常用分子生物学技术及基因诊断练习题

1、常用分子生物学技术及基因诊断、治疗、选择题一A型题1 .印迹技术可以分为A .DNA 印迹 B . RNA 印迹C .蛋白质印迹D.斑点印迹E.以上都对2 .PCR实验延伸温度一般是A .90 CB . 72 CC . 80C D . 95 C E .60 C3 .Western blot中的探针是A .RNAB .单链 DNAC .cDNAD .抗体E .双链DNA4. Northern blotting 与 Southern blotting 不同的是A .根本原理不同B .无需进行限制性内切酶消化C .探针必须是 RNAD .探针必须是 DNA E .靠毛细作用进行转移5 .可以不经电泳

2、别离而直接点样在NC膜上进行杂交分析的是A .斑点印迹 B .原位杂交 C . RNA印迹 D . DNA芯片技术 E . DNA 印迹6 .以下哪种物质在 PCR反响中不能作为模板A . RNA B .单链 DNA C . cDNA D .蛋白质 E .双链 DNA7 . RT-PCR中不涉及的是A .探针 B . cDNA C .逆转录酶D . RNA E . dNTP8 .关于PCR的根本成分表达错误的选项是A .特异性引物 B .耐热性DNA聚合酶 C . dNTP D .含有Zn 2+的缓冲液E .模板9 . cDNA文库构建不需要A .提取 mRNA B .限制性内切酶裂解 mRN

3、A C .逆转录合成 cDNAD .将cDNA克隆入质粒或噬菌体E .重组载体转化宿主细胞10 .目前主要克隆的致病基因是A .糖尿病致病基因B .恶性肿瘤致病基因C .单基因致病基因D .多基因致病基因E .高血压致病基因11 .目前基因治疗中选用最多的基因载体是A .噬菌体 B .脂质体 C .逆转录病毒D .腺病毒相关病毒 E .腺病毒12 目前基因治疗多采用的方法是A 基因增补 B 基因置换 C 基因矫正 D 基因灭活 E 基因疫苗二B型题A Southern blottingB . Northern blottingC Western blottingD . dot blotting

4、 E . in situ hybridization1 不需要电泳、转膜等程序2 电泳前不需进行限制性内切酶消化3 .靠电转移完成生物大分子的转移4 .直接在组织切片或细胞涂片上进行杂交A .逆转录 PCR B .原位 PCR C .实时 PCR D .多重 PCR E . RFLP5 .将目的基因扩增与定位相结合6. 能动态检测反响过程中的产物量7 .将RNA的逆转录和 PCR反响联合应用的一项技术8 .在同一反响中采取多对引物A .基因疫苗 B .基因矫正 C .基因置换 D .基因增补 E .基因失活9 .目前基因治疗采用最多的方法是10 .将致病基因的异常碱基进行修正的基因治疗方法是1

5、1 .将正常基因经体内基因同源重组原位替换致病基因的基因治疗方法是12 .利用特定的反义核酸阻断变异基因异常表达的基因治疗方法是三X型题1 .核酸探针可以是A .人工合成寡核苷酸片段B .基因组 DNA片段 C . RNA片段D . cDNA全长或局部片段E .核苷酸2 .核酸分子杂交可以形成的杂化双链有A . DNA/DNA B . RNA/RNA C . DNA/RNA D .寡核苷酸 /RNAE .寡核苷酸 /DNA3 . PCR技术主要用于A .目的基因的克隆 B .基因的体外突变 C . DNA和RNA的微量分析 D . DNA序列测定E .基因突变分析4 .基因组 DNA文库建立需

6、要C .重组体感染宿主菌D .筛选目的基因可以通过核酸分子杂交的方法进行E .以入噬菌体为载体的人基因组DNA文库的克隆数目至少应在10 6以上5 .用于构建基因组 DNA文库的载体有A .酵母人工染色体B .粘粒 C .入噬菌体 D .腺病毒 E .脂质体6 .基因诊断较常规诊断其特点有A .属于病因诊断B .特异性强 C .适用范围窄D .灵敏度高 E .有放大效应7 .基因失活的常用技术包括A .基因疫苗B .核酶 C .小干扰 RNA D .反义核酸E .基因置换&克隆羊多莉的产生属于A .同种异体细胞转移技术B .同种异体细胞核转移技术C .试管内受精D .无性繁殖E .同种

7、异体细胞转基因技术9 .基因治疗的根本程序包括A .治疗性基因的选择B .基因载体的选择C .靶细胞的选择D .基因转移E .回输体内10 .目前可用作基因治疗的基因载体包括A .腺病毒相关病毒 B .噬菌体 C .腺病毒 D .逆转录病毒 E .粘粒二、是非题1 . Southern blot主要用于 RNA的定性和定量分析。2 .蛋白质印迹分析技术中蛋白质的转移，可以用电转移，也可以靠毛细作用转移。3 .实时PCR技术与普通 PCR技术相比，它可以动态监测反响过程中产物的量。4 .生物芯片可以是 DNA芯片、cDNA芯片或蛋白质芯片。5 .基因矫正是用正常的基因通过体内基因同源重组，替换致

8、病基因来到达治疗目的。6 .目前基因治疗多采用基因增补的方式。7 . RNA印迹技术中， RNA分子在转移前需进行限制性内切酶切割。8 . PCR反响中变性主要是使模板DNA完全变性为单链。9 .实时PCR技术中，TaqDNA聚合酶在链延伸过程中遇到荧光探针，可发挥3 '5核酸外切酶活性。10 .内源基因结构突变发生在生殖细胞可引起恶性肿瘤。三、填空题1 .分子杂交是利用DNA和这一根本性质来进行DNA或RNA定性、定量分析的。2 在印迹技术中，将 DNA片段在琼脂糖凝胶中 使其成为 _，利用_ 使胶中的生物大分子转移到 膜上，使之成为固相化分子。3 .印迹技术的根本流程依次为 、 和

9、 。4 . Southern blotting主要用于 定性和定量分析，亦可用于 和 的分析。5 .Northern blotting主要用于检测 的表达水平，敏感性较PCR，但其 具有和的优点。6 . Western blotting主要用于检测样品中的存在、细胞中以及 的相互作用研究等。7 . PCR的根本反响步骤包括、。12 目前克隆致病相关基因主要有和两大策略。13 .根据受体细胞的类型不同，基因治疗分为的基因治疗和 的基因治疗两大类。14 .目前使用的基因载体有 和 两大类。15 在人类基因治疗实施中，导入基因的方式有和两大类。四、名词解释1 . probe2 . blotti ng

10、 tech nologe3 . gene libary4 . gene chip5 . gene therapy6 . gene diag no sis7 . gene in activati on8 . gene replaceme nt9 . gene augme ntati on10. PCR五、问答题1 .简述印迹技术的分类及应用。2. 简述PCR技术的根本原理。3. 简述逆转录 PCR、原位 PCR和实时PCR技术的根本原理和主要区别。4. 简述基因诊断的概念及特点。5何为基因治疗，目前基因治疗有哪些根本策略？6试述基因治疗的根本程序。7. 欲生产一种药用多肽，科学家已经将此多肽的基

11、因与某真核表达质粒重组在一起。请你设计一个实验，利用PCR方法鉴定此重组表达质粒是否含有这一多肽的基因。8请为某一单基因遗传病低表达或不表达的患者设计一个基因治疗方案。参考答案一、选择题一A型题1.E2.B3.D4.B5.A6.D7.A8.D9.B10.C /11.D ,12.A12 . E二B型题1 .D 2.B 3 . C 4.E 5.B 6.C 7 . A 8 . D 9.D 10.B 11 . C三X型题1 .ABCD2 . ABCDE3 . ABCDE 4 . ABCDE5 . ABC 6 . ABDE7 .BCDE8 . BD 9.ABCD10 . ACD、是非题1 .X 2 .X

12、 3 .V 4.V 5 . X .6. V 7. X8. V 9. X 10. X三、填空题1 .变性复性2 .变性单链毛细作用 NC3 电泳 转移 杂交 放射自显影或化学显色4 . DNA重组质粒噬菌体5 . mRNA差特异性强假阳性率低6 特异性蛋白质的存在 特异性蛋白质的半定量分析蛋白质分子7 .变性退火延伸&功能克隆定位克隆9.体细胞生殖细胞 10病毒载体非病毒载体四、名词解释1 .探针，是指带有特殊可检测标记(放射性核素或其它化合物标记)的核酸片段，它具有特定的序列，能够与待测的核酸片断互补结合，因此可用于检测核酸样品中特定的基因。2 .印迹技术，是指将在凝胶中别离的生物大分

13、子转移或直接放在固定化介质上并加以检测分析的技术。它包括 DNA印迹技术、 RNA印迹技术和蛋白质印迹技术等。3 .基因文库，是指一个包含了某一生物体全部DNA序列的克隆群体。基因文库可以分为基因组 DNA文库和cDNA文库。4 .基因芯片，又称DNA微阵列，包括 DNA 芯片(DNA chip)和cDNA芯片(cDNAchip)，是指将许多特定的 DNA片段或cDNA片段作为探针，有规律地紧密排列固定 于支持物上，然后与待测的荧光标记样品进行杂交，杂交后用荧光检测系统等对芯片进 行扫描，通过计算机系统对每一位点的荧光信号做出检测、比拟和分析，从而迅速得出 定性和定量的结果。5基因诊断，是指利

14、用现代分子生物学和分子遗传学的技术和方法，直接检测基因结构及 其表达水平是否正常，从而对疾病作出诊断的方法。6基因治疗，从广义上讲，是指将某种遗传物质转移到患者细胞内，使其在体内发挥作用，以到达治疗疾病目的的方法。7.基因失活，是指将特定的序列导入细胞后，在转录或翻译水平阻断某些基因的异常表达，已到达治疗疾病的目的。&基因置换，是指用正常的基因通过体内基因同源重组，原位替换致病基因，使细胞内的DNA完全恢复正常状态。9.基因增补，是指将目的基因导入病变细胞或其它细胞，不去除异常基因，而通过目的基因的非定点整合，使其表达产物弥补缺陷基因的功能或使原有的功能增强。10聚合酶链反响，指以 D

15、NA分子为模板，以一对与模板序列相互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶的作用下，完成新的DNA的合成，重复这一过程使目的DNA片段得到扩增。这一技术可以将微量目的DNA片段扩增一百万倍以上。五、问答题1 简述印迹技术的分类及应用。答：印记技术是指将在凝胶中别离的生物大分子转移或直接放在固定化介质上并加以检测分析的技术。它主要包括 DNA印迹技术 (Southern blot)、RNA印迹技术 (Northern blot)和 蛋白质印迹技术 (Western blot)等。DNA印迹技术主要用于基因组DNA的定性和定量分析， 例如对基因组中特异基因的定位 及检测等，此外亦可用于分析重组质粒

16、和噬菌体。RNA印迹技术主要用于检测某一组织或细胞中的特异mRNA的表达水平，也可以比较不同组织和细胞中的同一基因的表达情况。蛋白质印迹技术，也叫免疫印迹，用于检测样品中特异性蛋白质的存在、细胞中特异蛋白质的半定量分析以及蛋白质分子的相互作用研究等。2 简述PCR技术的根本原理及应用。答：PCR技术类似于 DNA的体内复制。以 DNA分子为模板，以一对与模板序列互补 的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶作用下，利用4种脱氧核苷酸，完成新的 DNA的 合成，重复这一过程使目的DNA片段得到扩增。这一技术可以将微量目的DNA片段扩增100万倍以上。根本步骤是首先待扩增DNA?模板加热变性解链，随之

17、将反响混合物冷却至某一温度，这一温度可使引物与它的靶序列发生退火，再将温度升高使退火引物在DNA聚合酶作用下得以延伸。这种变性-复性-延伸的过程就是一个 PCR循环，PCR就是在适宜条件下的这种循环的不断重复。主要用于目的基因的克隆、基因的体外突变、DNA和RNA的的微量分析、DNA序列测定和基因突变分析等。3简述逆转录 PCR、原位PCR和实时PCR技术的根本原理和主要区别。答：逆转录 PCR是将RNA的逆转录和 PCR反响联合应用的一种技术。即首先以RNA为模板，在逆转录酶的作用下合成cDNA，再以后者为模板通过PCR反响来扩增目的基因。原位PCR是在固定液固定、石蜡包埋的组织切片或细胞涂

18、片上的单个细胞内进行的PCR反响，然后用特异性探针进行原位杂交，即可检出待测DNA或RNA是否在该组织或细胞中存在。实时PCR的根本原理是引入了荧光标记分子，并使荧光信号强度与PCR产物量成正比，对每一反响时刻的荧光信号进行实时分析，计算出PCR产物量。根据动态变化数据，可以精确计算出样品中最初的含量差异。逆转录PCR与传统PCR相比，将 RNA的逆转录和 PCR反响联合起来，可以对序 列的RNA进行定性及半定量分析。常规PCR或RT-PCR技术的产物不能在组织细胞中定位原位，因而不能与特定的组织细胞特征表型相联系，原位PCR技术可以将目的基因的扩增与定位相结合。实时PCR技术与传统 PCR反

19、响相比，在常规正向和反向引物之间，增加了一特殊引物作为探针。该技术可以通过动态监测反响过程中的产物量，消除了产物堆积对定量分析的干扰。4简述基因诊断的概念及特点。答：基因诊断是指利用现代分子生物学和分子遗传学的技术和方法，直接检测基因结构及其表达水平是否正常，从而对疾病作出诊断的方法。基因诊断与其他诊断方法相比，基因诊断的方法特点是：(1 )针对性强，以基因作为检查材料和探察目标，属于“病因诊断。(2 )特异性强，用分子杂交技术选用特定基因序列作为探针，故有很高的特异性。(3 )灵敏度高，所用技术具有放大效应，故诊断灵敏度高(4 )适用性强，诊断范围广。5何为基因治疗，目前基因治疗有哪些根本策

20、略？答：从广义上讲，是指将某种遗传物质转移到患者细胞内，使其在体内发挥作用，以到达治疗疾病目的的方法，均谓之基因治疗。(1) 缺陷基因精确的原位修复包括对致病基因的突变碱基进行矫正的基因矫正和用正常基因通过重组原位替换致病基因的基因置换。这两种方法是对缺陷基因精确的原位修复，不涉及基因组的任何改变，是最为理想的治疗方法，但技术上目前尚未突破。(2) 基因增补 是指将目的基因导入病变细胞或其它细胞，不去除异常基因，而通过目的基因的非定点整合，使其表达产物弥补缺陷基因的功能或使原有的功能增强。目前基因治疗多采用此法。(3) 基因失活是指将特定的序列导入细胞后，在转录或翻译水平阻断某些基因的异常表达，已到达治疗疾病的目的。(4) 基因疫苗 主要是指 DNA疫苗，是第三代疫苗。其将编码外源性抗原的基因插入到真核表达质粒中，直接导入人体内，抗原基因在一定时间内持续表达，不断刺激机体免疫系统，到达治病或防病目的。6试述基因治疗的根本程序。答：根本程序如下：(1) 治疗性基因选择 选择对疾病有治疗作用的特定目的基因。(2) 基因载体的选择 有病毒载体和非病毒载体，常用的是病毒载体。靶细胞的选择基因治疗根据受体细胞种类的不同分为体细胞和生殖细胞的基因治疗，目前进行的基因治疗均