大肠杆菌菌株遗传背景

1、肠杆菌DH5菌株的基因型里面， lacU169(80 lac Z M15)是什么意思？DH5况菌株基因型：F- endAI glnV44 thi-1 recAI relAI gyrA96 deoR nupG 80dlacZ M15 (lacZYAirgF)U169, hsdR17(rK-,入-特点：一种常用于质粒克隆的菌株。其80dlacZ M15基因的表达产物与pUC载体编码的 伕半乳糖苷酶氨基端实现a互补，可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1的突变有利于克隆 DNA的 稳定和高纯度质粒 DNA的提取。用途：分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。lacZ基因是大肠杆菌中lac操纵子的结构基因，

2、表达快半乳糖苷 酶，分解乳糖为半乳糖苷。快半乳糖苷酶是由四个相同的亚基组成的，每个亚基又包含两个片断，即a片断和宀片断，只有这两种片断同时存在时，快半乳糖苷酶才表现出活性。lacZ基因的 变异或缺失将直接导致快半乳糖苷酶活性缺失，细胞在只有乳糖 作为碳源的培养基中不能生长，由此可以进行菌株的筛选和纯 化。lacZM15是表达 快半乳糖苷酶a片断的一段基因，当 M15缺失 ( M15)时，lacZ基因虽然能表达 宀片断，但不能表达 a片 断，&半乳糖苷酶没有活性。当带有lacZ (a片断)基因的lac 操纵子通过载体 DNA (如pUC19 DNA )转化到lacZ M15基 因型的细胞

3、(如E.coli JM109 )时，在有IPTG (异丙基-p-D-1- 硫代半乳糖苷)存在的情况下，评乳糖苷酶表现出活性，它能分 解X-gal (半乳糖类似物)，使其呈现蓝色。因此可以通过平板上 的蓝白菌落进行克隆体的鉴定。© 80是指lambdoid 噬菌体基因 © 80delta是缺失的意思后面是缺失的基因acU169是指lacZYA 到argF之间的基因，大约 100,000 bpBL21 (DE3) pLysS 细菌菌株BL21 (DE3) pLysS细菌菌株可以表达T7控制并核糖体结合 位点的高效蛋白表达。 BL21 (DE3) pLysS对入DE3( 1)是溶

4、源 性的。入DE3含有T7噬菌体基因I,编码的T7 RNA聚合酶受lac UV5启动子的控制。BL21 (DE3) pLysS含有pLysS质粒，他携 带编码T7溶菌酶基因。在T7启动子控制下，T7溶菌酶降低靶 基因的背景表达但并不干扰由IPTG诱导的表达水平。BL21是一种适合于外源蛋白表达的菌株，其内源性的蛋白酶基因缺失，BL21 ( DE3)，在BL21的基础，整合了 T7噬菌体基因组，适合T7 表达系统；BL21 (DE3) PLySs,在 BL21(DE3)基础，附带了 T7 溶菌酶基 因，可以更为严谨控制 T7 聚合酶的表达。BL21(DE3)PLySs 的培养基里要加氯霉素， 因为它里面已经带 有一个质粒，这点一定要注意如果你的质粒是 T7 启动的(著名的 pET 表达系统)就应该用(DE3)的菌株，比如 BL21(DE3),JM109(DE3) , BL21 中没有融合如 T7 噬菌体 RNA 聚合酶，所以不能能用于该类型的质粒表 达