仪器分析简要归纳

1、红外光谱法1. 物质吸收红外光的必要条件分子的振动必须能与红外辐射产生耦合作用，即分子振动时必须伴随瞬时偶极矩的变 化。只有当照射分子的红外辐射光子的能量与分子振动能级跃迁所需的能量相等，才能实现振动与辐射的耦合，从而使分子吸收红外辐射能量产生振动能级的跃迁。即 Ev= Ev2- Ev1= h u。2. 红外光谱法的缺点：色散型仪器的分辨率低，灵敏度低，不适于弱辐射的研究。不能用于水溶液及含水物质的分析。对某些物质不适用： 如振动时无偶极矩变化的物质；左右旋光物质的IR谱相同；长链正烷烧类的IR谱近似等。复杂化合物的光谱极复杂，难以作出准确的结构判断，往往需与其它方法配合。3. 红外光谱的吸收

2、峰：泛频峰：倍频、合（组）频峰。倍频峰：由基态（v=0）跃迁到v=2, 3 , 4,激发态产生的。合频峰：在两个以上基频峰波数之和或差处出现的吸收峰。4. 简正振动：把多原子分子的振动分解成许多简单的基本振动。简正振动的特点： 振动的运动状态可以用空间自由度（空间三维坐标）来表示，体系中的每一质点（原子）都具有三个空间自由度。分子的质心在振动过程中保持不变，分子的整体不转动。 每个原子都在其平衡位置上作简谐振动，其振动频率及位相都相同，即每个原子都在同一瞬间通过其平衡位置，又在同一时间到达最大的振动位移。分子中任何一个复杂振动都可以看成这些简正振动的线性组合。5. 影响吸收峰强度的因素振动能级

3、的跃迁几率和振动过程中偶极距的变化是影响红外吸收峰强度的两个主要因素，基频吸收带一般较强，而倍频吸收带较弱。基频振动过程中偶极矩的变化越大，其对应的峰强度也越大；振动的对称性越高（即化学键两端连接的原子的电负性相差越小），振动中分子偶极矩变化越小，谱带强度也就越弱。因而，一般来说极性较强的基团振动吸收强度较大，极性较弱的基团振动吸收较弱。一般来说，反对称伸缩振动的强度大于对称伸缩振动的强度，伸缩振动的强度大于变形振动的强度。6. 傅里叶变换红外分光光度计的特点（1）多路优点 导致其扫描速度较色散型快数百倍，有利于光谱快速记录， 使FI-IR特别适用于与 GG HPLC联用，也可用来观测瞬时反应

4、。（2）辐射通量大 导致高灵敏度，检出限达 10-910-12g；特别适用于测量弱信号光谱，且对研究催化剂表面的化学吸附物具有很大的潜力。（3）波数准确度高波数精度可达0.01cm-1。（4）杂散光低 在整个光谱范围内杂散光低于0.3%。（5）可研究很宽的光谱范围100010cm-1,这对测定无机化合物和金属有机化合物十分有利。（6）具有高的分辨能力 一般达0.1cm-1,甚至可达0.05cm-1,可以研究因振动和转动吸收带重叠而导致的气体混合物的复杂光谱。（7） FT-IR适用于微少试样研究。光学分析导论 狭缝宽度的选择原则定性分析：选择较窄的狭缝宽度一提高分辨率，减少其它谱线的干扰，提高选

5、择性；定量分 析：选择较宽的狭缝宽度一增加照亮狭缝的亮度，提高分析的灵敏度；应根据样品性质和分析要求确定狭缝宽度。并通过条件优化确定最佳狭缝宽度。与发射光谱分析相比，原子吸收光谱因谱线数少，可采用较宽的狭缝。但当背 景大时，可适当减小缝宽。NMR1. 影响化学位移的因素 化学位移是由于河外电子云产生的对抗磁场引起的，因此，凡是使核外电子云密度改变的因素，都能影响化学位移。 氢谱中影响化学位移的因素主要有：I诱导效应若核与电负性较强的原子或基团相连，则核周围的电子云密度下降（去屏蔽），屏蔽效应降低，化学位移值增大，吸收峰左移；若核与给电子基团连接，则其周围电子云密度增加，屏 蔽效应增加，化学位移

6、值减少，吸收峰右移。共轴效应 p-兀共轴使核周围电子云密度增加，化学位移值降低，共振吸收峰移向高场；兀-兀共轴使核周围电子云密度降低，化学位移值增加，共振吸收峰移向低场。m磁各向异象效应 在外磁场的作用下，核外的环电子流产生了次级感生磁场，由于磁力线的闭合性质，感生磁场在不同部位对外磁场的屏蔽作用不同，在一些区域中感生磁场与外磁场方向相反，起抗外磁场的屏蔽作用，这些区域为屏蔽区，处于此区 的共振吸收峰出现在高场（或低频）；而另一些区域中感生磁场与外磁场的方向相同，起去屏蔽的作用，这些区域为去 屏蔽区。处于此区的共振吸收峰出现在低场（高频），这种作用称为磁的各向异性效应。磁的各向异性效应主要发生

7、在具有多重键或共轴多重键的基团，他是通过空间感应磁场起作用的，涉及的范围大，所以又成为远程屏蔽。W范德华效应 因为范德华力作用，电子云相互排斥，导致原子核周围电子云密度降低，屏蔽减小，谱线向低场移动，这种效 应称为范德华效应。V 氢键分子形成氢键以后，因静电场的作用，使氢外围电子云密度降低而去屏蔽，吕值增加。VI溶剂效应 溶质分子收到不同溶剂影响而引起的化学位移变化成为溶剂效应。 碳谱中影响化学位移的因素主要有：I杂化轨道的影响 屏蔽常数。（sp3） 。（sp） CT （sp2）； n诱导效应 同氢谱；m空间效应 相互靠近的原子之间存在着范德华力，使13c化学位移移向高场，另外相互靠近的原子之

8、间存在排斥力。影响了核的屏蔽常数，进而也影响了化学位移；W共轴效应 如苯环，若与给电子基团连接，从而增加了邻位和对位碳的电荷密度，屏蔽效应增加，移向高场，当与吸电子基团连接时，邻位和对位碳的电荷密度减少，屏蔽减少， 移向低场；V电场效应 对二、脸碳原子影响较大；VI重原子效应 因原子碘和漠取代而使得化学位移减小的现象称为重原子效应，这是因为这些重原子的核外电子较多，原子半径较大，使得他们的供电子效应大于诱导效应；W同位素效应 分子中的质子被其同位素觉取代后，由于平均电子激发能的增加，导致相连碳的化学位移值减小，成为同位 素效应。其他影响因素还有分子内氢键的形成和介质效应。仪器分析绪论1）精密度

9、（Precision）:使用同一方法或步骤进行多次重复测量所得分析数据之间符合的程度。2）误差（Bias）:测量值的总体平均值 x与“真值 接近的程度。3）灵敏度（Sensitivity）:反映了仪器或方法区别微小浓度或含量变化的能力，也就是说，当浓度或含量有微小变化时， 仪器或方法均可以觉察出来。4） 检测限（Detection limit, DL）:在已知置信水平，可以检测到的待测物的最小质量或浓度。【检出限：以特定的分析方法，以适当的置信水平被检出的最低浓度或最小量。（原子吸收）】5）信噪比（singnal-to-noise ratio, S/N ）6）动态范围（Dynamic rang

10、e）7）选择性（Selectivity）:样品基体中其它组份对测定待测物时的干扰程度。仪器分析校正方法1）标准曲线法 标准曲线法的准确性与否与两个因素有关：标准物浓度配制的准确性；标准基体与样品基体的一致性。2）标准加入法 优点：基体（matrix）相近，或者说基体干扰相同；缺点：麻烦，适于小数量的样品分析。3）内标法 同位素稀释质谱法（Isotope Dilution）:内标物是和分析物相同的化学物质，但在结构中至少有一个原子被其另一个同位素所取代。原子发射光谱法原子发射光谱法用的检测方法有：目视法、摄谱法和光电法。1. 目视法用眼睛来观测谱线强度的方法称为目视法（看谱法）。它仅适用于可见光

11、波段。常用仪器为看谱镜。看谱镜是一种小型的光谱仪，专门用于钢铁及有色金属的半定量分析。2. 摄谱法摄谱法是用感光板记录光谱。将光谱感光板置于摄谱仪焦面上，接受被分析试样的光谱作用而感光，再经过 显影、定影等过程后，制得光谱底片，其上有许多黑度不同的光谱线。然后用影谱仪观察谱线位置及大致强度，进行 光谱定性及半定量分析。用测微光度计测量谱线的黑度，进行光谱定量分析。3. 光电法：光电法用光电倍增管检测谱线强度。原子吸收与原子荧光光谱分析法1. 原子吸收光谱法定义：基于被测元素基态原子在蒸气状态对其原子共振辐射的吸收进行元素定量分析的方法。原子吸收光谱位于光谱的紫外区和可见区。原子吸收线轮廓以原子

12、吸收谱线的中心频率（或中心波长）和半宽度表征；I中心频率由原子能级决定；n半宽度是中心频率位置，吸收系数极大值一半处，谱线轮廓上两点之间频率或波长的距离。2. 谱线宽度.自然宽度自然变宽的半宽度 n=1/（2 n） c.多普勒变宽 由辐射原子无规则的热运动引起。又称热变宽。 .压力变宽（碰撞变宽）.自吸变宽 .场致变宽3. 石墨炉原子分析法 接触良好 惰性气体保护 通常使用的惰性气体主要是氯气。水冷保护4. （一）背景干扰 .分子吸收：指在原子化过程中生成的分子对辐射的吸收。带状光谱，会在一定的波长范围内形成干扰。 .光散射：指原子化过程中产生的微小的固体颗粒使光发生散射，造成透过光减小，吸收

13、值增加。（二）背景校正方法I邻近非共振线校正法：背景吸收是宽带吸收。本法适用于分析线附近背景吸收变化不大的情况，否则准确度较差。n连续光源背景校正法：原子吸收分光光度计上配有连续光源自动扣除背景。紫外区：觉灯：可见区：碘鸨灯、麻灯in Zeeman效应背景校正法：Zeeman效应 是指在磁场作用下简并的谱线发生分裂的现象。在正常Zeeman效应中，每条谱线分裂为三条分线；在反常Zeeman效应中，每条谱线分裂为三条分线或更多条分线，这是由谱线本身的性质所 决定的。是原子谱线分裂的普遍现象。5. 原子化条件（1）火焰原子化法（2） 石墨炉原子化法干燥：105 125C。灰化：能除去试样中基体与其

14、它组分而被测元素不损失的情况下，尽可能高的温度。原子化温度：可得到原子吸收最大吸光度值的最低温度。净化（清除阶段）：温度应高于原子化温度，时间仅为3 5s,以便消除试样的残留物产生的记忆效应。6. 原子荧光光谱法 共振荧光 气态自由原子吸收共振线被激发后，再发射出与原激发辐射波长相同的辐射。 非共振荧光 当荧光与激发光的波长不相同时，产生非共振荧光。（1）直跃线荧光 激发态原子跃迁回至高于基态的亚稳态时所发射的荧光（ Stokes荧光）（2）阶跃线荧光其荧光波长大于激发线波长（3）anti-Stokes荧光其荧光能大于激发能，荧光波长小于激发线波长。 敏化荧光受光激发的原子与另一种原子碰撞时，

15、把激发能传递给另一个原子使其激发，后者在以辐射形式去激发而发射荧光。荧光猝灭：受激原子和其他粒子碰撞，把一部分能量变成热运动与其他形式的能量，因而发生无辐射的去激发过程。荧 光猝灭会使荧光的量子效率降低，荧光强度减弱。可用氯气来稀释火焰，减小猝灭现象。 质谱法 质谱分析是将样品转化为运动的带电气态离子，于磁场中按质荷比（m/z）大小分离并记录的分析方法。1、进样2、离子化3、离子也可因撞击强烈而形成碎片离子4、 荷电离子被加速电压加速，产生一定的速度v,与质量、电荷及加速电压有关5、 加速离子进入一个强度为H的磁场，发生偏转气相源：先蒸发再激发，适于沸点低于500oC、对热稳定的样品的离子化，

16、包括电子轰击源、化学电离源、场电离源、火花源；解吸源：固态或液态样品不需要挥发而直接被转化为气相，适用于分子量高达105的非挥发性或热不稳定性样品的离子化。包括场解吸源、快原子轰击源、激光解吸源、离子喷雾源和热喷雾离子源等。硬源：离子化能量高，伴有化学键的断裂，谱图复杂，可得到分子官能团的信息； 软源：离子化能量低，产生的碎片少，谱图简单，可得到分子量信息。 紫外可见分光光度法1. 朗伯比耳定律的局限性 （1）比耳定律本身的局限性：1所有的吸光质点之间不发生相互作用.II比耳定律只适用于稀溶 液（0.01 mol/L） . （2）化学偏离：主要是指分析物质涉及到任何平衡反应时，如分析物质与溶剂

17、发生缔合、离解及溶剂化反应，产生的生成物与被分析物质具有不同的吸收光谱，出现化学偏离。（3）非均相体系偏离：溶液必须是均相体系。胶体、乳胶、悬浮物、沉淀等非均相体系产生的光散射（4）仪器偏离：生色团：广义地说，分子中可以吸收光子而产生电子跃迁的原子基团；严格地说，不饱和吸收中心。助色团：带有非键电子对的基团（如-OH、-OR、-NHR、-SK-Cl、-Br、-I等），它们本身不能吸收大于 200 nm的光，但是当它们与生色团相连时，会使其吸收带的最大吸收波长入max发生移动，并增加其吸收强度。红移和紫移：在有机化合物中，常常因取代基的变更或溶剂的改变，使其吸收带 的最大吸收波长 入max发生移

18、动。向长波方向移动称为红移；向短波方向移动称为紫移。增色效应和减色效应：由于 化合物的结构发生某些变化或外界因素的影响。使化合物的吸收强度增大的现象，叫增色效应；使吸收强度减小的现 象，叫做减色效应。2. 有机化合物的紫外可见光谱A.饱和烧及其取代衍生物饱和烧分子中只含 b键，只有bb*跃迁 饱和烧的取代衍生物的杂原子上存在 n电子，可以产生 nr *和*跃迁。B.不饱和烧及共轴烯烧 不饱和烧类分子中含有 b和兀键，可以产生*和兀“兀*跃迁。C.洗基化合物 洗基化合物含有C=O基团,可以产生n” a*, n”兀郴 兀兀* 三个吸收带。3. 溶剂对电子光谱的影响兀兀*跃迁谱带红移；n兀*跃迁谱带

19、紫移在选择测定电子吸收光谱曲线的溶剂时，注意：尽量选用低极性溶剂；能很好地溶解被测物，并且形成的溶液具有良好的化学和光化学稳定性；溶剂在样品的吸收光谱区无明显吸收。4. 光电倍增管优点：高灵敏度；响应快；适于弱光测定，甚至对单一光子均可响应。缺点：热发射强，因此暗电流大， 需冷却（-30oC）。不得置于强光（如日光）下，否则会永久损坏 PMT。硅二极管特点：灵敏度介于真空管和倍增管之间5. 分光光度计的类型 单光束分光光度计优点： 仪器简便、操作简单、成本低 缺点：要求光源和检测器有很高的稳定 性，定量分析结果误差较大 双光束分光光度计 双波长分光光度计 特点：可以测定高浓度试样，多组分混合试

20、样 以及浑浊试样。多道分光光度计6. 分析条件的选择 A.仪器测量条件 合适的吸光度范围（调节待测物浓度、选用适当厚度的吸收池等）。入射光波长和狭缝宽度。 B.反应条件的选择 显色剂用量；溶液酸度的选择；显色反应时间、温度等C.参比溶液的选择 溶剂参比；试剂参比；试样参比；平行操作溶液参比D.干扰及消除方法 控制酸度；掩蔽剂；选择适当分析波长；分离。电位分析法定义：利用电极电位与浓度的关系测定物质含量的电化学分析法。电位分析法分为直接电位法和电位滴定 法。电位分析法最显著特点是：仪器设备简单，操作简便，价格低廉。现已广泛普及应用。方法分类：1经典方法：按原理命名，划分为五大类：（1）电导分析（

21、G=1/R）, （2）电位分析（E=k+Slog。，（3）库分析（Q=nFM ）,（4）电解分析（就指电重量方法），（5）伏安和极谱法（i=kc）。2按激发信号分类：（1）电位激发（计 时电流，伏安和极谱，库仑），（2）电流激发（计时电位，恒流电解，库仑等），（3）滴定剂激发（滴定方法等）。3按电极反应本质分类（IUPAC推荐方法）。（1）既无双电层，也无电极反应。电导法，电导滴定法等。（2）有双电层无电极反应。微分电容，非法拉第法等。（3）有电极反应。A.电解电流=0 B.电解电流丰0极化电极与去极化电极电化学分析法中还把电极区分为极化电极和去极化电极，插入试液中的电极的电极电位完全随外加电

22、压改变或电极电位改变很大而产生的电流变化很小，这种电极称为极化电极；反之，电极电位不随外加电压改变，或电极电位改变很小而电流变化很大这种电极称为去极化电极。析出电位是指在工作电极上产生迅速的、连续不断的电极反应时，还原析出所需最正的电极电位；氧化析出所需最负 的电极电位。分解电压是指在工作电极上产生迅速的连续不断的电极反应时所需要的最小外加电压。E为正时，为自发电池，为负时，是电解池。自发电池：阴极一还原反应（右+）。阳极一氧化反应（左-）电解池：阴极一还原反应（右-）。阳极一氧化反应（左+）。 参比电极：（1）可逆性：有电流流过（A）时，反转变号时，电位基本上保持不变。（2）重现性：溶液的浓

23、度和温度改变时，按Nernst响应，无滞后现象。（3）稳定性：测量中电位保持恒定、并具有长的使用寿命。 电位滴定法：电位滴定的基本原理与普通容量分析相同，其区别在于确定终点的方法不同。它是以测量滴定过程中指 示电极的电极电位（或电池电动势）的变化为基础的一类滴定分析方法。滴定过程中，随着滴定剂的加入，发生化学反应，待测离子或与之有关的离子活度（浓度）发生变化，指示电极的电极电位（或电池电动势）也随着发生变化，在化学计量点附近，电位（或电动势）发生突 跃，由此确定滴定的终点。 电位滴定的类型及终点指示电极的选择：酸碱滴定：可以进行某些极弱酸（碱）的滴定。指示剂法滴定弱酸碱时，准确滴定的要求必需&

24、gt;10-8，而电位法只需> 10-10 ;电位法所用的指示电极为pH电极。氧化还原滴定：指示剂法准确滴定的要求是滴定反应中，氧化剂和还原剂的标准电位之差必需© o > 0.36V （n = 1），而电位法只需> 0.2V,应用范围广；电位法采用的指示电极一般采用零类电极（常用 Pt电极）。络合滴定：指示剂法准确滴定的要求是，滴 定反应生成络合物的稳定常数必需是>6,而电位法可用于稳定常数更小的络合物；电位法所用的指示电极一般有两种，一种是Pt电极或某种离子选择电极，另一种却是Hg电极（实际上就是第三类电极）。沉淀滴定：电位法应用比指示剂法广泛，尤其是某些在

25、指示剂滴定法中难找到指示剂或难以选择滴定的体系，电位法往往可以进行；电位法 所用的指示电极主要是离子选择电极，也可用银电极或汞电极。化学电池 是化学能与电能互相转换的装置.能自发地将化学能转变成电能的装置称为原电池；而需要从外部电源提供电能迫使电流通过，使电池内部发生电极反应的装置称为电解电池。为什么脉冲极谱灵敏度高？答：电解池总电流包括电解电流if、毛细管噪声电流iN和充电电流ic。它们分别按t-1/2、t-n和e-t/RC衰减，其中毛细管噪声介于电解电流和和充电电流之间。由于脉冲极谱中的脉冲持续时间为40-80ms,比方波极谱的要长。在脉冲后期测量电流时，此时的毛细管噪声电流iN和充电电流

26、ic几乎都衰减至0,测得的主要是电解电流，从而提高了脉冲极谱的灵敏度。 电解分析（electrolytic analysis）包括两种方法：一是利用外电源将被测溶液进行电解，使欲测物质能在电极上析出，然后 称析出物的重量，算出该物质在样品中的含量，这种方法称为电重量分析法（electrolytic gavimetry ）;二是使电解的物质由此得以分离，而称为电分离分析法（electrolytic separation）。库仑分析法（coulometry）是在电解分析法的基础上发展起来的一种分析方法。它不是通过称量电解析出物的重量，而 是通过测量被测物质在100%电流效率下电解所消耗的电量来进行

27、定量分析的方法，定量依据是法拉第定律。电重量分析法比较适合高含量物质测定，而库仑分析法即是用于痕量物质的分析，仍然具有很高的准确度。库仑分析法，与大 多数其它仪器分析方法不同，在定量分析时不需要基准物质和标准溶液，是电量对化学量的绝对分析方法。Faraday电解定律 W = MQ/Nf （W为物质在电极上析出的以克为单位的量；M为分子量，n为电子转移数,F为Faraday常数，1F=96485C; Q为电量，以C为单位）库仑滴定法：由恒电流发生器产生的恒电流通过电解池，被测物质直接在电极上反应或在电极附近由于电极反应产生一种能与被测物质起作用的试剂，当被测物质作用完毕后，由指示终点的仪器发出信

28、号，立即关掉计时器。由电解进行的时间t （S）和电流强度（A）,可求算出被测物质的量 W （g）。滴定终点的确定方法：（1）化学指示剂法这是指示终点的最简单的方法。此法可省去库仑滴定装置中的指示系统，比较简单。最常用的经典方法是淀粉作指示剂，电生碘滴定亚碑酸根的测定方法。指示剂方法，灵敏度较低，对于常 量的库仑滴定能得到满意的测定结果。选择指示剂应注意：所选的指示剂不能在电极上同时发生反应；指示剂与 电生滴定剂的反应，必须在被测物质与电生滴定剂的反应之后，即前者反应速度要比后者慢。（2）电流法这种方法的基本原理为被测物质或滴定剂在指示电极上进行反应所产生的电流与电活性物质的浓度成比例，终点可从

29、指示电流 的变化来确定。电流法可分为单指示电极电流法和双指示电极电流法。前者常称为极谱滴定法、后者又称为永停终点 法。色谱分析 调整保留时间tR = tR - tM 调整保留体积 V' R = Vr - Vm。相对保留值?2,1 = t R2/tR1分离因子0（ = t R2/t R1保留因子k = ns / nm峰面积的测量方法峰高乘半峰宽法 A = 1.065 h YT2峰高乘平均峰宽法 A = h （Y0.15+Y0.85）2氢火焰离子化检测器 是利用氢火焰作为电离源，使有机物电离，产生微电流而响应的质量型检测器，简称氢焰检测器。最常用的检测器之一。特点：1.几乎所有的有机物均有

30、响应 2.对烧类灵敏度高且与碳原子数成正比 （10-12 g/s）3.线性范 围宽、结构较简单、操作方便4.死体积几乎为零，可直接与毛细管柱相联 5.需要三种气源及流速控制系统。 破坏性（对 样品）电子俘获检测器（ECD是以63Ni或氤作放射源的浓度型离子化检测器。特点：1.灵敏度高：气相色谱检测器中灵敏度最高的一种（10-14 g/mL） 2.选择性高：只对具有电负性的化合物有响应（含卤素、硫、磷、氮、氧的物质）3.应用广泛：仅次于 TCD和FID 4.线性范围较小：102-104火焰光度检测器 （FPD区称硫磷检测器。它是利用富氢火焰使含硫、磷杂原子的有机物分解、发光建立起来的检测器。特点

31、：1.对含硫、磷的化合物有高灵敏度和高选择性。2.对硫为非线性响应。3.也可用于有机金属化合物和其它杂原子化合物。热离子化检测器 （氮磷检测器）是一种电离型检测器 （质量型）。特点：对氮磷化合物灵敏度高，选择性好。专用于痕量 氮磷化合物的检测。气相色谱与质谱联用（GC-MS）质谱法是灵敏度高、定性能力强的分析方法；色谱法是分离效率高、定量分析方便的分析方法。两者联用的优势：GC是MS的理想“进样器”。（试样经色谱分离后，以纯物质进入质谱）；MS是GC的理想“检测器”。（不仅灵敏度高，而且可提供定性结果）。固定液的要求：挥发性小，在操作温度下有较低蒸气压，以免流失。热稳定好，在操作温度下呈液态但

32、不发生分 解。对试样个组分有适当的溶解能力。具有高的选择性。化学稳定性好，不与被测物质起化学反应。“相似相溶”原则选择固定液 ：分离非极性物质：一般选用非极性固定液。分离极性物质：选用极性固定液。分离非 极性和极性混合物：一般选用极性固定液。分离能形成氢键的试样：一般选用极性或氢键型固定液。复杂的难分离物 质：可选择两种或两种以上的混合固定液。未知样品：用几种常用固定液试验。选择柱温的一般原则：在使最难分离的组分有尽可能好的分离，且保留时间适宜，峰形对称的前提下，采取适当低 的柱温。柱温不能高于固定液的最高使用温度。柱温要高于固定液的熔点。气相色谱流动相：对组分没有亲和力的惰性气体，对分离选择性几乎无影响。高效液相色谱流动相：可选用不同极性的液体。 选择余地大；对分离影响大（与组分或固定相均作用）。方法的局限性： 成本高、环境污染、梯度洗脱操作复杂。缺少灵敏度高的通用型检测器。复杂样品分离，缺少总理论塔板数达数十万 的色谱柱。压易分解或变性的生物样品。光电二极管阵列检测器：可获得三维色谱-光谱图的检测器；三维色谱 -光谱图：时间-波长-吸收值；波长范围：190 - 950nm；可同时获得不同波长条件下的色谱图；可利用色谱保留值及光谱特征吸收曲线定性；可判别色谱峰的纯度及