xsl新新动物细胞融合与单克隆抗体PPT学习教案

1、会计学1xsl新新动物细胞融合与单克隆抗体新新动物细胞融合与单克隆抗体（一）（一）. .动物细胞融合动物细胞融合1、概念：、概念：请同学们阅读课本请同学们阅读课本P52动物细胞融合动物细胞融合杂交细胞：杂交细胞：融合后形成的具有原来两个或多个细胞融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。遗传信息的单核细胞。也称细胞杂交，是指两个或多个细胞结也称细胞杂交，是指两个或多个细胞结合形成一个细胞的过程。合形成一个细胞的过程。第1页/共24页2、动物融合的过程、动物融合的过程 动物细胞融合过程示意图动物细胞融合过程示意图不同DNA的两个细胞 灭活的病毒有丝分裂两个完整的杂交细胞第2页/共24

2、页 酶解法，如纤维素酶或果胶酶酶解法，如纤维素酶或果胶酶2.2.动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？无需，因为动物细胞无细胞壁无需，因为动物细胞无细胞壁3.3.植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？离心、电激等物理方法；离心、电激等物理方法；PEGPEG等化学方法等化学方法4.4.动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？吗？能能 还可以利用灭活的病毒进行诱导还可以利用灭活的病毒进行诱导5.5.植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行

3、组织培养植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养形形 成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？物个体吗？不能不能第3页/共24页不同不同DNADNA的的两个细胞两个细胞2、动物融合的过程、动物融合的过程诱导融合诱导融合方法：聚乙方法：聚乙二醇、二醇、灭活灭活病毒病毒、电激、电激等等杂交细胞杂交细胞细胞膜的流动性细胞膜的流动性（3 3）、）、应用：主要用于制备单克隆抗体应用：主要用于制备单克隆抗体(2)(2)、意义：意义： 克服远缘杂交不亲和性，成为研究细胞遗传、细克服远缘杂交不亲和性，成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品

4、种培育等的重要手段。胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。第4页/共24页主要用于制备主要用于制备单克隆抗体单克隆抗体获得杂种植株获得杂种植株主要用途主要用途物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒物理（离心、振物理（离心、振动、电刺激）动、电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）诱导方法诱导方法使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱导原生质体融合导原生质体融合 细胞融合的方法细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、植物细胞全能性植物细胞全能性细胞融合的原理细胞融合的原理动物细胞融合动物细胞融合

5、植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目3 3、比较、比较意义：意义：克服远缘杂交障碍克服远缘杂交障碍使远缘杂交成为可能使远缘杂交成为可能第5页/共24页第6页/共24页复习？1.1.抗体是由何种细胞产生的？抗体是由何种细胞产生的？浆细胞浆细胞2.2.一个淋巴细胞一个淋巴细胞( (浆细胞浆细胞) )能分泌多种抗体吗？能分泌多种抗体吗？ 每一个淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。每一个淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。3.3.一种抗原侵入机体之后，引起机体免疫反应产生的抗体只有一种抗原侵入机体之后，引起机体免疫反应产生的抗体只有一种吗？一种吗？ 动物在免疫反应过程中，体内产生的特异性抗体种类可多达百万

6、种以上动物在免疫反应过程中，体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上。4. 4. 简述获得抗体的传统途径？简述获得抗体的传统途径？ 抗原抗原 动物体动物体 抗体抗体 抗原不纯抗原不纯 抗体不纯抗体不纯（二）、单克隆抗体（二）、单克隆抗体刺激浆细胞阅读课本第阅读课本第5354页内页内内容，回答相关问题是内容，回答相关问题是。第7页/共24页6.6.如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？ 体外培养单个淋巴细胞，提取分泌的抗体体外培养单个淋巴细胞，提取分泌的抗体7.7.体外培养淋巴细胞能无限增殖吗体外培养淋巴细胞能无限增殖吗? ?怎样解决这个怎样解决这个问题？问

7、题？5.5.这种方法获得的抗体有什么缺陷？这种方法获得的抗体有什么缺陷？ 产量低，纯度低，特异性差产量低，纯度低，特异性差第8页/共24页设计方案：设计方案：一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞能够在体外大量增殖小鼠骨髓瘤细胞能够在体外大量增殖杂种细胞杂种细胞（二）、单克隆抗体（二）、单克隆抗体1、原始获得抗体的方法：、原始获得抗体的方法：向动物体内反复注射某种向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后，从动物血清中分离所抗原，使动物产生抗体，然后，从动物血清中分离所需抗体。（缺点：产量低、纯度低、特异性差）需抗体。（缺点：产量低、纯度低、

8、特异性差）制备过程制备过程第9页/共24页第10页/共24页免疫小鼠免疫小鼠培养骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞融融合合B B淋巴细胞淋巴细胞注射特注射特定抗原定抗原蛋白蛋白选择培养基上培选择培养基上培养养专一抗专一抗体检验体检验阳性阳性专一抗体专一抗体检验阳性检验阳性注射到小鼠体注射到小鼠体内内体外培养体外培养单克隆抗单克隆抗体体克隆杂交细克隆杂交细胞胞分开不同杂交细胞，克分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性隆专一抗体，检验阳性细胞细胞 单克隆抗体制备过程示意图单克隆抗体制备过程示意图多种杂交细胞多种杂交细胞第11页/共24页第12页/共24页 单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程注射特注射特定

9、抗原定抗原诱导融合诱导融合克隆培养，检测，筛选，克隆培养，检测，筛选，能分泌所需抗体能分泌所需抗体的杂交瘤细胞的杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔单克隆抗体单克隆抗体小鼠小鼠相应的相应的浆细胞浆细胞骨髓瘤骨髓瘤细胞细胞选择性培养基选择性培养基 ，筛选，筛选多种细胞多种细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞体外培养体外培养从培养液中提取从培养液中提取从小从小鼠鼠腹水腹水中提取中提取说明：说明：杂交瘤细杂交瘤细胞特点：既能大量胞特点：既能大量繁殖，又能产生专繁殖，又能产生专一抗体。一抗体。第一次筛选：选第一次筛选：选出杂交瘤细胞。出杂交瘤细胞。第二次筛选：选第二次筛选：选出能分泌所需抗体出能分泌所需抗体的杂

10、交瘤细胞。的杂交瘤细胞。第13页/共24页 由单个由单个B细胞克隆形成的细胞群细胞克隆形成的细胞群产生的化学性质单一、特异性强的抗体产生的化学性质单一、特异性强的抗体 。3、单克隆抗体：、单克隆抗体：优点：特异性强、灵敏度高、并可大量制备优点：特异性强、灵敏度高、并可大量制备 。第14页/共24页4.4.单克隆抗体的应用：单克隆抗体的应用：（1 1）作为诊断试剂：）作为诊断试剂：具有准确、高效、简易具有准确、高效、简易、快速的特点。、快速的特点。 “生物导弹生物导弹”：借助单克隆抗体的导向作用：借助单克隆抗体的导向作用，能将药物定向带到癌细胞所在位置，在原，能将药物定向带到癌细胞所在位置，在原

11、位置杀死癌细胞。位置杀死癌细胞。( (在抗体上连接药物）在抗体上连接药物）优点：疗效高、毒副作用小优点：疗效高、毒副作用小（2）用于治疗疾病和运载药物。）用于治疗疾病和运载药物。第15页/共24页知识结构两个过程两个过程动物细胞培养过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过单克隆抗体制备过程程三个三个“一一”一个诱导细胞融合的新方法一个诱导细胞融合的新方法 灭活的病毒灭活的病毒一个新细胞一个新细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞一个优势一个优势单克隆抗体特异性单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势强、灵敏度高的优势第16页/共24页B2.2.单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的（ ）淋

12、巴细胞淋巴细胞 淋巴细胞淋巴细胞 C.C.骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞 D.D.杂交瘤细胞杂交瘤细胞 D3.3.（多选）（多选）19751975年米尔斯坦和柯勒成功地获得了单克隆抗体。下年米尔斯坦和柯勒成功地获得了单克隆抗体。下列细胞中与单克隆抗体的制备有关的是列细胞中与单克隆抗体的制备有关的是（ ）A.A.效应效应B B细胞细胞 B BT T淋巴细胞淋巴细胞C.C.骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞 D D杂交瘤细胞杂交瘤细胞 A B C D第17页/共24页B B体外培养体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔A AC C 4.4.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法

13、，设计的生产下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案破伤风杆菌的实验方案制备单克隆抗体制备单克隆抗体不能，没有将抗原注入小鼠体内，无法获得不能，没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生单一抗体的产生单一抗体的B B淋巴细胞。淋巴细胞。(1).(1).该实验方案的目的是：该实验方案的目的是：_(2).(2).该方案能达到预期效果吗？为什么？该方案能达到预期效果吗？为什么？(3).A(3).A是从小鼠的脾脏中取得是从小鼠的脾脏中取得_ _ 该细胞能该细胞能够产生够产生_ _ 。(4).(4).图中图中B B为为_过程，常用过程，常用_作为诱导剂，该细胞继承作为诱导剂，该细胞继承

14、_的遗传特性，既能的遗传特性，既能_,_,又能又能_。(5).C(5).C过程指细胞培养，该过程包括过程指细胞培养，该过程包括_培养和培养和_培养两个阶段，其中培养两个阶段，其中_代以内的的细胞属于细胞株。代以内的的细胞属于细胞株。B B淋巴细胞淋巴细胞抗体抗体细胞融合细胞融合灭活的病毒灭活的病毒双亲细胞双亲细胞分泌抗体分泌抗体无限增殖无限增殖原代原代传代传代5050第18页/共24页C C2.2.动物细胞融合和植物原生质融合决定于动物细胞融合和植物原生质融合决定于 ( )( )A.A.细胞膜的流动性细胞膜的流动性 B B细胞膜的选择透过性细胞膜的选择透过性C.C.细胞质的流动性细胞质的流动性

15、D D细胞质酶的活性细胞质酶的活性 A一一.选择题选择题第19页/共24页D4.4.只能使动物细胞融合的常用诱导方法是只能使动物细胞融合的常用诱导方法是 （ ）A APEGPEG B B灭活的病毒灭活的病毒 C C电刺激电刺激 D D离心离心B二二. .简答题简答题1.1.淋巴细胞是由动物体淋巴细胞是由动物体-中的中的-细胞分细胞分化发育而来的。化发育而来的。2.2.杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是-骨髓骨髓造血干造血干主动运输主动运输第20页/共24页提示：植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术基本提示：植物体细胞杂交技术与动

16、物细胞融合技术基本相同，不同的是植物体细胞融合前需去掉细胞壁，然相同，不同的是植物体细胞融合前需去掉细胞壁，然后再融合；动物细胞融合是两个体细胞直接融合。后再融合；动物细胞融合是两个体细胞直接融合。 提示：哺乳动物感染抗原后，其体内会形成相应的提示：哺乳动物感染抗原后，其体内会形成相应的B B淋巴细胞，淋巴细胞，B B淋巴细胞能分泌相应的抗体凝聚或杀死这些抗原。动物在免疫淋巴细胞能分泌相应的抗体凝聚或杀死这些抗原。动物在免疫反应的过程中，每一种反应的过程中，每一种B B淋巴细胞能分泌一种特异性抗体，要想淋巴细胞能分泌一种特异性抗体，要想获得大量的特异性抗体，必须使能分泌该单一抗体的获得大量的特异性抗体，必须使能分泌该单一抗体的B B淋巴细胞淋巴细胞大量增殖。大量增殖。B B淋巴细胞具有产生单一抗体的能力，但不能在体外淋巴细胞具有产生单一抗体的能力，但不能