风寒感冒颗粒的质量标准研究

1、    风寒感冒颗粒的质量标准研究    李立纪张风雷邹雁宁【摘 要】 目的：建立风寒感冒颗粒的质量控制标准。方法：采用hplc测定葛根素的含量，薄层色谱法tlc鉴别方中的葛根、麻黄及陈皮。结果：定量方法简单、准确。葛根素在0023005750g浓度范围内呈良好的线性关系，线性方程：y=44282x-69577，r2=1；葛根素平均回收率9876% ，rsd为15% （n=6）。tlc鉴别专属性强，无干扰。结论：本质量标准可有效的控制风寒感冒颗粒的质量。【关键词】 风寒感冒颗粒；hplc；tlc；质量标准r286 【文献标志码】 a 1007-8517（

2、2014）24-0019-03quality standard for fenghan ganmao granulesli liji，zhang fenglei，zou yanningkunming institute of medical science ，kunming 650051，chinaabstract：objective to establish the quality standard for fenghan ganmao granules.method the contents of puerarin were determined by hplc.tlc was used

3、to identify radix puerariae，pericarpium citri reticulatae blanco and ephedra sinica stapf.results the linear range of puerarin was 0023005750g，y = 44282x69577，r2=1.the average recovery was 98.76% ，rsd 1.5% （n=6） .the compounds were identified by tlc .conclusion the methods are simple.the result is a

4、ccurate ， the reproducibility is good.there mothods can be used as the quality control of fenghanganmao granules.keywords：fenghan ganmao granules；hplc puerarin； tlc；quality standard风寒感冒颗粒由麻黄、葛根、紫苏叶、防风等1l味中药组成，具有解表发汗、疏风散寒之功效，临床用于治疗感冒身热，头痛，咳嗽，鼻塞，流涕之症。是一种治疗感冒常用的中成药，风寒感冒颗粒收载于卫生部药品标准1，原标准项下只有颗粒剂通则检查项，缺乏鉴

5、别和含量测定项目。方剂中麻黄具有发汗散寒、宣肺平喘、利水消肿。陈皮具有理气健脾、燥湿化痰的功效，葛根在2005版中国药典中有粉葛、野葛，其葛根素含量相差很大，为了研究风寒感冒颗粒的质量控制，我们选用野葛，按部版要求制作了三个批次的风寒感冒颗粒，制定了葛根、陈皮、麻黄的薄层鉴别方法及葛根素高效液相色谱定量的方法。1 材料11 仪器 高效液相色谱仪：agilent1100系列，包括g1314a紫外检测器、g1316a柱温箱、g1313a自动进样器、g1311a四元梯度泵、g1322a真空脱气机、agilent chemstation工作站，色谱柱：zorbax lichrospher 100 rp

6、-18（46×250mm，5-micron），岛津2400紫外分光光度仪。12 供试药 风寒感冒颗粒、风寒感冒颗粒空白阴性试样：自制（按国药准字z43020521），批号：20050823，20050824，20050825；高纯水采用蒸馏水过millipore simplicity 185纯水机制备；甲醇（hplc），乙醇（ar）；陈皮苷、葛根素对照品由中国药品生物制品检定所购得，批号：11072-200512，110752-200511。2 方法21 化学成分的tlc鉴定211 葛根的薄层鉴别 取三批样品各10g，加50ml甲醇，超声处理30min，过滤，滤液蒸干，残渣加30ml

7、水溶解，分别用乙酸乙酯、正丁醇提取3次，每次20ml。分别合并乙酸乙酯、正丁醇，用水洗涤3次，每次20ml，分别蒸干乙酸乙酯、正丁醇。残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取葛根素对照品，加甲醇制成每毫升含1mg的溶液，作为对照品。展开剂用甲醇水（1001013）展二次；展开，取出，晾干，置紫外灯（365nm）下检视，供试品乙酸乙酯部分与对照品相同位置上，显相同颜色的荧光斑点（见图1a）。经阴性对照试验及三批样品试验观察，斑点分离清晰，层析效果好，阴性对照无干扰，达到了薄层鉴别目的，确定本法可行。212 陈皮的薄层鉴别 取葛根素薄层鉴别项下的供试品溶液的乙酸乙酯部分，另取陈皮苷对照品1mg

8、，加吡啶制成每毫升含1mg的溶液，作为对照品。展开剂用乙酸乙酯甲醇水（1001713）展开至约4cm或8cm，取出，晾干。喷以三氯化铝试液；置紫外灯（365nm）下检视，供试品与对照品相同位置上，显相同亮黄色的荧光斑点（见图1b）。经阴性对照试验及三批样品试验观察，斑点分离清晰，层析效果好，阴性对照无干扰，达到了薄层鉴别目的.213 麻黄的薄层鉴别 取葛根素薄层鉴别项下的正丁醇部分供试品溶液，另取麻黄对照品药材1g，加浓氨水8滴，再加氯仿20ml，加热回流1h，过滤，滤液蒸干，残渣加2ml甲醇充分溶解，过滤，滤液作为对照品溶液。以氯仿甲醇浓氨水试液（20505）为展开剂；展开，取出，晾干，喷以

9、茚三酮试液，再加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的红色斑点。达到了薄层鉴别目的（见图1c），确定本法可行。 a： 颗粒中葛根素的tcl鉴定，依次为1、2、3三个批次，4为葛根药材，5为对照品，6阴性对照b：颗粒中陈皮苷的tcl鉴定，依次为1、2、3三个批次，4为陈皮药材，5为对照品，6阴性对照c：颗粒中麻黄的tcl鉴定，依次为1、2、3三个批次，4为麻黄对照药材，5阴性对照22 hplc定量测定伤风颗粒中的苦杏仁苷221 含量测定方法学考察 色谱条件：色谱柱：zorbax lichrospher 100 rp-18（46×250mm，5m），流动相：

10、甲醇-水（2575） 2；检测波长250nm；流速10ml/ min，柱温25；进样量：10l。在此色谱条件下，风寒感冒颗粒中葛根素其他组分均能达到基线分离（见图2-b），葛根素峰的理论板数大于3000，对照品、样品、及阴性对照品hplc图见图2（a、b、c）222 对照品溶液的制备 精密称取苦杏仁对照品230mg，用1ml甲醇溶解，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得供hplc用的对照品溶液。223 线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液1、2、5、10、15、20、25l按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积积分值（atm*s）为纵坐标，进样量（g）为横坐标绘制标准曲线，计算回归方

11、程，葛根素：y=4428269577，r2=1；结果表明葛根素进样量在0023005750g范围内有良好的线性关系。224 精密度考察 吸取葛根素对照品溶液，每次进样20l，重复进样5次，计算rsd为096%。225 样品的测定2251 样品的提取方法的考察 根据文献资料，准确取1g颗粒采用90%、70%、50%、30%超声提取20min，过滤，定容，待测。90%甲醇提取物杂质多，未达到基线分离，且提取率低；30%甲醇提取hplc分离尚可，文献报道用此法多，但很难过滤，葛根素提取不完全；50%甲醇超声提取，葛根素提取率高。2252 供试品溶液的制备 准确称取05g的颗粒，加入15ml的50%甲

12、醇超声20min，滤过除去大部分不溶的淀粉，定容至25ml；尚还有细小的淀粉颗粒，再次过滤至清亮，最后用微孔滤膜（05m）滤过。用于高效液相分析，供试品中葛根素与杂质峰达到基线分离（见图2b）。2253 重复性实验 精密称取顆粒05g，共5份，按上述方法制成供试品溶液并进行测定，结果表明，葛根素5次测定值的rsd为18%。2254 稳定性实验 取对照品溶液及供试品溶液，分别于1、2、4、6、8小时考察葛根素对照品溶液及供试品溶液稳定性，葛根素峰面积积分值的相对标准偏差分别为12、23%，对照品溶液及供试品溶液均稳定。2255 加样回收率 分别精密称取6份已测知含量的样品05g，研细，精密称取，置具塞锥形瓶中，分别精密加入葛根素对照品溶液（用50%甲醇水配制成0023mg/ml）05、15、2ml，再加入15ml 50%甲醇，以下按供试品溶液制备方法从，“超声处理”起，同方法操作。计算回收率。结果见表1。2256 样品测定 精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10l ，分别注入液相色谱仪进行测定，取2次测定的平均值作为结果，详见表2。3 讨论笔者曾选择测定防风中的升麻素苷c22h27o11和5-o-甲基维斯阿米醇苷c22h28o10，因含量低，尚未达到基线分离，因此最终没有作为指标成分。在本实验中，样品提取方法薄层定性检测和hplc略有不同，hplc用30%的乙醇提