第2章药物质量控制与分析方法验证

1、L/O/G/O第四章第四章药物的含量测定方法与验证药物的含量测定方法与验证2021-11-252第四章第四章药物的含量测定方法与验证药物的含量测定方法与验证 定量分析方法的分类与特点定量分析方法的分类与特点 1样品分析的前处理方法样品分析的前处理方法 2药品质量标准分析方法验证药品质量标准分析方法验证 32021-11-253第一节第一节定量测定方法的分类与特点定量测定方法的分类与特点 一、容量分析法一、容量分析法二、光谱分析法二、光谱分析法 三、色谱分析法三、色谱分析法 2021-11-254两个注意点两个注意点 含量测定的内容： 原料药：主成分量占取样量的百分比，百分含量百分含量；（小于1

2、00%） 制剂：单位制剂中所含有效成分的量占标示量的百分比，标示量百分含量；标示量百分含量； （可能大于100%） 标示量标示量: : 药品标注的单位制剂所含有效成分的量药品标注的单位制剂所含有效成分的量 生物样本：测定药物在生物基质中的浓度生物样本：测定药物在生物基质中的浓度 定量分析： 精密称定：精确到称样量的千分之一。精密称定：精确到称样量的千分之一。 对天平的要求：对天平的要求： 称样称样0.1g:0.1g:天平精确到天平精确到0.1mg0.1mg，万分之一天平；，万分之一天平；称样称样10mg:10mg:天平精确到天平精确到0.01mg0.01mg，十万分之一天平；，十万分之一天平；

3、称样称样1mg:1mg:天平精确到天平精确到0.001mg0.001mg，百万分之一天平；，百万分之一天平；2021-11-255一、容量分析法一、容量分析法(一一) 特点与适用范围特点与适用范围 (1) 方法简便易行 (2) 方法耐用性高 (3) 测定结果准确 (4) 方法专属性差 适用于原料药含量测定(二二) 有关计算有关计算:1. 滴定度与滴定度计算滴定度与滴定度计算2. 含量计算含量计算 (1) 直接滴定法 (2) 间接滴定法 生成物滴定法 剩余量滴定法 也称滴定法也称滴定法: 将已知浓度滴定液滴加至将已知浓度滴定液滴加至 被测药物溶液中被测药物溶液中,至滴定终点至滴定终点,根据滴根据

4、滴 定液的浓度定液的浓度,体积和滴定度体积和滴定度,计算含量计算含量 容量容量分析法分析法2021-11-256(二二) 相关计算相关计算每每1ml规定浓度的滴定液所相规定浓度的滴定液所相当的被测药物的质量当的被测药物的质量, mg 1. 滴定度每每1ml碘滴定液碘滴定液(0.05mol/L)相当于相当于8.806mg的的C6H8O6 D C B A dcbaBBAAbMWaMWABBABABBAMbaVmMbanaMbMWWBAVTWMbamT）（mg/mlHI 2 OHC I OHC6662686）（mg/ml 806. 813.1761105. 0T2021-11-2571. 滴定度滴定

5、度 溴酸钾法测定异烟肼溴酸钾法测定异烟肼(C6H7N3O=137.14)的含量的含量, 溴酸钾滴定液浓度为溴酸钾滴定液浓度为0.01667mol/L (KBrO3为单元为单元) 反应式反应式: 每每1ml溴酸钾滴定液溴酸钾滴定液(0.01667mol/L) 相当于相当于3.429mg的异烟肼的异烟肼(C6H7N3O) OH 3 KBr 2 N 3 NOHC 3 KBrO 2 ONHC 3222563376滴定度滴定度:）（mlmg 429. 314.1372316670 . 0T2021-11-2582. 含量测定含量测定 直接滴定法直接滴定法 生成物滴定法生成物滴定法 剩余量滴定法剩余量滴定

6、法 (1)(2)(3)2021-11-259(1) 直接滴定法直接滴定法% 100(%) WTV含量规定摩尔浓度实际摩尔浓度F%100%100100%(%) WFTVWTVWTV含量注意掌握滴定反应的原理, 药物与滴定剂在反应中的摩尔比正确计算滴定度和百分含量 2021-11-2510 精密称取阿司匹林0.3972g，用氢氧化钠（0.1021 mol/L）滴定,消耗反应体积21.35 ml。计算每1ml标准氢氧化钠滴定液（0.1 mol/L）的滴定度，以及阿司匹林的含量。（分子式C9H8O4 分子量180.2）(98.89%)2021-11-2511(2) 生成物滴定法生成物滴定法%100%1

7、00100%(%) WFTVWTVWTV含量注意摩尔比的替换药物与A作用生成B, 用滴定液滴定B百分含量计算方法与直接滴定法相同 2021-11-2512(2) 生成物滴定法生成物滴定法滴定度23-5I Sb I 2 Sb-264-2322OS I 2 OS 2 I 葡萄糖酸锑钠含量测定: 本品约0.3g, 加水100ml、盐酸15ml与碘化钾试液10ml,暗处放置10分钟,用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定每1ml硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)相当于6.088mg锑(Sb)反应式:）（mg/ml 088. 676.121211 . 0MbamT2021-11-2513(3) 剩

8、余量滴定法剩余量滴定法(回滴法回滴法)加入定过量滴定液A, 用滴定液B滴定剩余的A注意: 滴定度为滴定液A的滴定度%100)(%) ABBAAWTFVFV含量%100)(%) ABS BOBWTFVV含量无空白进行空白校正2021-11-2514%100)(%) ABBAAWTFVFV含量（1）滴定液）滴定液A（V总总=VAFA）一部分与待测药物反应（）一部分与待测药物反应（ V ）；）；（2）剩余的体积）剩余的体积(V剩剩)与滴定液与滴定液B反应，所以反应，所以V = VAFA- V剩剩 （3）A与与B反应为反应为aA + Bb， 那么那么a/（CA V剩剩 ）=b/（CB VBFB ）；

9、当当a:b=CA:CB时，时， V剩剩= VBFB，（4）与待测药物反应的滴定液）与待测药物反应的滴定液A体积体积V = VAFA- VBFB无空白校正无空白校正2021-11-2515有空白校正有空白校正%100)(%) ABS BOBWTFVV含量前提：前提：A与与B反应为反应为aA + Bb，当当a:b=CA:CB时时（1）空白实验时）空白实验时A与与B完全反应，滴定液完全反应，滴定液A总体积 V总总= VB0FB（2）滴定时，待测药物消耗的滴定液）滴定时，待测药物消耗的滴定液A体积为体积为 V = V总总- VBSFB= VB0FB VBSFB 2021-11-2516(3) 剩余量滴

10、定法剩余量滴定法 司可巴比妥钠含量测定: 本品约0.1g, 加水10ml溶解, 精密加溴滴定液(0.05mol/L)25ml, 再加盐酸5ml, 放置15分钟, 加碘化钾试液10ml, 用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定, 滴定的结果用空白试验校正 W=0.1022g; 硫代硫酸钠滴定液 F=1.038; 供试品消耗硫代硫酸钠滴定液15.73ml;空白23.21ml 2021-11-2517(3) 剩余量滴定法剩余量滴定法滴定度(mg/ml) 01.1327.260111 . 0MbamT司可巴比妥钠M=260.27, 与溴摩尔比为1:1 %8 .98%10010001022. 001

11、.13038. 1)73.1521.23( %100)(%) 2322322BrOSNaOSNaS0WTFVV司可巴比妥含量2021-11-2518(3) 剩余量滴定法剩余量滴定法 滴定液A与滴定液B浓度是相当（a:b=CA:CB） 溴滴定液(0.05mol/L)与硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)相当， 因为溴(Br2)等摩尔转化为碘(I2), 而碘(I2)与硫代硫酸钠(Na2S2O3)反应的摩尔比为1:2, 所以溴滴定液与硫代硫酸钠滴定液的浓度比也是1:2。 滴定液A与滴定液B经浓度校正后的消耗体积(V=VF)是相当的2021-11-2519二、光谱分析法二、光谱分析法定义定义分类分类

12、利用物质的光谱进行定性、定量和结构分析的方法光谱分析法(flame photometry)2021-11-2520(一一) 紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法1. 特点与适用范围特点与适用范围 (1) 方法简便易行 (2) 方法灵敏度高 (3) 结果准确度较高 (4) 方法专属性较差 制剂含量测定2. 仪器校正和检定仪器校正和检定 (1) 波长 (2) 吸光度的准确度 (3) 杂散光 3. 测定法测定法 对照品比较, 吸收系数 计算光谱, 比色法基于对紫外光区基于对紫外光区(200400nm)和可见光区和可见光区(400760nm)单色光吸收特性的分析方法单色光吸收特性的分析方法 原理原理

13、: UV-VisEclTA1lg2021-11-2521(1) 对照品比较法对照品比较法原料药原料药 制剂制剂RRXXAcAc%100(%) XWDc含量%100(%) XBWWDc标示量 氟康唑片溶出度检查: 取本品(规格:100mg), 盐酸溶液(91000)1000ml为溶出介质, 经45分钟时, 取溶液滤过; 取续滤液, 在261nmm波长处测定吸光度; 另取氟康唑对照品适量, 精密称定, 加溶出介质溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.1mg 的溶液, 同法测定, 计算每片的溶出量%100%)( RRXBADcA标示量溶液浓度溶液浓度 2021-11-2522(2) 吸收系数法吸收系数

14、法原料药原料药 制剂制剂%100(%) XWDc含量%100(%) XBWWDc标示量溶液浓度溶液浓度 100)ml/g(%11cmXEAcX 盐酸氯丙嗪注射液(规格：xx ml : xx mg)的含量测定：精密量取适量(V ml, 相当于盐酸氯丙嗪50mg), 置200ml量瓶中, 用盐酸溶液(91000)稀释至刻度, 摇匀; 精密量取2ml, 置100ml 量瓶中, 用盐酸溶液稀释至刻度, 摇匀, 在254nm 的波长处测定吸光度, 按吸收系数( )为915计算 1%1cmE%1001001000(%) 1%1cm标示量标示量BVEVDA2021-11-2523 取标示量为25mg的盐酸氯

15、丙嗪片20片，除去糖衣后精密称定，总重量为2.4120g，研细，精密称量片粉0.2368g，置500ml量瓶中，加盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置100ml量瓶中，加同一溶剂稀释至刻度，摇匀，在254nm波长处测得吸收度为0.435，按百分吸收系数为915计算，求其标示量百分含量？(10分) 2021-11-2524三、色谱分析法三、色谱分析法特点与应用特点与应用分类分类 ：(1) 高灵敏度高灵敏度:ng-g/ml(2) 高专属性高专属性:选择性检测(3) 高效能与高速度高效能与高速度 复方制剂含量测定复方制剂含量测定的首选方法的首选方法 ： 2021-11-2525(

16、一一) 高效液相色谱法高效液相色谱法1. 仪器(RP-HPLC) (1) 色谱柱: ODS最常用; 粒径一般在3-10m; 温度 40 (2) 检测器: UV(DAD,PDA); Fluor, ELSD, RID, ECD, MS (3) 流动相: 首选甲醇-水(末端波长检测:乙腈-水), 有机相 5%; pH2-8 2. 系统适用性试验 (1) 色谱柱的理论板数(n) (2) 色谱峰的分离度(R) (3) 色谱系统的重复性(RSD%) (4) 色谱峰的拖尾因子(T)3. 测定法 (1) 内标法 (2) 外标法不得改变：固定相种类,流动相组分,检测器类型可以改变：色谱柱内径, 长度, 载体粒度

17、 流动相流速, 混合流动相各组分的比例 柱温; 进样量; 检测器的灵敏度HPLC2021-11-25262. 系统适用性试验系统适用性试验分离度分离度(R): 用于评价组分的分离程度用于评价组分的分离程度; 关键指标关键指标重复性重复性: 用于评价连续进样系统响应的重复性能用于评价连续进样系统响应的重复性能 拖尾因子拖尾因子(T): 用于评价色谱峰的对称性用于评价色谱峰的对称性理论板数理论板数(n): 用于评价色谱柱的分离效能用于评价色谱柱的分离效能n=(tR/)2=16(tR/W)2; n=5.54(tR/Wh/2)2212R1R)(2WWttR)(70. 1)(22/, 22/, 12R1

18、RhhWWttR;RSD 1.51h05. 02dWT 2021-11-25273. 测定法与计算测定法与计算(2) 外标法外标法氨酚待因片氨酚待因片(I)的含量测定的含量测定取本品20片, 精密称定, 研细, 精密称取适量, 置250ml量瓶中, 加水溶解并稀释至刻度, 滤过, 取续滤液10l进样; 另精密称取磷酸可待因与对乙酰氨基酚对照品适量, 加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含磷酸可待因0.03mg和对乙酰氨基酚2mg的溶液, 同法测定RXRX)(AAcc含量WWDAAcRXR)(mg/ 片含量2021-11-2528(1) 内标法内标法RRSS)(CACAf校正因子SScAAfcXX

19、)(含量2021-11-2529第二节第二节样品分析的前处理方法样品分析的前处理方法一、不经有机破坏的前处理方法一、不经有机破坏的前处理方法 二、经有机破坏的前处理方法二、经有机破坏的前处理方法(一一) 水解法水解法; (二二) 还原法还原法(一一) 干法破坏干法破坏; (二二) 湿法破坏湿法破坏2021-11-2530需验证的项目需验证的项目验证的内容验证的内容准确度防腐剂溶出度,释放度鉴别试验杂质检查含量测定第三节第三节药品质量标准分析方法验证药品质量标准分析方法验证 精密度 专属性 检测限 重复性中间精密度重现性 2021-11-2531八、验证内容的选择八、验证内容的选择 验证内容验证

20、内容分析项目分析项目鉴别鉴别试验试验元素或杂质检查元素或杂质检查含量测定及含量测定及溶出量测定溶出量测定限度限度定量定量准确度准确度 +精密度精密度重复性重复性 +中间精密度中间精密度 +专属性专属性+检测限检测限+ 定量限定量限 + 线性线性 +范围范围 +耐用性耐用性+2021-11-2532一、准确度一、准确度(一一) 含量测定方法含量测定方法 (二二) 杂质定量测定杂质定量测定 加入已知量杂质进行测试加入已知量杂质进行测试 (三三) 数据要求数据要求 9个测定结果个测定结果3个不同浓度个不同浓度(80,100,120)每个浓度各每个浓度各3份份v 准确度系指用该方法测定的结果与准确度系

21、指用该方法测定的结果与 真实值或参考值接近的程度真实值或参考值接近的程度v 一般用回收率一般用回收率(%)表示表示 定义定义）（加入量本底量测得量）回收率（% 100%）（加入量测得量）回收率（% 100%2021-11-2533二、精密度二、精密度1.重复性重复性p 同一分析人员连续测定所得结果的精密度;p 也称批内精密度或日内精密度 2.中间精密度中间精密度p 不同时间不同不同时间不同分析人员用不同分析人员用不同设备测定结果之设备测定结果之间的精密度间的精密度p 批批/日间精密度日间精密度 3.重现性重现性 p 在不同实验室在不同实验室不同人员测定结不同人员测定结果之间的精密度果之间的精密

22、度p 法定标准采用的法定标准采用的分析方法进行分析方法进行 v同一均匀供试品多次取样测定所得同一均匀供试品多次取样测定所得 结果之间的接近程度结果之间的接近程度 v标准偏差标准偏差(s,SD);相对标准偏差相对标准偏差(RSD)v数据要求同数据要求同“准确度准确度”定义定义2021-11-2534三、专属性三、专属性(一一) 鉴别反应鉴别反应 空白, 结构相似物或有关物质呈负反应(三三) 含量与杂质测定含量与杂质测定 含杂质或降解产物的试样中各峰能获得分离v 在其他成分在其他成分(杂质杂质,降解产物降解产物,辅料等辅料等)可能可能 存在下存在下,方法能正确测定出被测物的特性方法能正确测定出被测

23、物的特性v 鉴别鉴别,杂质检查和含量测定方法杂质检查和含量测定方法 定义定义与应用与应用2021-11-2535四、检测限四、检测限 适用于可用目视法直接评价结果的适用于可用目视法直接评价结果的 分析方法分析方法, 非仪器分析法非仪器分析法 鉴别的显色法鉴别的显色法;杂质检查的杂质检查的TLCl适用于能直观显示信号与基线噪声适用于能直观显示信号与基线噪声 水平的分析方法水平的分析方法, 如如HPLC法法 l 信噪比信噪比S/N=3(2)时的相应浓度或量时的相应浓度或量p 适用于不能直观比较信噪比的仪器适用于不能直观比较信噪比的仪器 分析方法分析方法, 如如UV-Vis法法 p 检测限检测限(l

24、imit of detection, LOD)是指试样中被是指试样中被测物能被检测出的最低浓度或量测物能被检测出的最低浓度或量LOD是一种限度检验效能指标是一种限度检验效能指标,反映方法灵敏度反映方法灵敏度 1.目视法目视法 2.信噪比法信噪比法 3.标准偏差标准偏差法法 空样样空SACSfLOD332021-11-2536五、定量限五、定量限杂质和降解产物用定量方法研究时杂质和降解产物用定量方法研究时, 应确定应确定LOQ LOQ的测定方法与的测定方法与LOD相同相同相应的系数相应的系数(倍数倍数)不同不同, 如信噪比如信噪比S/N=10定量限定量限(limit of quantitatio

25、n, LOQ )是指试样是指试样中被测物能被定量测定的最低量中被测物能被定量测定的最低量;反映方法的灵敏度反映方法的灵敏度测定结果应具有一定准确度和精密度测定结果应具有一定准确度和精密度 2021-11-2537六、线性与范围六、线性与范围范围系指方法适用的高低限浓度或量的区间范围系指方法适用的高低限浓度或量的区间在试验研究开始前确定验证的范围和方法在试验研究开始前确定验证的范围和方法在范围内应能达到一定精密度在范围内应能达到一定精密度,准确度和线性准确度和线性p线性系指在设计的线性系指在设计的“范围范围”内内, 响应值响应值(y)与被与被测物浓度测物浓度(x)直接呈正比关系的程度直接呈正比关系的程度 y = ax +