蛋白质的等电点测定与沉淀试验

1、实验项目一、蛋白质的等电点测定及沉淀反应姓 名： 指导教师： 实验室： 组员：成绩： 第三部分：实验记录与分析实验现象记录及分析：（一）蛋白质等电点测定管号pH值混浊度解释现象15.9未达到蛋白质的等电点，蛋白质颗粒上正 负电荷过少。25.5+接近蛋白质的等电点，蛋白质颗粒上正电荷不多，沉淀减少。34.7+达到蛋白质的等电点，蛋白质颗粒上正负 电荷的数目相等蛋白质颗粒因失去电荷和 脱水而沉淀。43.5+大于蛋白质的等电点，蛋白质颗粒上正电荷大于负电荷，产生较少沉淀。（二）蛋白质的盐析1蛋白质的盐析现象解释蛋白质溶液中加硫酸铵溶液有沉淀产生无机盐（硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等）的浓溶液能析出蛋白质。

2、盐的浓度不同，析出的蛋白质也不同。沉淀中加水沉淀溶解由盐析获得的蛋白质沉淀，当降低 其盐类浓度时，又能再溶解，蛋白 质的盐析作用是可逆的。上清液中加硫酸铵粉末有沉淀产生硫酸铵粉末是强电解质，引起蛋白质胶体的凝聚沉淀。沉淀中加水沉淀不溶解此时蛋白质分子内部结构发生重 大改变，蛋白质常变性而沉淀，不 再溶于水。2.重金属离子沉淀蛋白质现象解释蛋白质溶液中加硝酸银有沉淀产生重金属离子与蛋白质结合成不溶 于水的复合物。沉淀中加水沉淀不溶解此时蛋白质分子内部结构发生重 大改变，蛋白质常变性而沉淀，不 再溶于水。3.有机酸沉淀蛋白质现象解释蛋白质溶液中加三氯乙酸有沉淀产生有机酸使蛋白质变性而沉淀。沉淀中加

3、水沉淀不溶解此时蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质常变性而沉淀，不再溶于水。4.有机溶剂沉淀蛋白质现象解释有沉淀产生此时蛋白质分子内部结构发生重大改变， 蛋白质常变性而沉淀。5.乙醇引起的变性与沉淀管号操作现象解释1振荡混匀有沉淀产生乙醇能析出蛋白质。加数滴盐酸沉淀溶解此时蛋白质分子的结构尚未 发生显者变化，除去引起沉淀 的因素后，蛋白质仍能溶解于 水，并保持其天然性质而不变 性。2振荡混匀没有明显现象溶液呈碱性，偏离等电点。醋酸中和有沉淀产生，溶液变为黄色醋酸与氢氧化钠反应，生成醋酸钠，达到等电点，甲基红使溶液呈黄色加数滴盐酸沉淀溶解，溶液颜色变浅盐酸中和氢氧化钠，使溶液呈 中性。3振荡

4、混匀没有明显现象溶液呈酸性，未达到等电点。碳酸钠中和有沉淀产生，溶液变为红色蛋白质与溶液中的离子反应 产生沉淀，溶液呈酸性所以显 红色。加数滴盐酸沉淀溶解，溶液颜色变浅未达到蛋白质的等电点，沉淀 溶解。第四部分：课后研讨题1. 通过本次合作实验后，有否对该项目改进的合理建议 适当增加对照组和空白组，使实验数据更加科学可信。2. 鸡蛋清为何可做铅、汞中毒的解素剂？铅、汞是重金属离子，与蛋白质结合能使蛋白质分子内部结构发生重 大改变，发生变性而沉淀，不再溶于原来的溶剂中。3. 氯化汞为何能做为杀菌剂？细菌由蛋白质构成，氧化汞是重金属盐，与蛋白质结合能使蛋白质分 子内部结构发生重大改变，发生变性而沉

5、淀，不再溶于原来的溶剂中。4. 在等电点时，蛋白质溶液为什么容易发生沉淀？蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，在水溶液中的蛋白质分子由于表 面生产水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因 素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。5. 将本实验中所涉及到的几种蛋白质沉淀方法各举一应用实例加以 说明。（1）盐析：硫酸铵的浓溶液能析出蛋白质。（2）乙醇引起的变性与沉淀：低温下用乙醇或丙酮短时间作用于蛋 白质，用于提纯蛋白质。（ 3）重金属离子沉淀蛋白质：取一支离心管，加入 2ml 的蛋白质溶 液，再加入 3%硝酸银溶液 1-2 滴，振荡试管，观察现象。（4）某些有机酸沉淀蛋白质： 取一支离心管， 加入 2ml 蛋白质溶液， 再加入 1ml 5%三氯乙酸溶液，振荡试管，观察现象。（5）有机溶剂沉淀蛋