报告菌落数为“不可计”时，应注明样

10、品的稀释度。表9-1 细菌计数结果及报告方式例次不同稀释度平均菌落数两稀释度菌数之比菌落总数CFU/mL或CFU/g报告方式CFU/mL或CFU/g10-110-210-31136516420-1640016000或1.6×10422760295461.63800038000或3.8×10432890271602.22710027000或2.7×1044不可计4650513-或5.1×105527115-270270或2.7×1026不可计30512-3050031000或3.1×1047000-<1×10<10

11、CFU：菌落形成单位（二）粪大肠菌群粪大肠菌群（Fecal conliforms）系一群需氧及兼性厌氧革兰阴性无芽胞杆菌，在44.5±0.5培养2448小时能发酵乳糖产酸产气。该菌直接来自粪便，是重要卫生指标菌。1、检验步骤（1）取10mL 1:10稀释的检液，加到10mL双倍乳糖胆盐（含中和剂）培养基中，置44±0.5培养箱中培养2448小时，如不产酸也不产气，则报告为粪大肠菌群阴性。（2）如产酸产气，划线接种到伊红亚甲蓝琼脂平板上，置36±1培养1824小时。同时取该培养液12滴接种到蛋白胨水中，置44±0.5培养24±2小时。经培养后，在

12、上述平板上观察有无典型菌落生长。粪大肠菌群在伊红亚甲蓝琼脂培养基上典型菌落呈深紫黑色，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润，常具有金属光泽。也有的呈紫黑色，不带或略带金属光泽，或粉紫色，中心较深的菌落，亦常为粪大肠菌群，应注意挑选。（3）挑取上述可疑菌落，涂片革兰染色镜检。（4）在蛋白胨水培养液中，加入靛基质试剂约0.5mL，观察靛基质反应。阳性者液面呈玫瑰红色；阴性反应液面呈试剂本色。2、检验结果报告根据发酵乳糖产酸产气，平板上有典型菌落，并经证实为革兰阴性短杆菌，靛基质试验阳性，则可报告被检样品中检出粪大肠菌群。（三）铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）属于假单

13、胞菌属，为革兰阴性杆菌，氧化酶阳性，能产生绿脓菌素。此外还能液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐，在42±1条件下能生长。该菌对人有致病力，可使伤处化脓，引起败血症等。1、检验步骤（1）增菌培养：取1:10样品稀释液10mL加到90mL SCDLP液体培养基中，置36±1培养1824小时。如有铜绿假单胞菌生长，培养液表面多有一层薄菌膜，培养液常呈黄绿色或蓝绿色。（2）分离培养：从培养液的薄膜处跳取培养物，划线接种在十六烷三甲基溴化铵琼脂平板上，置36±1培养1824小时。凡铜绿假单胞菌在此培养基上，其菌落扁平无定型，向周边扩散或略有蔓延，表面湿润，菌落呈灰白色，菌落周围

14、培养基常扩散有水溶性色素，此培养基选择性强，大肠埃希菌不能生长，革兰阳性菌生长较差。在缺乏十六烷基三甲基溴化铵琼脂时也可以用乙酰胺培养基进行分离，将菌液划线接种于平板上，置36±1培养1824小时。铜绿假单胞菌在此培养基上生长良好，菌落扁平，边缘不整，菌落周围培养基略带粉红色，其他菌不生长。（3）染色镜检：挑取可疑的菌落，涂片，革兰染色，镜检为革兰阴性者应进行氧化酶试验。（4）氧化酶试验：取一小块洁净的白色滤纸片放在灭菌平皿内，用无菌玻璃棒挑取铜绿假单胞菌可疑菌涂在滤纸片上，然后在其上滴加一滴新配制的1%二甲基对苯二胺试液，在1530秒钟之内，出现粉红色或紫红色时，为氧化酶试验阳性；

15、若培养物不变色，为氧化酶试验阴性。（5）绿脓菌素试验：取可疑菌落23个，分别接种在绿脓菌素测定培养基上，置36±1培养24±2小时，加入氯仿35mL，充分振荡使培养物中的绿脓菌素溶解于氯仿液内，待氯仿提取液呈蓝色时，用吸管将氯仿移到另一试管中加入1mol/L的盐酸1mL左右，振荡后，静置片刻。如上层盐酸液内出现粉红色到紫红色时为阳性，表示被检物中有绿脓菌素存在。（6）硝酸盐还原产气试验：挑取可疑的铜绿假单胞菌纯培养物，接种在硝酸盐胨水培养基中，置36±1培养24±2小时，观察结果。凡在硝酸盐胨水培养基内的小导管中有气体者，即为阳性，表明该菌能还原硝酸盐，

16、并将亚硝酸盐分解产生氮气。（7）明胶液化试验：取铜绿假单胞菌可疑菌落的纯培养物，穿刺接种在明胶培养基中，置36±1培养24±2小时，取出放冰箱1030分钟，如仍呈溶解状或表面溶解时即为明胶液化试验阳性；如凝固不溶者为阴性。（8）42生长试验：挑取可疑的铜绿假单胞菌纯培养物，接种在普通琼脂斜面培养基上，放在42±1培养箱中，培养2448小时，铜绿假单胞菌能生长，为阳性，而近似的荧光假单胞菌则不能生长。2、检验结果报告被检样品经增菌分离培养后，经证实为革兰阴性杆菌，氧化酶就绿脓菌素试验皆为阳性者，即可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌；如绿脓菌素试验阴性而液化明胶、硝酸盐

17、还原产气和42生长试验三者皆为阳性时，仍可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌。（四）金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为革兰阳性球菌，呈葡萄状排列，无牙胞，无荚膜，能分解甘露醇，血浆凝固酶阳性。该菌是葡萄球菌中对人内致病力最强的一种，能引起人体局部化脓性病灶，严重时可导致败血症。1、检验步骤（1）增菌：取1:10稀释的样品接种到90mL SCDLP液体培养基中，置36±1培养箱，培养24±2小时。注：如无此培养基也可用7.5%氯化钠肉汤。（2）分离：自上述增菌培养液中，取12接种环，划线接种在Baird Parker培养基，如无此培养基也

18、可划线接种到血琼脂平板，置36±1培养2448小时。在血琼脂平板上菌落呈金黄色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶血圈。在Baird Parker培养基上为圆形，光滑，凸起，湿润，直径为23mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一浑浊带，在其外层有一透明带。用接种针接触菌落似有奶油树胶的软度。偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落，但无混浊带及透明带。挑取单个菌落分纯在血琼脂平板上，置36±1培养24±2小时。（3）染色镜检：挑取分纯菌落，涂片，进行革兰染色，镜检。金黄色葡萄球菌为革兰阳性菌，排列成葡萄状，无芽胞，无荚膜，致病性葡萄球菌，菌体较小，直径约为0.

19、51m。（4）甘露醇发酵试验：取上述分纯菌落接种到甘露醇发酵培养基中，在培养基液面上加入23mm的灭菌液状石蜡，置36±1培养24±2小时，金黄色葡萄球菌应能发酵甘露醇产酸。（5）血浆凝固酶试验：吸取1：4新鲜血浆0.5mL，放入灭菌小试管中，加入待检菌24±2小时肉汤培养物0.5mL。混匀，放36±1恒温箱或恒温水浴中，每半小时观察一次，6小时之内如呈现凝块即为阳性。同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物及肉汤培养基各0.5mL，分别加入灭菌1:4血浆0.5mL混匀，作为对照。2、检验结果报告凡在上述选择平板上有可以菌落生长，经染色镜检，证明为革

20、兰阳性葡萄球菌，并能发酵甘露醇产酸，血浆凝固酶试验阳性者，可报告被检样品检出金黄色葡萄球菌。（五）霉菌和酵母菌霉菌和酵母菌数测定（Determination of molds and yeast count）是指化妆品检样在一定条件下培养后，1g或1mL化妆品中所污染的活的霉菌和酵母菌数量，借以判明化妆品被霉菌和酵母菌污染程度及其一般卫生状况。本方法根据霉菌和酵母菌特有的形态和培养性，在虎红培养基上，置28±2培养72小时，计算所生长的霉菌和酵母菌数。检验操作步骤（1）样品稀释：建菌落总数测定（2）取1:10、1:100、1:1000的检液各1mL分别注入灭菌平板内，每个稀释度各用2

21、平板，注入融化并冷至45±1左右的虎红培养基，充分摇匀。凝固后，翻转平板，置28±1培养72±2小时，计数平板内生长的霉菌和酵母菌数。若有霉菌蔓延生长，为避免影响其他霉菌和酵母菌的计数时，于48±2小时应及时将此平板取出计数。（3）计算方法：先点数每个平板上生长的霉菌和酵母菌菌落数，求出每个稀释度的平均菌落数。判定结果时，应选取菌落数在550个范围之内的平皿计数。乘以稀释倍数后，即为每g（或每mL）检样中所含的霉菌和酵母菌数。其他范围内的菌落数报告应参照菌落总数的报告方法报告之。（4）每g（或每mL）化妆品含霉菌和酵母菌数以CFU/g（mL）表示。第二节

22、 公共场所卫生管理及监督监测（第一部分：公共场所卫生管理规定及相关标准）一、公共场所卫生管理条例公共场所卫生管理条例是为创造良好的公共场所卫生条件，预防疾病，保障人体健康而制定的。公共场所卫生管理条例适用于下列公共场所：1、宾馆、饭馆、旅店、招待所、车马店、咖啡馆、酒吧、茶座；2、公共浴室、理发店、美容店；3、影剧院、录像厅（室）、游艺厅（室）、舞厅、音乐厅；4、体育场（馆）、游泳场（馆）、公园；5、展览馆、博物馆、美术馆、图书馆；6、商场（店）、书店；7、候诊室、候车（机、船）室、公共交通工具。公共场所的下列项目应符合国家卫生标准和要求：1、空气、微小气候（湿度、温度、风速）；2、水质；3、

23、采光、照明；4、噪声；5、顾客用具和卫生设施。公共场所的卫生标准和要求，由卫生部负责制定。国家对公共场所以及新建、改建、扩建的公共场所的选址和设计实行“卫生许可证”制度。“卫生许可证”由县以上卫生行政部门签发。公共场所的主管部门应当建立卫生管理制度，配备专职或者兼职卫生管理人员，对所属经营单位（包括个体经营者，下同）的卫生状况进行经常性检查，并提供必要的条件。经营单位应负责所经营的公共场所的卫生管理，建立卫生责任制度，对本单位的从业人员进行卫生知识的培训和考核工作。公共场所直接为顾客服务的人员，持有“健康合格证”方能从事本职工作。患有痢疾、伤寒、病毒性肝炎、活动期肺结核、化脓性或者渗出性皮肤病

24、以及其他有碍公共卫生的疾病的，治愈前不得从事直接为顾客服务的工作。经营单位须取得“卫生许可证”后，方可向工商行政管理部门申请登记，办理营业执照。在本条例实施前已开业的，须经卫生防疫机构验收合格后，补发“卫生许可证”。“卫生许可证”两年复核一次。公共场所因不符合卫生标准和要求造成危害健康事故的，经营单位应妥善处理，并及时报告卫生防御机构。各级卫生防疫机构，负责管辖范围内的公共场所卫生监督工作。民航、铁路、交通、厂（场）矿卫生防疫机构对管辖范围内公共场所，施行卫生监督，并接受当地卫生防疫机构的业务指导。卫生防疫机构根据需要设立公共场所卫生监督员，执行卫生防疫机构交给的任务。公共场所卫生监督员由同级

25、人民政府发给证书。民航、铁路、交通、工矿企业卫生防疫机构的公共场所卫生监督员，由其上级主管部门发给证书。卫生防疫机构对公共场所的卫生监督职责：1、对公共场所进行卫生监测和卫生技术指导。2、监督从业人员健康检查，指导有关部门对从业人员进行卫生知识的教育和培训。3、对新建、扩建、改建的公共场所的选址和设计卫生审查，并参加竣工验收。卫生监督员有权对公共场所进行现场检查，索取有关资料，经营单位不得拒绝或隐瞒。卫生监督员对所提供的技术资料有保密的责任。公共场所卫生监督员在执行任务时，应佩戴证章、出示证件。凡有下列行为之一的单位或者个人，卫生防疫机构可以根据情节轻重，给予警告、罚款、停业整顿、吊销“卫生许

26、可证”的行政处罚：1、卫生质量不符合国家卫生标准和要求，而继续营业的。2、未获得“健康合格证”，而从事直接为顾客服务的。3、拒绝卫生监督的。4、为取得“卫生许可证”，擅自营业的。罚款一律上缴国库。违反公共卫生管理条例的规定造成严重危害公民健康的事故或中毒事故的单位或者个人，应当对受害人赔偿损失。违反公共卫生管理条例致人残疾或者死亡，构成犯罪的，应由司法机关依法追究直接责任人员的刑事责任。对罚款、停业整顿及吊销“卫生许可证”的行政处罚不服的，在接到处罚通知之日起15天内，可以向当地人民法院起诉。但对公共场所卫生质量控制的决定应立即执行。对处罚的决定不履行又逾期不起诉的，由卫生防疫机构向人民法院申

27、请强制执行。公共场所卫生监督机构和卫生监督员必须尽职尽责，依法办事。对玩忽职守，滥用职权，收取贿赂的，由上级主管部门给予直接责任人员行政处分。构成犯罪的，由司法机关依法追究直接责任人员的刑事责任。二、公共场所卫生监督工作各级卫生监督机构以及民航、铁路、交通、厂（场）矿卫生职能部门和卫生防疫站对所辖区域实施公共场所卫生监督。准备开业的公共场所需要到卫生防疫机构办理“卫生许可证”，“卫生许可证”每两年复核1次。从业人员需要进行健康检查，持有“健康合格证”才可上岗。经常性卫生监督检查的内容包括：1、卫生组织、卫生制度是否建立、健全及执行情况；2、基本卫生设施是否具备；3、公共场所内外环境卫生状况；4

28、、消毒制度、消毒设施是否健全、完好及运行情况；5、公共场所卫生标准中“有关规定”部分执行情况；6、抽查部分从业人员“健康合格证”和“考核合格”章；7、符合从业人员名单是否准确无误，以确定直接为顾客服务人员（含临时工）为体检、培训对象。卫生监督员在监督检查中，应认真填写“现场卫生监督记录”。卫生监督员在执行任务时，不得当场作出行政处罚的决定。在开展公共场所卫生监测时应严格遵守各项操作规程，认真填写“样品采集记录表”，采样记录的编号应于样品编号一致。采样后应填写“卫生监测样品送检单”，连同样品及时送至检验单位。检验者应出具“卫生监测结果报告单”退还承办卫生监督员。卫生防疫机构依据检验结果填写“卫生

29、监督监测评价书”送被监督单位。凡涉及行政触发者，都必须立案。现场调查、核实必须有两名以上卫生监督员或助理卫生监督员（其中卫生监督员不少于1名）同行，赴现场时，卫生监督员必须着装整齐，佩戴“中国卫生监督”证章，出世“中国卫生监督”证件。认证、无证、地点、时间及情节是执行行政处罚的主要依据。在诉讼过程中不得再向被处罚者或证人收集证据，经人民法院同意的除外。涉及国家机密或技术专利的证据，监督机构及调查取证人员要予以保密。由3名以上卫生监督员或助理卫生监督员（其中卫生监督员不少于两名）对经营单位的违法事实进行合议，填写行政控制或行政处罚审批表，并附上述现场调查所得材料，按行政处罚的批注权限逐级上报。对

30、停业整顿及超过3000元的罚款处罚须经同级卫生行政部门批准。地、市级以下卫生防疫机构应报省、自治区、直辖市卫生防疫机构备案。行政处罚实施完毕后，由主办卫生监督员填写结案报告单，予以结案。结案卷宗应包括与本案有关的各种文书、证据。三、公共交通工具卫生标准要求公共交通工具卫生标准规定了旅客列车车厢、轮船客舱、飞机客舱的微小气候、空气质量、噪声、照度得个标准值及其卫生要求。火车、轮船、飞机上的饮水水质应符合GB 5749-2006要求。贮水水箱及蓄水设施应定期清洗消毒。旅客使用的卧具、铺位、席位必须整洁卫生。火车硬卧车厢卧具应单程更换，软席车厢卧餐应一客一换。轮船供三等舱以上旅客使用的卧具应一客一换

31、，供应四、五等舱的卧具应保持清洁。飞机旅客座位头片应做到一客一换，公用毯用后应及时消毒、加封。火车、轮船应有茶餐消毒设备，未经消毒的公用茶具不得供旅客使用。飞机上供旅客使用的茶具、餐布等消毒后上机，应严格执行储藏规定。旅客用毕的一次性塑料餐具等容器应及时处理，集中销毁。旅客列车、轮船、飞机上的卫生间的卫生设施应保持完整。卫生间内应无积水、无积粪、无明显臭味。火车和轮船内的厕所不应设坐式便器。飞机内的厕所应按要求在马桶内投放划粪剂和消毒剂。车厢和客舱内的蚊、蝇、蟑螂指数及鼠密度影达到全国爱卫会考核规定。若发现四害，应立即杀灭。车厢和客舱用于消毒的杀虫和灭鼠的药物，不得有损于人体健康。旅客的固体废

32、弃物应统一装袋，应停站时集中处理，不得随意向窗外抛弃。车厢和客舱内禁止吸烟，应有禁烟的明显标志和管理制度。宜在通风处设置吸烟区。严谨携带腥、臭物品及其有碍公共卫生的物品进入车厢或客舱。火车行驶市区、大桥、隧道和停车5分钟以上的车站量，应封闭厕所，不得倾倒污水、污物，保持周围环境清洁。公共交通工具的设计卫生应执行本标准的要求。四、公共浴室卫生标准内容公共浴室卫生标准规定了公共浴室包括更衣室、浴室（淋、池、盆浴）、桑拿浴室的室温、空气质量和水温等标准值及其卫生要求。公共浴室应设有更衣室、浴室、厕所和消毒等房间。更衣室（包括兼做休息室）必须由保暖、换气设备，地面要防渗、防滑。浴室应设气窗，保持良好通

33、风，起床面积为地面面积的5%。浴室地面坡度不<2%，屋顶应有一定弧度。新建、改建、扩建的浴室内不得设池浴。目前尚不能取消的池浴，在池浴间内必须设置淋浴喷头，池浴内的喷头天数按更衣室床位数的1/5设置。相邻淋浴喷头的间距不<0.9m。池浴每晚要彻底清洗，经过消毒后再换水，池水每日至少要补充2次新水，每次补充水量不小于池水总量的20%。盆浴间须设淋浴喷头，顾客用毕的浴盆应清洗消毒。公用茶具应做到一客一洗一消毒，拖鞋和修脚工具每客用后应消毒。茶具、毛巾和拖鞋应按照规定消毒。修脚工具应参照有关理发用具消毒要求。浴室内不设公用脸巾、浴巾。更衣室（包括兼作休息室）所用垫巾应及时更换，保持清洁整

34、齐。浴室内机器卫生间应及时清扫、消毒，做到无积水、无异味。应设有禁止患性病和各种传染性皮肤病（如疥疮、化脓性皮肤病、广泛性皮肤霉菌病等）的顾客就浴的明显标志。有顾客住宿的公共浴室，住宿用床上用品应符合旅店业卫生标准中有关规定。公共浴室附设的理发店、美容店应执行GB 9666-1996规定。五、理发店、美容店卫生保准的内容理发店、美容店卫生标准规定了理发店、美容院（店）的空气卫生标准值及其卫生要求。经常性卫生要求包括：理发店、美容院（店）的环境应整洁、明亮、舒适。理发店、美容院（店）应有健全的卫生制度。店内应有消毒设施或消毒间。工作人员操作应穿清洁干净的工作服，清面时应戴口罩。理发用大小围布要经

35、常清洗更换。脸巾应洁净，每客用后应清洗消毒，其细菌数应符合GB 9663-1996中表2要求。美容工具、理发工具、胡刷用后应消毒，不得检出大肠菌群和金黄色葡萄球菌。胡刷宜使用一次性胡刷。理发工具宜采用无臭氧紫外线消毒。理发刀具、美容工具配备的数量应满足消毒周转所需。理发、烫发、染发的毛巾及刀具应分开使用，清洗消毒后的工具应分类存放。供顾客使用的化妆品应符合GB 7916-1987规定。必须备有供患头癣等皮肤传染病顾客专用的理发用具，并且明显标志，用后及时消毒，并单独存放。正特、副特、甲、乙级烫发店、燃发电和美容院必须设有单独操作间，并有机械排风装置。无单独操作间的普通理发店应设烫发、染发工作区

36、，还应设有效的抽风设备，控制风速不低于0.3m/s。毛巾与座位的比：正副物质级5:1，甲乙级4:1，丙丁级不少于3:1.干毛巾3:1。美容院（店）工作人员在美容前双手必须清洗消毒，工作时应戴口罩。美容用唇膏、唇笔等应做到一次性使用，一般美容店不得做创伤性美容术。理发店和美容店地下的碎发要及时清扫，保持室内清洁。理发和美容工具应摆放整齐，做到操作台上和刀具等用品表面无碎发残留。六、旅店业卫生标准的内容旅店业卫生标准规定了各类旅店客房的空气质量、噪声、照度和公共用品消毒灯标准值及其卫生要求。经常性卫生要求：各类旅店的店容、店貌和周围环境应整洁、美观、地面无果皮、痰迹和垃圾。各类旅店应有健全的卫生制

37、度。被套、枕套（巾）、床单等卧具应一客一换，常住旅客的床上卧具至少一周一换。星级宾馆还应执行星级宾馆有关床上用品更换规定。清洁的卧具应符合相关规定。公用茶具应每日清洗消毒。清洁的茶具必须表面光洁，无油渍、无水渍、无异味、其细菌数必须达到相关规定。客房内卫生间的洗漱池、浴盆和抽水恭桶应每日清洗消毒并应符合表2规定。无卫生间的客房，每个床位应配备有不同标记的脸盆和脚盆各一个。脸盆、脚盆和拖鞋应做到一客一换，清洁的脸（脚）盆、拖鞋的表面应光洁、无污垢、无油渍，并不得检出致病菌。旅店的公共卫生间（盥洗间和厕所）应该每日清扫、消毒，做到并保持无积水、无积粪、无蚊蝇、无异味。各类旅店应有防蚊、蝇、蟑螂和防

38、鼠害的设施，并经常检查设施使用情况，发现问题及时改进。各类旅店应做到室内外无蚊蝇孳生场所。蚊、蝇、蟑螂等病媒昆虫指数及鼠密度应符合全国爱卫会考核规定。店内自备水源与二次供水水质应符合GB5749-2006规定。二次供水蓄水池应有卫生防护措施，蓄水池容器内的涂料应符合输水管材卫生要求，做到定期清洗消毒。旅客废弃的衣物应进行登记，统一销毁。旅店内附设的理发店、娱乐场所、浴室等应执行相应的卫生标准。地下室旅店的空气质量、噪声、照度和卫生要求等执行人防工程平时使用环境卫生标准的规定。七、商场（店）、书店卫生标准的内容商场（店）、书店卫生标准规定了商场（店）、书店的微小气候、空气质量、噪声、照度等标准值

39、及其卫生要求，适用于城市营业面积在300m2以上和县、乡、镇营业面积在200m2以上的室外内场所、书店。卫生要求：商场（店）、书店营业厅应有机械通风设备。有空调装置的商场（店）、书店，新风量不低于20m3/(h·人)，进风口应远离污染源。新建、改建、扩建商场（店）、书店营业厅应利用自然采光，采光系数不<1/6。店内应清洁整齐。采用湿式清扫，垃圾日产日清。店内禁止吸烟，大型商场应设顾客休息室。大中型商场须设顾客卫生间，卫生间应有良好通风排气装置，做到清洁无异味。综合商场内出售食品、药品、化妆品等商品的柜台应分设在清洁的地方。出售农药、油漆、化学试剂等商品，应有单独售货室，并采取防

40、护措施。出售旧衣物等生活用品的商店，应有消毒措施和消毒制度，旧衣物必须经消毒后方可出售。商场（店）/书店作其他公共场所使用时应执行相应的公共场所卫生标准。八、体育馆卫生标准的内容体育馆卫生标准规定了体育馆内的微小气候、空气质量、通风等标准值及其卫生要求。适用于观众座位在1000个以上的体育馆。卫生要求：体育馆应有机械通风装置。使用空调时观众席的新风量每人每小时不低于20m3。体育馆内禁止吸烟。根据观众厅的座位数分设有相对蹲位的男女厕所，厕所应有单独通风排气设施并无异味。供观众饮用的水须经消毒，其水质应符合GB 5749-2006规定。应采取湿式清扫，及时清除垃圾，保护环境整洁。公用茶具、口巾等

41、要在专用消毒间消毒，消毒的茶具应达到GB 9663-1996中表2的要求。体育馆作其他公共场所使用时应执行相应的公共场所卫生标准。九、图书馆、博物馆、美术馆、展览馆卫生标准的内容规定了图书馆、博物馆、美术馆和展览馆的微小气候、空气质量、噪声、照度等标准值及其卫生要求。卫生要求：使用面积超过300m2的图书馆、博物馆、美术馆和展览馆均应有机械通风装置。馆内采用湿式清扫，及时清除垃圾、污物，保持馆内整洁。馆内禁止吸烟。阅览室内不得进行印刷和复印，保持室内空气清洁。厅内自然采光系数不<1/6，人工照明应达到光线均匀、柔和、不眩目。馆内的卫生间应有单独的通风排气设施，做到无异味。图书馆、博物馆、

42、美术馆、展览馆作其他公共场所使用时，应执行相应的公共场所卫生标准。十、文化娱乐场所卫生标准的内容文化娱乐场所卫生标准规定文化娱乐场所的微小气候、空气质量、噪声、通风等卫生标准值及卫生要求。适用于影剧院（俱乐部）、音乐厅、录像厅（室）、游艺厅、舞厅（包括卡拉OK歌厅）、酒吧、茶座、咖啡厅及多功能文化娱乐场所等。经常性卫生要求：文化娱乐场所室内外环境应整洁、美观，地面无果皮、痰迹和垃圾。文化娱乐场所要有健全的卫生制度。影剧院、音乐厅、录像厅（室）、游艺厅（室）、舞厅等场所内禁止吸烟，宜设专门吸烟室。放映电影的场次间隔时间不得少于30分钟，空场时间不少于10分钟。换场时间应加强通风换气。观众厅及其他

43、文化娱乐场所的座位套应定期清洗保持清洁。立体电影院供观众使用的眼镜每场用后应经紫外线消毒。或使用一次性眼镜。呼吸道传染病流行季节必须加强室内外机械通风换气和空气消毒。剧场及其他文化娱乐场所内严禁使用有害观众健康的烟雾机。舞厅在营业时间内严禁使用杀菌波长的紫外灯和滑石粉。录像厅及其他场所厅（室）内使用的装饰材料不得对人体有潜在危害。放映录像电视最近距离为显示屏幕对角线长度的4倍。采用投影的视距为屏幕宽度的1.5倍。酒吧、茶座、咖啡厅等场内供顾客使用的饮（餐）具应符合茶具消毒判定标准。十一、医院侯诊室卫生标准的内容医院侯诊室卫生标准规定了医院侯诊室的微小气候、空气质量、噪声和照度等标准值及其卫生要

44、求。适用于区、县级以上医院（含区、县级）的候诊室（包括挂号、取药等候室）。卫生要求：候诊室应保持清洁、整齐、安静。室内应采用湿式清扫，垃圾废弃物应日产日清。卫生间应随时清扫、消毒、保洁。候诊室应有通风设施，保持室内空气新鲜。候诊室内禁止吸烟及从事污染环境的其他活动。候诊室内应设有痰盂和污物箱。痰盂和污物箱应每日清洗和消毒。不得在候诊室内出售商品和食物。候诊室内不设公用饮水杯。应有健全的消毒制度，疾病流行时应加强消毒（传染病专科医院一天一消毒）新建区、县级以上的医院应设分科候诊室。十二、游泳场所卫生标准的内容游泳场所卫生标准规定了室内外游泳场所的水质和游泳馆的空气质量等标准值及其卫生要求。适用于

45、一切人工和天然游泳场所。经常性卫生要求：游泳场所的通道及卫生设施应保持清洁无异味并应定期消毒。为防止人工游泳池生长藻类，池水中加入0.250.5mg/L硫酸铜。发现藻类时的最大加药量不应超过1.0mg/L。浸较消毒池水的余氯含量应保持510mg/L，需4小时更换一次。儿童涉水池连续供给的新水中余氯浓度应保持0.30.5mg/L。人工游泳池在开放时间内应每日定时补充新水，保证池水水质有良好的卫生状况。严禁患有肝炎、心脏病、皮肤癣疹（包括脚癣）、重症沙眼、急性结膜炎、中耳炎、肠道传染病、精神病等患者和酗酒者进入人工游泳池游泳。禁止出租游泳衣裤。（第2部分：公共场所卫生监测方法）一、空气微生物样品采

46、集及处理（一）撞击法1、选择有代表性的位置设置采样点。将采样器消毒，按仪器使用说明进行采样。2、样品采完后，将带菌营养琼脂平板置36±1恒温箱中，培养48小时，计数菌落数，并根据采样器的流量和采样时间，换算成没m3空气中的菌落数。以CFU/m3报告结果。3、选择撞击式空气微生物采样器的基本要求：（1）对空气中细菌捕获率达95%。（2）操作简单，携带方便，性能稳定，便于消毒。 （二）自然沉降法1、设置采样点时，应根据现场的大小，选择有代表性的位置作为空气细菌检测的采样点。通常设置5个采样点，即室内墙角对角线交叉点为一采样点与四墙角连线的中点为另外4个采样点。采样高度为1.21.5m。采

47、样点应远离墙壁1m以上，并避开空调、门窗等空气流通处。2、将营养琼脂平板置于采样点处，打开皿盖，暴露5分钟，盖上皿盖，翻转平板，置36±1恒温箱中，培养48小时。3、计数每块平板上生长的菌落数，求出全部采样点的平均菌落数。以CFU/皿报告结果。二、差距微生物检测样品采集机处理（一）细菌总数测定1、随机抽取清洗消毒后准备使用的茶具。2、用灭菌生理盐水湿润棉拭子，在茶具内、外缘，涂抹50cm2，即11.5cm高处一圈（口唇接触处）。应灭菌剪刀剪去棉签手接触的部位，将棉拭子放入10mL生理盐水内，4小时内送检。3、将放有棉拭子的试管充分振摇。此液为1:10稀释液。4、以无菌操作，吸取2mL

48、检样，分别注入到两块灭菌平皿内，每皿1mL。如污染严重，可十倍递增稀释，即吸取1mL加到9mL灭菌生理盐水中，混匀，此液为1:100稀释液。每个稀释度做两块平皿。（二）大肠菌群测定1、随机抽取清洗消毒后准备使用的茶具。2、采用涂抹法检测时，可用上述测定细菌总数采集的样品，无需重采。采用纸片法检测时，用灭菌生理盐水湿润5cm×5cm大肠菌群快速测定纸片两张，分别粘贴在茶具内、外缘口唇接触处，约30秒钟后取下，置于无菌塑料袋内。三、毛巾、床上卧具微生物检测样品采集及处理（一）细菌总数测定1、随机抽取清洗消毒后准备使用的毛巾、床上卧具。2、用灭菌生理盐水湿润棉拭子，在毛巾、枕巾对折后两面的

49、中央各25cm2（5cm×5cm）面积范围；床单、被单在上下两部分25cm2面积范围内有顺序地来回涂抹，用灭菌剪刀剪去棉签手接触的部位，将棉拭子放入10mL生理盐水内，4小时内送检。3、将放有棉拭子的试管充分振摇。此液为1:10稀释液。4、以无菌操作，吸取2mL检样，分别注入到两块灭菌平皿内，每皿1mL。如污染严重，可十倍递增稀释，即吸取1mL加到9mL灭菌生理盐水中，混匀，此液为1:100稀释液。每个稀释度做两块平皿。（二）大肠菌群测定1、随机抽取清洗消毒后准备使用的毛巾、床上卧具。2、采用涂抹法检测时可用上述测定细菌总数采集的样品，无需重采。采用纸片法检测时，用灭菌生理盐水湿润5

50、cm×5cm大肠菌群快速测定纸片两张，分别粘贴在毛巾、床上卧具规定不为和面积范围内，约30秒钟后取下，置于无菌塑料袋内。四、理发用具微生物检测样品采集及处理（一）大肠菌群测定采样应在无菌操作下进行。间蘸有无菌生理盐水的无菌棉拭子在推子前部上下均匀各涂抹三次，或在使用的刀、剪刀的两侧各涂抹一次采样。将采样后的棉拭子剪去受接触部位，放入10mL灭菌生理盐水中，充分振摇，取5mL放入双料乳糖胆盐发酵管中，置36±1温箱培养24小时。（二）金黄色葡萄球菌测定采样方法同理发用具微生物标准检验方法中大肠菌群检测的采样，可将大肠菌群检测后剩余的5mL待检样品进行金黄色葡萄球菌测定。五、拖

51、鞋微生物标准检验方法霉菌和酵母菌测定1、将无菌棉拭子蘸取无菌生理盐水，在每只拖鞋鞋面与脚趾接触处5cm×5cm面积上，有顺序地均匀涂抹3次（一双拖鞋为一份样品）后，用灭菌剪刀将棉拭子手执部分剪断，将棉拭子放入10mL状有玻璃珠的无菌盐水管中。2、将盛有棉拭子的盐水管在手心用力振荡100次，再用带橡皮乳头的1mL灭菌吸管反复吹吸50次，使霉菌孢子呈分散开。此液为1:10稀释液。3、用灭菌吸管吸取1:10检液2mL，分别注入到2个灭菌平皿内，每皿1mL。另取1mL注入9mL家有玻璃珠的灭菌盐水管中，换1支1mL灭菌吸管吹吸5次，此液为1:100稀释液。4、按上述操作顺序作10被稀释递增稀

52、释液，每稀释一次，换一支1mL灭菌吸管，根据样品的污染情况，选择3个合适的稀释度。5、将融化并冷却至45左右的培养基注入灭菌的平皿中，待琼脂凝固后，倒置于2528温箱中，3天后开始观察，共培养观察1周。注：一只拖鞋的涂抹面积是5cm×5cm=25cm2；一双拖鞋的涂抹面积则为25cm2×2=50cm2。六、游泳池水微生物检验标准方法（一）细菌总数测定1、采样瓶的要求和预处理 用于微生物分析的采样瓶要无酸、无碱、无毒的玻璃容器。采样瓶在灭菌前加入足量的10%（m/m）硫代硫酸钠（Na2S2O3）溶液。一般情况下125mL的采样瓶加0.1mL，加完后121高压灭菌20分钟。2、

53、用灭菌吸管吸取均匀水样1mL，注入到灭菌平皿内，另取1mL注入到另一灭菌平皿内做平行接种。再取1mL加到9mL无菌生理盐水中作1:10稀释，混匀后取2mL分别加到两个无菌平皿内，每皿1mL。3、将融化并冷却至45的营养琼脂培养基倾注平皿内，每皿约15mL，另取一个不加样品的无菌平皿作空白对照。立即旋摇平皿，使水样和培养基充分混匀。待琼脂凝固后翻转平皿，置36±1恒温箱内培养48小时。（二）大肠菌群测定1、多管发酵法在2个装有50mL三倍浓缩乳糖胆盐培养液的大试管或烧杯内各加入水样100mL。在10支装有5mL三倍浓缩乳糖胆盐培养液的试管里各加入水样10mL。轻摇试管，使液体充分混匀，

54、置36±1培养箱中，培养24小时。观察每管是否产气，如不产气则报告为达成菌群阴性；若有气体产生则为推测性试验阳性，需做进一步的证实试验。2、滤膜法（1）滤膜灭菌：将滤膜放入含蒸馏水的烧杯中，煮沸灭菌3次，每次15分钟。前两次煮沸后需更换水洗涤23次，以除去残留溶剂。（2）滤器灭菌：用121高压灭菌29分钟或点燃的酒精棉球火焰灭菌。（3）水样过滤：用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗糙面向上，贴放在虑床上。固定好滤器，将100mL水样（如水样含菌数较多，可减少虑水样量或将水样稀释）注入滤器中，打开滤器阀门，在-0.5个大气压下抽滤。（4）培养：水样滤完后，再抽气约5秒钟，关上滤器阀门，

55、取下滤器。用灭菌镊子荚取滤膜边缘部分，移放在乳糖琼脂分离培养基上，滤膜截留细菌面向上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者之间不得留有旗袍。然后将平皿倒置，放入36±1恒温箱内培养1824小时。七、浴盆、脸（脚）盆微生物标准检验方法（一）细菌总数测定1、采样必须在无菌操作下进行，采样用具应高压灭菌12120分钟。2、采样部位，选择在盆内侧壁1/2至1/3高度采样。3、采样布点，浴盆可在四壁及盆底呈梅花布点，脸（脚）盆可在相对两侧壁布点。4、采样方法（1）涂抹法：用浸有无菌生理盐水的棉拭子在规格板5cm×5cm内来回均匀涂满整个方格，并随之转动棉拭子，剪去手接触部位后，将涂抹浴盆的5

56、个棉拭子一并放入125mL的生理盐水烧瓶中，涂抹脸（脚）盆的2个棉拭子一并放入50mL的生理盐水三角烧瓶中，充分振摇或在漩涡振荡器上振荡1分钟，此1mL的菌浓度相当于1cm2的菌量。（2）斑贴法：将5cm×5cm无菌滤纸片放入灭菌平皿中，注入灭菌生理盐水1mL/片（吸满为止），以无菌操作将滤纸片贴到采样部位，1分钟后按序取下，将贴浴盆的5片滤纸一并放入125mL生理盐水中，贴脸（脚）盆的2片滤纸一并放入50mL生理盐水瓶中，充分振摇或在漩涡振荡器上振荡1分钟，此1mL的菌浓度相当于1cm2的菌量。（二）大肠菌群测定1、涂抹法和斑贴法采样如同细菌总数测定。可用细菌总数检测后剩余的样品检测达成菌群，无需重新采样。2、纸片法用无菌生理盐水湿润大肠菌群快速测定纸片5cm×5cm分别贴于采样处，约30秒取下，置无菌塑料袋内。第三节 生活饮用水水质微生物检测一、水样的采集和保存方法1、对容器的要求容器及瓶塞、瓶盖应能经受灭菌的温度，并且在这个温度下不释放或产生任何能抑制生物活动或导致死亡或促进生长的化学物质。玻璃或聚丙烯塑料容器用自来水和洗涤剂洗涤，然后用自来水彻底冲洗。用硝酸溶液1+1浸泡，再用自来水，蒸馏水洗净。为了出去余氯，在灭菌前