兽医生物制品学讲义(第十讲)

1、兽医生物制品学讲义兽医生物制品学讲义（第十讲）（第十讲） 武汉中博生物股份有限公司武汉中博生物股份有限公司 张志学张志学 第十章 免疫血清制备技术 什么是免疫血清什么是免疫血清 ? 动物在接受抗原刺激或自然感染康复后，其 血清中通常含有针对特定抗原的高效价特异性 抗体，该动物的血清即称为 免疫血清 。 又称为 高免血清、抗病血清 。 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 抗细菌血清 主要包括 抗病毒血清 抗毒素血清 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 是用于人工被动免疫的制剂 1. 动物感染病原后，使用免疫血清，就等于 直接给动物输入抗体，可以迅速中和病原 或毒素，发挥良

2、好的治疗作用。 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 2. 免疫血清也可用于疾病的预防，提供短期的 被动免疫。 3. 特异性免疫血清还可用于疫病诊断和微生物 鉴定。 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 一、免疫血清的制备过程 通常是给适当动物以多次注射特定病原微生物 或其代谢产物等抗原物质，刺激动物发生免疫应 答，在血清中产生大量的特异性抗体。 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 1 、动物的选择 既可用同种动物，也可用异种动物！ 以抗病毒血清居多 用同种动物制造的血清 同源抗病血清 抗菌性和 用异种动物制造的血清 异源抗病血清 抗毒素血清为主 常选择 大动物

3、 主要是考虑 出血量 问题。 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 （ 1 ）许多免疫血清是用马制备的！ 优点 不受接种途径、抗原量限制； 饲养管理也比较方便； 采血便利；产血清量多。 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 马匹的选择 年轻： 38 岁 健康：来自非疫区 1、就地进行常规检疫后运回隔离饲养、观察 2、然后根据不同生产目的进行系统检疫 ( 马鼻疽、 马传染性贫血、马流产等 ) ，优选出的马匹经 消毒后转入专用饲养舍饲养、生产。 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 （ 2 ）也可用健壮 阉牛 制造 1、饲养管理简便； 2、多选择 3 10 岁的黄牛，

4、并应隔离观察检疫 ( 结核、牛肺疫、布病等 ) ，证明完全健康后 方可用于生产； 3、但血清渗出率偏低。 多用于抗气肿疽、抗猪丹毒、抗猪牛出败、 抗牛瘟等血清的制备。 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 （ 3 ） 猪 1、应选择体壮、健康者； 2、放血提取血清，不作循环采取血清方法； 3、主要用于抗猪瘟血清生产。 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 （ 4 ） 羊 、 兔 、 鸡 等 1、常用于制备诊断用高免血清； 2、较少用于抗病血清生产。 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 2 、抗原的准备 抗原是制备免疫血清的基础 优良的菌 / 毒种则是制备优良抗原

5、的关键 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 优良菌 / 毒种的生物学特征应十分典型 （形态、培养、生化和血清学等） 强 毒 弱 毒 常用的菌 / 毒种有： 灭活毒 可单独使用，可共同使用，也可交互使用， 其目的是尽可能提高抗体效价。 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 按照制备方法的不同 免疫用抗原分为 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 （ 1 ）组织毒抗原 用健康、易感的本种动物人工感染增殖病原 ; 根据微生物增殖规律，采集含毒高的组织制成 活的或灭活的抗原液。 如血液、肝、脾、肺、肾、淋巴结和脑组织等 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 细

6、菌和病毒等微生物 都可利用动物增殖！ 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 例如：抗猪瘟血清抗原制备 给健康、敏感、给健康、敏感、 4080kg 猪注射猪瘟强毒猪注射猪瘟强毒 1mL 于 68d 发病典型时 ( 高温、症状明显 ) 颈动脉放血 采血液、脾和淋巴结等，分别制成血液毒抗原和 组织毒悬液抗原。 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 （ 2 ）鸡胚毒抗原 可在鸡胚增殖的微生物均适用 将种毒接种鸡胚，收获后经检验合格即可 作为免疫原。 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 （ 3 ）细胞毒抗原 多种病毒均可通过细胞增殖； 将种毒接种细胞后培养增殖，然后根据不

7、同 病毒的增殖盛期收获，经检验合格后即可作 为免疫原。 必要时可浓缩、提纯，也可制成佐剂抗原。 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 （ 4 ）培养物抗原 细菌抗原几乎都用培养物制造。 将菌种接种于规定的培养基， 37 培养， 收获后经检验合格制成抗原。 也可于培养物内加入佐剂制成佐剂抗原。 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 3 、免疫程序 由于病原微生物的性质、免疫机制的不同， 各有其最佳的免疫程序。 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 1 、一般的免疫程序 （ 1 ）如以 强毒抗原 为抗原 基础免疫时以灭活疫苗为抗原， 然后以递增量强毒抗原进行高度免疫。

8、 这种免疫程序通常可获得高效价的抗血清 如：抗气肿疽血清、抗猪牛出败血清等 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 （ 2 ）如以灭活佐剂抗原免疫 只需以递增量抗原进行免疫， 即可获得高效价的抗血清。 如：破伤风抗毒素血清等 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 2 、免疫间隔和次数 不同的免疫原，差异较大！ 如如 : 抗猪丹毒血清全程免疫要注射抗原 20 次、 100d 左右 抗猪瘟血清全程须注射抗原 6 次以上、 50d 左右 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 3 、抗体效价测定 1、常在免疫程序完成后采血进行抗体效价测定 2、合格后方可采血提取血清 然后按

9、后期程序注射、采血，持续生产抗血清 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 4 、血清提取 包括：采血和血清分离 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 （ 1 ）采血 采血时间 1、通常在最后一次免疫 810d 后测定抗体效价 , 合格后开始第 1 次采血。 2、第 1 次采血后 35d 可进行第 2 次采血 3、第 2 次采血后，经 35d 天可再次注射抗原， 如此循环进行。 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 采血量 按动物每 kg 体重采取 10mL 左右 注意： 采血常在上午空腹时进行，前一晚上不喂 精料，而仅给草料和水，避免血中出现乳糜 第十章第十章 免

10、疫血清制备技术免疫血清制备技术 （ 2 ）血清分离 自然凝结加压法 无菌操作采血后室温静置凝固； 然后于血凝块上加上灭菌的不锈钢铭， 将血块压下以析出血清。 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 枸橼酸盐血浆分离血清法 以 10 枸橼酸钠液为抗凝剂（ 3.5% ）采血； 静置分层； 按 1000mL 血浆加入 30%CaCl 2 1.3mL ，混匀 后静置 48h ，去除纤维制成血清。 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 5 、质量检验 物理性状检验 按成品检验的有关规定进行 无菌检验 按各种抗血清规定方法、标准进行 效力检验 安全检验 常用： 18 - 22g 健康小鼠

11、健康小鼠 2 只只 , 各皮下注射血清各皮下注射血清 0.5mL 250 - 450g 健康豚鼠健康豚鼠 2 只只 , 各皮下注射血清各皮下注射血清 10mL 观察 10d 均应健活 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 二、类毒素及抗毒素的制备 某些病原微生物能产生强有力的特殊毒性 物质，从而大大增强病原的毒害作用，这种 毒性物质就称为 毒素 。 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 是微生物在生命活动过程 外毒素 中产生并释放或分泌到周 围环境中的毒素。 毒素 只有在微生物死亡后细胞 内毒素 破裂时，才能释放出来的 毒素。 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术

12、 类毒素 外毒素经适量浓度的甲醛处理后，可去除 其毒性，保持其抗原性；这种丧失了毒性而 仍具有抗原性的外毒素，称为 类毒素 。 也称为也称为 “ 变性毒素变性毒素 ” 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 抗毒素 以类毒素作为抗原免疫动物，刺激机体相应 的 B 细胞活化增殖为浆细胞后，产生的特异性 抗体，称为 抗毒素 。 抗毒素可特异性识别侵入机体的外毒素 并中和其毒性，以保护机体免受毒害 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 1 、类毒素的生产和检定 产毒素菌种 产毒培养基 培养毒素培养毒素 47d 毒素脱毒 毒素的检定 0.30.4 甲醛，甲醛， 37 ， 2030d

13、如如 破伤风破伤风 MLD 应应 2 10 6 除去 类毒素 精制类毒素 非特异性物质 适当 佐剂 吸附精制类毒素 类毒素的检定：安全试验等类毒素的检定：安全试验等 ; 类毒素及 吸附类毒素的检定 : 吸附度试验 , 安全试验 , 效力试验 吸附类毒素的检定 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 2 、抗毒素血清的制备 1、马、骡、驴是比较适用的动物 毒素或类毒素 免疫动物 2、基础免疫和加强免疫 抗毒素血清 提纯 精制抗毒素 抗毒素的质量检定 安全性试验、热原质试验、效价测定安全性试验、热原质试验、效价测定 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 三、卵黄抗体的制备 卵黄抗

14、体，不能理解为抗卵黄的抗体， 而是在卵黄中含有针对某种病原微生物的 特异性抗体。 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 目前，家禽病毒病是没有特效药物 使用血清是一种很好的方法， 但血清的价格比较高！ 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 人们又寻求了另外一条途径 制备 高免卵黄抗体 ， 并收到了良好的防治效果。 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 卵黄抗体液的制备过程卵黄抗体液的制备过程 以抗 IBD 的卵黄抗体液为例 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 1 、动物的选择 同制备抗血清的要求一样 必须选择健康无病的产前或开产鸡群 第十章第十章 免疫

15、血清制备技术免疫血清制备技术 2 、疫苗的选择 很重要 获得高效价抗体的关键 通常选择免疫原性优良的油乳剂疫苗 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 3 、免疫程序 第 1 次免疫： 肌肉注射免疫，每只 2mL ，分点注射 第 2 次免疫： 第 1 次免疫后 1014d ，重复免疫 1 次 第 3 次免疫： 第 2 次免疫后 1014d ，再重复免疫 1 次 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 4 、抗体监测与高免蛋的收集 1、第 3 次免疫后，以琼脂扩散法测定卵黄中的 抗体水平； 2、在抗体效价达到 1:128 时，开始收集高免蛋 , 一般高免蛋合格时间大约可持续 1

16、个月。 3、抗体效价降低到 1:64 时停止收蛋，并根据情 况再进行 1 次加强免疫。 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 5 、卵黄液的收集与处理 收取卵黄液前，必须对鸡蛋进行清洗消毒 1）先进行清洗，必要时要擦拭 ( 如粘了很多鸡粪 ) 2）然后用 0.5% 新洁尔灭浸泡消毒 打开鸡蛋去除蛋清，分离蛋黄。 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 根据检测的抗体效价，加入灭菌生理盐水 进行稀释 1、加水不是没有限制的，必须保证稀释后的抗体效价 不低于 1:1632 ； 2、在稀释后的卵黄液中，加入青、链霉素，至终浓度 各为 1000U/mL 抑制可能存在的杂菌污染。 3、目前不提倡加入硫柳汞。 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 6 、成品检验 效价测定 主要包括 细菌培养 安全实验 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 四、免疫血清或卵黄抗体的 合理使用 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 1 、尽早使用 1、抗体可中和病原或毒素，但这种作用仅局限 于未与组织细胞结合的病原或外毒素。 2、因此，使用免疫血清治疗传染病，越早越好。 第十章第十章 免疫血清制备技术免疫血清制备技术 2 、途径合理 1、大多采用注射的途径，但在注射方法上， 可皮下或肌肉注射，也可静脉注射。 2、一般多采用皮下或肌肉注射