一点红黄酮(最后修改)

1、一点红中总黄酮的提取与测定方法研究 胡文海，纪敏琳，黄锐涛，陈燕婷，陈光孝，姜涛*化学与药学系，吉林大学珠海学院，珠海市，广东省，519041摘 要：本文采用正交实验的方法，以一点红中总黄酮得率为考察指标，对影响一点红总黄酮提取方法的因素进行了探讨，分别得出了用连续回流提取法和超声波提取法提取一点红中总黄酮的最佳实验条件。连续回流提取法：乙醇浓度为75，回流时间为3h，固液比为1:25，总黄酮含量为8.773mg/g；超声波提取法：乙醇浓度为65，震荡时间为60min，固液比为1:20，总黄酮含量为9.945mg/g。关键词：一点红；黄酮；连续回流提取法；超声波提取法； Extraction

2、and Determination of Total Flavonoidsabout Emilia SonehifoliaWenhai Hu, Minlin Ji, Ruitao Huang, Yanting Chen, Guangxiao Chen, Tao JiangDepartment of chemistry and pharmacy, ZhuHai College of JiLin University, ZhuHai , GuangDong, 519041Abstract: In this paper, orthogonal experiment method, with Emil

3、ia sonehifolia in total flavonoids was investigated indicators, the factors affecting the Emilia sonehifolia total flavonoids extraction methods were discussed were obtained by extraction with continuous reflux extraction and ultrasonic extraction Emilia optimal conditions of total flavonoids. Conti

4、nuous reflux extraction: ethanol concentration of 75%, a reflux time was 3h, solid-liquid ratio of 1:25, the total flavonoid content was 11.07mg / g; ultrasonic extraction: ethanol concentration of 65%, shock time of 60min, solid-liquid 1:20, total flavonoid content was 12.5mg / g.Keywords: Emilia s

5、onehifolia; Flavonoid; continuous reflux extraction; ultrasonic extraction;一点红是广西传统中草药，为菊科植物一点红(Emilia sonchifolia DC.)的干燥全草，具有清热解毒，消炎，利尿的功效1。一点红主要含有黄酮类，生物碱类，植物甾醇，脂肪酸等化学成分2-3。目前对一点红的研究主要在部分化学成分和栽培技术等方向4,对含量研究比较少。据报道5，黄酮类物质是一点红中抗氧化和消炎的活性成分，故通过测定一点红的总黄酮含量来控制原料药的质量，对确保成品药的疗效有重要的意义。1. 材料与仪器1.1 仪器 索氏提取器(

6、公司名称)；RE-52C旋转蒸发器(上海青浦泸西仪器厂)；紫外分光光度计(日本岛津)；离心机（公司名称），超声波清洗机（AS7240ADT）1.2 材料 一点红草药；芦丁标准品（中国药品生物制品检定所）；乙醇；石油醚等试剂均为分析纯。2. 实验方法与步骤2.1. 连续回流提取法提取总黄酮的方法考察通过设计正交试验，分别对乙醇浓度为65%、75%、85%，回流时间为2h、3h、4h，固液比为1:20、1：25、1:30进行最佳提取条件的选择。用分析天平准确称取5.0000g干燥的一点红药草粉末，装入索氏提取器中；加入相应的乙醇，回流至相应的时间；回流提取完成后将所得的提取液转移到RE-52C旋转

7、蒸发器中，控制温度50，旋转蒸发至乙醇尽可能的除去；将浓缩液转入布氏漏斗中，连接减压装置，采用减压抽滤的方法，除去不溶物质；所得的滤液转移到分液漏斗中，加入石油醚进行萃取，反复萃取至石油醚层无色，所得的即为总黄酮提取液。22.2. 超声波提取法提取总黄酮的方法考察运用正交实验思维对乙醇浓度为65%、75%、85%，超声波震荡时间为30min、45min、60min，固液比为1：15、1：20、1：25进行探究提取条件对总黄酮提取效率的影响。其方法是用分析天平准确称取5.0000g干燥一点红药草粉末到锥形瓶中，加入乙醇，放入AS7240ADT超声波清洗机中震荡，震荡完成后采用减压抽滤的方法分离提

8、取液和药渣，滤液取出转移到RE-52C旋转蒸发器中浓缩提取液，减压抽滤除去不溶物，浓缩液用的石油醚萃取直至石油醚层澄清，将总黄酮加入多倍量95%乙醇离心，回收乙醇，得到的即为总黄酮提取液。62.3. 芦丁标准曲线的制备用移液管取芦丁标准液(c=0.2mg/ml)25.00ml于50.00ml容量瓶中，用95%乙醇定容至刻度，摇匀。用移液枪精密吸取芦丁溶液0.00，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00ml于6支10ml的比色管中，加入95%乙醇至5ml，加入5%的亚硝酸钠溶液0.30ml摇匀，静置6min，加入10%的硝酸铝0.30ml，摇匀，静置6min，加入4%的氢氧化钠4.00

9、ml，摇匀，用蒸馏水稀释至刻度。摇匀，静置15-20min，在510nm处测吸光度，以第一组为空白对照，绘制芦丁溶液的标准曲线。以芦丁标准液的浓度（mg/ml）为横坐标，吸光度为纵坐标，得到芦丁的标准曲线的回归方程为Y=1.2614X, R2=0.99962.4. 样品总黄酮的含量测定将总黄酮提取液转移到50.00ml容量瓶中，用95%乙醇定容至刻度，摇匀；用移液枪取3.00ml至比色管中，加入2.00ml的95%乙醇，摇匀；加入5%的亚硝酸钠0.30ml摇匀，静置6min；加入10%的硝酸铝0.30ml，摇匀，静置6min；加入4%的氢氧化钠4.00ml，摇匀，用蒸馏水定容至刻度。摇匀，静置

10、15-20min，以95%乙醇-亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠作对照，在510nm处测吸光度。将黄酮提取液测得吸光度代入回归方程Y=1.2614X即得稀释后的溶度。根据公式总黄酮含量（mg/g）=C×D×V/M式中：C：供试品的浓度 D：稀释倍数 V：样品的容量 M：一点红的取样量3. 实验结果与分析3.1. 连续回流提取法实验结果采用L9(34)正交表进行试验，以总黄酮含量为参考指标。表1 连续回流提取法实验因素水平表水平因素(A)乙醇浓度(%)(B)回流时间(h)（C)固料比16521:2027531:2538541:30表2连续回流提取法测定结果试验号(A)乙醇浓度(%)

11、(B)回流时间(h)（C)固料比含量(mg/g)11113.96421226.97631334.49242124.59852235.60262315.33873133.85883216.18493324.6515.1444.1405.1624.7395.1796.2545.4085.3914.8984.8274.6515.091R0.2822.1140.7580.652注：-i因素下水平1出现3次含量之和的平均值-i因素下水平2出现3次含量之和的平均值-i因素下水平3出现3次含量之和的平均值R-i因素下中最大值与最小值之差由表2极差分析可以看出R2>R3>R1，所以连续回流提取法影

12、响总黄酮提取得率的因素的主次因素为BCA，即：回流时间>固料比>乙醇浓度。最佳搭配水平为B2C2A2，即回流时间为3h，固料比为1:25，乙醇浓度为75%。根据该最佳条件，测得总黄酮的含量为8.773mg/g。另外，该实验的三个因素的R1,R2,R3与R4（误差）相比较，R1<R43.2.超声波提取法实验结果采用L9(34)正交表进行试验，以总黄酮含量为参考指标。表3 超声波提取法实验因素水平表水平因素(A)乙醇浓度(%)(B)震荡时间(min)(C)固料比165301:15275451:20385601:25表4超声波提取法测定结果试验号(A)乙醇浓度(%)(B)震荡时间(

13、min)(C)固料比含量(mg/g)11116.24521226.67731339.94542124.44052236.14862316.10473136.28083215.09193326.8007.6225.6555.8146.3985.5645.9725.9726.3546.0577.6167.4586.492R2.0581.9611.6880.138由表4极差分析可以看出R1>R2>R3，所以超声波提取法影响总黄酮提取得率的因素的主次因素为ABC，即：乙醇浓度>震荡时间>固料比。最佳搭配水平为A1B3C3，即震荡时间为60min，固料比为1:20，乙醇浓度为65

14、%。根据该条件，测得总黄酮的含量为9.945mg/g。4. 结论采用连续提取法提取一点红的总黄酮，乙醇浓度对总黄酮提取的影响小，从节省原料的角度考虑，可适当降低乙醇浓度从而降低研究或生产成本。并且提取过程密封，不会受外界环境影响，药材能够不断地接触新溶媒，总黄酮能提取得更加充分，特别适合易挥发的有机溶剂。采用超声波提取法提取总黄酮，其方法较连续回流提取法步骤复杂，提取的杂质也多，提取条件要严格控制，但是相对时间减少，而且提取得率有所提高。致谢感谢广东省大学生创新创业训练计划项目（项目编号：201413684014）及吉林大学珠海学院第八批百人工程项目（项目编号：）对本实验提供资金赞助并感谢吉林大学珠海学院为本实验提供试剂及器材。参考文献：1 广西壮族自治区革命委员会卫生局.广西本草选编（下册）M.南宁：广西人民出版社，1974：940.2 李秀信，王荣花，杨秀萍.一点红黄酮成分的分析及含量测定J.西北植物学报，2003，23（4）：671.3 高建军，程东亮.一点红化学成分的研究J.中国中药杂志，1993，18（2）：102.4 李