病毒转基因技术原理概述实用教案

1、问题问题(wnt)l社会公众对健康需求的增加l生命科学和医学研究的推动l对转基因技术的安全(nqun)和伦理关注持续增加。第1页/共22页第一页，共23页。课程内容课程内容l分为理论课与实践课l转基因技术概述l病毒转基因技术原理、纯化制备技术和医学应用(yngyng)l生物安全l医学伦理问题l表达外源基因的复制缺陷型重组腺病毒的构建和鉴定DNA病毒(bngd)RNA病毒(bngd)杂合病毒(bngd)第2页/共22页第二页，共23页。第一章第一章 转基因技术转基因技术(jsh)概述概述 范雄林范雄林86-27-83650639华中科技大学同济华中科技大学同济(tn j)医学院病原生医学院病原生

2、物学系物学系研究生高水平课程(kchng)病毒转基因技术原理第3页/共22页第三页，共23页。主要主要(zhyo)内容内容l基因转移方式基因转移方式l真核细胞的转基因技术真核细胞的转基因技术l外源基因表达读框的构建外源基因表达读框的构建(u jin)(u jin)原理原理 第4页/共22页第四页，共23页。1. 定定 义义l基因转移（基因转移（gene transfergene transfer）: :l 自然发生自然发生l转基因技术转基因技术(jsh)(transgene technology): (jsh)(transgene technology): l 人工利用人工利用第5页/共22页

3、第五页，共23页。2. 常见常见(chn jin)的基的基因转移方式因转移方式l转化转化(zhunhu)(transformation)(zhunhu)(transformation)l转导转导(transduction )(transduction )l转染转染 (transfection) (transfection)现象现象(xinxing)定义定义分类分类用途用途第6页/共22页第六页，共23页。l转化转化 （transformation transformation ）l现象现象: : 肺炎链球菌的转化试验肺炎链球菌的转化试验l定义定义: :l分类和应用分类和应用: :自然转化自然转

4、化: :感受态感受态, ,宿主宿主(szh)(szh)菌种类菌种类l 人工转化人工转化: : 低温低温CaCl2CaCl2、电穿孔、电穿孔第7页/共22页第七页，共23页。小鼠的肺炎小鼠的肺炎(fiyn)链球菌的转化试验链球菌的转化试验第8页/共22页第八页，共23页。l转导转导(transduction )(transduction )l现象现象:“U”:“U”型管实验型管实验(shyn) (shyn) l定义定义: :l分类和应用分类和应用: :普遍性转导普遍性转导l 局限性转导局限性转导第9页/共22页第九页，共23页。局限性转导局限性转导(zhun do)第10页/共22页第十页，共2

5、3页。l转染转染 (transfection) (transfection)l现象现象(xinxing): (xinxing): 感染感染(infection)(infection)、病毒感染、病毒感染l定义定义: : 广义和狭义广义和狭义l分类和应用分类和应用: :物理化学方法物理化学方法l 生物学方法生物学方法( (病毒载体病毒载体) )第11页/共22页第十一页，共23页。 野生型病毒的自然感染野生型病毒的自然感染(gnrn)、病毒载体转染和质粒经化学法介导的转染、病毒载体转染和质粒经化学法介导的转染第12页/共22页第十二页，共23页。3. 基因基因(jyn)转移入真核细胞的方转移入真

6、核细胞的方法法l基因转移入真核细胞的影响基因转移入真核细胞的影响(yngxing)(yngxing)因素因素 l外源基因转移入真核细胞的类型和外源基因转移入真核细胞的类型和方法方法 l构建外源基因的基本要素构建外源基因的基本要素 第13页/共22页第十三页，共23页。转移入原核细胞的影响因素:限制-修饰系统质粒宿主范围和相容性同源(tn yun)重组与非同源(tn yun)重组l基因转移基因转移(zhuny)(zhuny)入真核细胞的影响入真核细胞的影响因素因素 真核与原核细胞具有显著区别;外源基因(jyn)要进入真核细胞，要突破三大障碍; 理想的转基因(jyn)技术方法第14页/共22页第十

7、四页，共23页。质粒型载体(zit):物理方法化学方法l外源基因转移入真核细胞的类型外源基因转移入真核细胞的类型(lixng)(lixng)和和方法方法l传统的针头注射l显微(xin wi)注射l粒子轰击l电穿孔l流体动力学l包裹微球l超声l磷酸钙法l脂质体法lDEAE-Dxtran法第15页/共22页第十五页，共23页。常用的物理常用的物理(wl)(wl)方法介导基因转移方法介导基因转移第16页/共22页第十六页，共23页。l外源基因转移入真核细胞的类型外源基因转移入真核细胞的类型(lixng)(lixng)和方法和方法病毒颗粒型载体(病毒介导的转基因技术(jsh) 假型病毒载体（复制缺陷性

8、病毒载体）：具有感染性重组型病毒载体：具有感染性lDNA病毒(bngd)载体：AdV, AAV,HSV-1,etc.lRNA病毒(bngd)载体: HIV, etc.l杂合型病毒(bngd)载体 第17页/共22页第十七页，共23页。第18页/共22页第十八页，共23页。不同类型转基因技术方法不同类型转基因技术方法(fngf)(fngf)的优缺点比较的优缺点比较第19页/共22页第十九页，共23页。l构建构建(u jin)(u jin)外源基因的基本要素外源基因的基本要素 u转录(zhun l)控制元件u翻译控制元件u病毒复制包装信号 第20页/共22页第二十页，共23页。复习复习(fx)(fx)思考题思考题l 影响外源基因进入(jnr)真核细胞的因素。l 物理、化学和病毒载体转基因技术的优缺点比较。l 不同病毒载体转基因技术的优缺点比较。l 外源基因表达读框的构建原理。 第21页/共22页第二十一页，共23页。感谢您的观看(gunkn)！第22页/共22页第二十二页，共23页。NoImage内容(nirng)总结问题。病毒转基因技术原理、纯化制备技术和医学应用。表达外源基因的复制缺陷型重组(zhn z)腺病毒的构建和鉴定。第一章 转基因技术概述。86-27-83650639。1. 定 义。转化 （transfo