实验二细菌人工培养学习教案

1、会计学1实验二细菌人工实验二细菌人工(rngng)培养培养第一页，共23页。实验实验(shyn)目的目的n了解人工培养基的制作了解人工培养基的制作(zhzu)(zhzu)。n了解细菌的接种方法了解细菌的接种方法n 分离培养方法分离培养方法平板划线法平板划线法n （混合菌液）（混合菌液）n了解细菌的生长现象了解细菌的生长现象n液体、固体、半固体培养基液体、固体、半固体培养基第1页/共22页第二页，共23页。 一、人工一、人工(rngng)培养基的培养基的制备和种类制备和种类n1. 1.制备原则制备原则n2.2.制备程序制备程序 n3.3.常用常用(chn yn)(chn yn)培培养基的分类养基

2、的分类 n 第2页/共22页第三页，共23页。第3页/共22页第四页，共23页。配制方法配制方法（1 1）称量）称量(chn(chn lin lin) ) 分别称取所需量的胰化分别称取所需量的胰化蛋白胨、酵母提取物和蛋白胨、酵母提取物和NaClNaCl，置于烧杯中。，置于烧杯中。（2 2）溶化）溶化 加入所需水量加入所需水量2/32/3的蒸馏水于烧杯中，用的蒸馏水于烧杯中，用玻棒搅拌，使药品全部溶化。玻棒搅拌，使药品全部溶化。（3 3）调）调pH pH 用用1mol/L NaOH1mol/L NaOH溶液调溶液调pHpH至至7.27.2。（4 4）定容）定容 将溶液倒入量筒中，加水至所需体积。

3、将溶液倒入量筒中，加水至所需体积。（5 5）加琼脂）加琼脂 加入所需量琼脂，加热融化，补足失加入所需量琼脂，加热融化，补足失水。水。（6 6）分装、加塞、包扎。）分装、加塞、包扎。（7 7）高压蒸汽灭菌）高压蒸汽灭菌100Pa100Pa灭菌灭菌20min20min。LBLB培养基的配制：培养基的配制：成分：胰蛋白胨成分：胰蛋白胨(tryptone) 10g、酵母提取物、酵母提取物(yeast extract) 5g氯化钠氯化钠(NaCl) 10g、固体培养基另加、固体培养基另加 琼脂粉琼脂粉 15-20g，加双蒸水至，加双蒸水至1000mL, 用用5mol/L NaOH（约（约0.2ml）调）

4、调pH至至7.2，121灭菌灭菌30min。第4页/共22页第五页，共23页。按物理状态不同按物理状态不同(b (b tn)tn)划分划分固体固体(gt)(gt)培培养基养基 液体液体(yt)(yt)培养基培养基在液体培养基中加入一定量凝固剂，使在液体培养基中加入一定量凝固剂，使其成为固体状态，琼脂含量一般为其成为固体状态，琼脂含量一般为1.5%-2.0%1.5%-2.0%琼脂含量一般为琼脂含量一般为0.3%-0.5%不加任何不加任何凝固剂凝固剂半固体培养基半固体培养基固体培养基常用来进行微生物的分离、鉴固体培养基常用来进行微生物的分离、鉴定、活菌计数及菌种保藏定、活菌计数及菌种保藏 观察微生

5、物的运动特征、分类鉴定及噬菌体观察微生物的运动特征、分类鉴定及噬菌体效价滴定效价滴定 用于增菌，大规模工业生产及在实验室用于增菌，大规模工业生产及在实验室进行微生物的研究进行微生物的研究 第5页/共22页第六页，共23页。按用途按用途(yngt)(yngt)不不同划分同划分基础基础(jch)(jch)培养基培养基鉴别鉴别(jinbi)(jinbi)培养基培养基含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物。比如含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物。比如 肉汤培养基。肉汤培养基。选择培养基选择培养基利用细菌代谢产物不同而使指示剂显色反应不同的利用细菌代谢产物不同而使指示剂显色反应不同的原理，鉴别和鉴定

6、细菌。如原理，鉴别和鉴定细菌。如麦糠凯琼脂培养基。麦糠凯琼脂培养基。营养培养基营养培养基在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质，抑在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质，抑制不需要的微生物的生长，有利于所需微生物的生长。制不需要的微生物的生长，有利于所需微生物的生长。用来将某种或某类微生物从混杂的微生物群体用来将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来。中分离出来。如如SS琼脂培养基。琼脂培养基。在基础培养基中加入某些特殊营养物质制成的在基础培养基中加入某些特殊营养物质制成的一类营养丰富的培养基。如一类营养丰富的培养基。如血琼脂培养基。血琼脂培养基。特殊培养基特殊培养基如厌氧培养基

7、。如厌氧培养基。用于厌氧菌的培养。用于厌氧菌的培养。第6页/共22页第七页，共23页。第7页/共22页第八页，共23页。无菌操作无菌操作(cozu)：在无菌箱或操作室内无菌的环境在无菌箱或操作室内无菌的环境(hunjng)下进行下进行第8页/共22页第九页，共23页。第9页/共22页第十页，共23页。图6第10页/共22页第十一页，共23页。 第11页/共22页第十二页，共23页。1、以无菌操作用接种环取待分离纯化的菌液，将菌液点种在平板、以无菌操作用接种环取待分离纯化的菌液，将菌液点种在平板边缘一处，取出接种环，烧去多余的菌种。边缘一处，取出接种环，烧去多余的菌种。2、将接种环再次通过稍打开

8、皿盖的缝隙（约、将接种环再次通过稍打开皿盖的缝隙（约45度角）伸入平板，度角）伸入平板，在平板边缘空白处接触一下在平板边缘空白处接触一下(yxi)使接种环冷却使接种环冷却,然后从接种有菌然后从接种有菌的部位在平板上自左向右轻轻划线。的部位在平板上自左向右轻轻划线。3、划线时平板面与接种环面成、划线时平板面与接种环面成30-40度角，以手腕力量在平板表面度角，以手腕力量在平板表面轻巧滑动划线轻巧滑动划线, 线条要平行密集，充分利用平板表面积，注意勿使线条要平行密集，充分利用平板表面积，注意勿使前后两条线重叠，划线完毕，关上皿盖前后两条线重叠，划线完毕，关上皿盖.灼烧接种环。灼烧接种环。4.用接种

9、环先将培养物涂布于平板用接种环先将培养物涂布于平板1区并作数次划线区并作数次划线,再在再在2、3区依次划线。区依次划线。5.每划完一个区域，均将接种环灭菌一次，待冷后再划下一区域每划完一个区域，均将接种环灭菌一次，待冷后再划下一区域6.每一区域的划线均接触上一区域的接种线每一区域的划线均接触上一区域的接种线12次，使接种量逐渐次，使接种量逐渐减少，以获得单个菌落。其他操作与上述曲线划线分离法相同。减少，以获得单个菌落。其他操作与上述曲线划线分离法相同。 斜线斜线(xi xin)(xi xin)(分区分区) )划线分离划线分离法法第12页/共22页第十三页，共23页。第13页/共22页第十四页，

10、共23页。纯种纯种(chn zhn)(chn zhn)细菌接种法细菌接种法 第14页/共22页第十五页，共23页。纯种细菌纯种细菌(xjn)(xjn)接种法接种法 第15页/共22页第十六页，共23页。 纯种细菌纯种细菌(xjn)(xjn)接种法接种法 第16页/共22页第十七页，共23页。三三. .细菌生长细菌生长(shngzhng)(shngzhng)现象观察（示现象观察（示教）教）第17页/共22页第十八页，共23页。不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般(ybn)都具有稳定的特征（形状、颜色等），可以成为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据。第18页/共22页第十九页，共23页。第19页/共22页第二十页，共23页。第20页/共22页第二十一页，共23页。第21页/共22页第二十二页，共23页。NoImage内容(nirng)总结会计学。第1页/共22页。第2页/共22页。（3）调pH 用1mol/L NaOH溶液调pH至7.2。（7）