田基黄对内毒素血症引起的肝损伤的防治作用

1、田基黄对内毒素血症引起的肝损伤的防治作用郑竹美1叶青1邵文霞2陈学军1(通讯作者)潘岩享1(1浙江大学医学院附属儿童医院检验科 浙江杭州310003; 2杭州市第一人 民医院检验科310006)【摘要】目的探讨田基黄对内毒素血症引起的肝损伤的防治作用。方法 对 wister大鼠用不同剂量的田基黄水煎剂和联苯双酯进行灌胃，1次/d,连续7 d。 于最后一次给药1小时后，尾静脉注射内毒素(lps) 5mg/kgo 1次/d,连续7d。 于最后一次给药1小时后，空白组尾静脉注射牛理盐水，余各组尾静脉注射lps 5mg/kgo最后用药24小时后取材观察肝组织病理学变化和牛化指标变化。结 果出基黄能减轻

2、lps引起肝组织病理损伤并能明显抑制lps引起的小鼠血清alt 活性的升高，抑制no, tnf-α和il-6的过量分泌。结论田基黄对内毒素 引起的肝损伤有显著的防治作用。【关键词】田基黄内毒素肝损伤【中图分类号】r965【文献标识码1a【文章编号】2095-1752 (2013) 09-0038-02出基黄原名地耳草，系藤黄科金丝桃属植物地耳草的干燥全草，含有黄 酮类、内酯类、色原烯类、缩二氨酸衍牛物、咕吨酮类、间环己三醇衍牛物等化 合物，具有抑菌、抗病毒、抑制癌细胞、增强免疫、抗氧化、保肝护肝等多种药 理学功效，但其对内毒素性肝损伤的保护和治疗机制尚未阐明。木课题采用大鼠

3、 尾静脉注射内毒素诱导建立起急性肝损伤的大鼠模型，运用免疫学和病理学技术 研究和监测大鼠模型中血清丙氨酸氨基转移酶(alt)的水平，肝组织内抗炎症 介质的和致炎症介质的释放，探讨出基黄在内毒素引起的肝损伤的防治方面的价 值。1材料1.1动物 wistar大鼠，spf级，质量200±20g 120只，雌雄各 半，由浙江中医药大学动物实验中心提供。1.2药物田基黄用冷水浸泡，煎煮2次，过滤，合并滤液，浓缩成含 药2g/ml的水煎液，用前配成0.5、1.0、20g/ml溶液;将联苯双酯(bpd)滴 丸配制成20 mg/ml的溶液。1.3试剂田基黄购自杭州胡庆余堂国药号，并经鉴定

4、为藤黄科植物田 基黄的全草；生理盐水注射液，杭州民生药业集团有限公司产品，批号110103a07； ast, alt, no测试药盒，南京建成生物工程研究所产品；tnf-α. il6试 剂盒，解放军总医院科技开发中心放免所产品。1.4仪器lxj2b低速大容量离心机、ddl5低速冷冻离心札 上海安亭 科学仪器厂产品；hh.w21>600电热恒温水浴箱，上海医疗器械厂产品； ab204-n电子天平，梅特勒公司产品；bt224半自动生化分析仪，意大利仪器； fj-2008ps g放射免疫计数器，西安核仪器厂产品；bh-2系统显微镜，olympus 公司产品。2方法2

5、.1建模 田基黄用冷水浸泡，煎煮2次，过滤，合并滤液，浓缩成 含药2g/ml的水煎液，用前配成0.5、1.0. 2.0g/ml溶液，各以低、中、高剂量 标之;将联苯双酯(bpd)滴丸配制成20 mg/ml的溶液分别给lps+田基黄各组 和西药对照组灌胃，1次/氏连续7d。于最后一次给药1小吋后，空白组尾静脉 注射生理盐水，余各组尾静脉注射lps5mg/kgo2.2动物分组和给药 选择健康大鼠，质量200±20g 120只，随 机分成6组，每组20只，雌雄各半：内毒素血症(lps)组、生理盐水对照组、lps+ 低剂量田基黄组、lps+中剂量田基黄组、lps+高剂量田基黄组和

6、西药对照组。2.3检测指标与方法：最后用药24后，用2%戊巴比妥钠腹腔注射麻 醉，经下腔静脉采血；剖开腹腔，暴露肝脏，剪取小块右叶中央部位肝脏组织， 约0.5cm x0.5 cm x0.5cm,迅速投入10%福尔马林溶液中固定。获得的样本分别 进行如下的观察：各指标分别按相关的试剂盒操作说明书进行。常规切片， he染色，光镜下作组织病理学检查。2.4统计学方法实验数据均以均数&plusrrm;标准差(x±s)表示， 组间比较采用t检验。3结果3.1各组大鼠一般情况正常对照组大鼠处死前全部存活，精神饮食、 活动均正常。lps组大鼠处死前大鼠出现精神萎靡，进食减少和反

7、应迟钝。联苯 双酯组和田基黄组人鼠一般状态较好，人便偏稀，未出现死亡及中毒性鼓肠发生。3.2血清肝功能的变化 与正常对照组相比，lps模型组小鼠血清转氨 酶明显升高(p<005)；联苯双酯组和田基黄组可显著降低lps肝损伤小鼠血中 alt水平(p<0.05)；低中剂量田基黄组与联苯双酯对照组结果相似(p>0.05), 高剂量田基黄组疗效最好。见表3.3肝组织病理学检查各组小鼠于肝大叶相同部位取材，10%福尔马 林溶液固定，石蜡包埋、切片，he染色，光镜下观察。正常对照组犬鼠肝细胞 排列整齐，肝窦结构清楚；lps模型组以脂肪变性为主，可见肝细胞灶性坏死及

8、 带状坏死，肝窦结构被破坏，汇管区炎细胞浸润。联苯双酯组肝细胞脂肪变性减 轻，可见灶状坏死，汇管区少量炎细胞浸润。田基黄组呈脂肪变性的肝细胞少见， 偶有点状坏死，无明显的炎细胞浸润。3.4血清中no,tnfα, il6含量的变化lps模型组小鼠血清中 no?tnf-α, il-6含量明显高于正常对照组，提示肝脏受损伤吋可导致血清 nojnf-α, il6含量增高。田基黄高剂量组对lps所致的tnf-α的升 高具有明显降低作用(与lps模型组比较，p<0.05)；而中、低剂量也有一定的 降低作用趋势，但

9、没有显著性意义(与lps模型组比较，p>0.05)o田基黄低、 中、高不同剂量对lps所致il-6的升高具有显著的降低作用(与lps模型组比较， p<0.05)o中剂量田基黄组与联苯双酯对照组降il-6和tnf-α的效果相似 (p>0.05)。中剂量田基黄组降il6的疗效最显著，高剂量田基黄组降 tnf-α的疗效最显著。田基黄中、高剂量具有显著的降no的作用(与lps 模型组比较,p<0.05)。联苯双酯降no的功效与田基黄中剂量组相似(p>0.05)o表.各组小鼠中ali；tnf-&

10、amp;alpha;jl-6和no含量的比较。(？?士 s )注：*与正常对照组比较,p⁢ 0.05； 与模型组比较，p<005； 与联苯双酯组比较，p>0.054讨论据文献报道：欧洲每年约有3/1 000的人患脓毒血症，其中约13.5万人 因此而死亡2。虽然人们使用了各类广谱、高效的抗生素，但是脓毒血症的死 亡率仍居高不下。究其原因人们发现：各类有效抗生素在杀灭革兰阴性细菌的同 时，也释放出一定数量的内毒素，从而加重机体内毒素血症。内毒素血症可引起 如生物体的发热反应、使血管活性物质释放而导致微循环障碍等一系列病理生理 改变。同时，可引起白细胞和血小

11、板减少，产生岀血倾向，还可直接或间接损害 肝脏和引起糖代谢紊乱及酶学、蛋白质代谢的改变。内毒素血症进一步发展可能 引起脓毒性休克、弥散性血管内凝血、急性呼吸窘迫综合征(sars)、全身炎症反 应综合征rs)或多器官功能衰竭(mods)的发生而导致死亡。内毒素的本质是革兰阴性细菌细胞壁上的脂多糖(lipopolysacchar ide, lps)成分，细菌裂解或黏附在其他细胞上吋lps被释放出来。肝脏既是清除内毒 素的场所，同时又是内毒素血症过程中最易受损的器官之一。lps通过 lps-lbp-scd14三联复合物作用于肝脏kupffer细胞的tlr并激活myd88,活化的 myd88可结合ir

12、ak和irak2,然后作用于肿瘤坏死因子受体相关因子仃raf6), 进一步激活mapk和nf-kb信号转导通路，引起核转录因子kb(nfkb)、p38、erk 活化，启动基因转录，表达和释放多种炎症前细胞因子(proinflammatory cytokines)x 趋化因子(chemokines)、生长因子(growth factors)和其他多种因子如白细胞介素 (interleukin, il) 肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, tnf)等，引起内毒素性休 克、全身炎症反应综合征和多器官功能衰竭等疾病。tnf-α与il-6是介导组 织器官损害的

13、两个最重要促炎因子。有研究认为，炎症的发生、发展过程中， tnf-α是始动因素，而tnfα在体内也能诱导肝细胞合成il6,参与 了肝炎的发病机制4。过量的no本身可作为自由基或通过与自由基反应生成毒 性更强的自由基等造成肝损伤，表现为细胞毒作用。已有大量的研究表明no,tnf-α和il6在多种原因引起的肝损伤中起重要作用，因此抑制no, tnf-α和il-6的过量产生在肝损伤的防治过程中有重要的意义。田基黄含黄酮类、内酯(香豆精)、蘇质、蔥醍、氨基酸、酚类。田基黄 通过抗菌消炎，活血化瘀，疏通肝脏微循环，增加肝脏的

14、代谢速率，清除有害物 质，减轻肝细胞的变性、坏死，并有利于受损肝细胞的再生与修复。实验研究结 果表明，田基黄能明显抑制lps引起的小鼠血清alt活性的升高，抑制no, tnf-α和il-6的过量分泌，抑制no的细胞毒作用，并对细胞因子介导的免 疫性炎症反应性损伤具有保护作用，可保护和修复肝细胞病理学损伤，从而保护 肝脏的结构和功能。这些可能是田基黄对lps所致肝组织损伤具有防治作用的部 分药理作用机制。本实验在田基黄保肝、抗肝炎作用过程中，为临床应用提供相 关实验理论依据。参考文献.蒋旭宏,黄小民内毒素性急性肝损伤实验动物模型的建立和检测指标j中 国中医急症,2009,18(8):1309-13102 .wa ng h, li w, li j, et al. the aqueous extract of a popular herbal nu trie nt supplement, angelica sinensis, protects mice against lethal endotoxemia and sepsis j. j nutr, 2006, 136(2): 360-365.3 .窦青春，窦科峰，赵青川等.fk506预处理对内毒素诱导急性肝损伤的保护 作用卩第四军