实验三_药物敏感试验和消毒灭菌

1、实验三消毒夾窗和崎敏试验实验內客和要疝 1 掌握药敏试验的原理、步骤、结果及 音义 2掌握常用的消毒与灭菌技术 3熟悉紫外线杀菌试验的原理4了解细菌L型的诱导和菌落类型、矯期1试验在感曙住疾病防箔彳的蠹丈近年来，由于各种抗菌药物的广泛应用，导致耐药菌株的迅速增多。尤其是亡 谱及超广谱抗生素的普遍使用，造成耐药 菌株大量岀现，给临床治疗带来极大的困 难。同时，由于不合理的使用抗生素，治 疗的失败率及不良反应均有增加。因此， 药敏试验在感染性疾病的防治方面具有日 益重要的实际意义。二.轄养+嚙敏的貝的1、确定导致感染的病原菌的种类，对于不 同的病原菌（G-杆菌或G+球菌，条件致病 菌或急性传染病病

2、原菌）需要采取不同的 治痔措施。2、确定病原菌对各种抗生素的敏感性， 指导临床根据病人情况合理用药。由于细 菌耐酋柱葩快速增k,单纯很赖经验元用 药物经常无效，在更多的时候需要参考药 敏实验的结果。3、用于流行病学调查及院内感染的监控,减少耐药菌株的流行。三.什么精况下需要做轄养+嚙敏7感染原因无法确定。病原菌的耐药性无法确定，经验用药可能失败（尤其是免 疫力低下患者、长期使用抗生素者、icu病房、院内感染 患者、接受导管插入或其他创伤性治疗患者。）病人对可用药物过敏，需要检测其他药物的耐药性。病人个体情况要求对某些药物精确用药，需要测定其最低 抑菌浓度（MIC） o6四.彳用抗斎嚙汤敏感性试

3、验与耐斷检测方达介铭其原理：体外测定抗生素药物抑菌或杀菌的能力。可 帮助临床对感染性疾病选择最佳用药，还可进行流行 病学调查，了解某些致病菌耐药性变异情况。纸片扩散法(Kirby-Bauertest)稀释法(dilution test)E试验法(Etest)联合药物敏感试验特殊耐药菌及耐药酶的表型检测-耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的检测-氏内酰胺酶、超广谱P-内酰胺酶检测等方法：际准;弋管壁旋转挤去多 种3次，每次旋转抑菌-菌液制冬SV®$WlR-24hft<lrfn平板上数个菌落置于 生理蛊涂布韦 ®细菌抗生素滤纸片讪，用无菌银子中心相距应大于余菌 平板6贴含蚩将含

4、豪f24mm,纸片距平板内缘应大于15mm；-孵育：35°C 16-18h,量取抑菌圈直径。注意事项1纸片应分布均匀，中心距离不小于24mmo2含菌平板必须避免过浓或过稀。3纸片贴完后应在15min内将平板反过来，置 于37度温箱中。4纸片一旦接触培养基就不应再挪动位置。5要注意无菌操作。影响嚙敏褚皋的素培养基应根据试验菌的营养需要进行配制。倾注平板时，厚度合适(约5- 6mm),不可太薄，一般90mm直径的培养皿，倾注培养基18- 20ml为宜。培罪基内应尽量避觅有抗菌药物的拮抗物质，如钙、 镁离子能减低氨基糖昔类的抗菌活性，胸腺卩密喘核昔和对氨苯甲 酸(PABA)能拮抗磺胺药和T

5、MP的活性。细菌接种量细菌接种量应恒定，如太多，抑菌圈变小，能产酶的菌株更可破坏 药物的抗菌活性。药物浓度药物的浓度和总量直接影响抑菌试验的结果，需精确呢制。商品药 应严格按照其推荐治疗量配制。培养时间一般培养温度和时间为37°C , 8J8小时，有些抗菌药扩散慢如多粘菌素，可将已放好抗菌药的平板培养基，先置4°C冰箱内24小时 ，使抗菌药预扩散，然后再放37°C温箱中培养，可以推迟细菌的 生长，而得到较大的抑菌圈。抑菌环解释标准及相应的最低抑菌浓度抗生素药物含量（毗/片）抑菌环直径解释标谁（帧）相应的 MIC（ H g/min）耐药中介敏感耐药敏感10>2

6、9W0.1埶卡曰H素20/10<1314 17>18刁32/16W8/4先铎畫素30W1415 17>18>32W8琏霉素10W1112 14>15 庆大霉素10W1213 14>15龙8W4红雷素15W1314 22>23>8W0.5卡那霉素30W1314 17>18>25W6丁氨卡那30W1415165=17>32W16磺胺晞味250W121316>17>350W100头砲菌素类30W1415 17>18>32W8阿莫西林20/10W1314 17>185=16/8W8/4环丙沙星5W1516

7、20>215=4W1诺氟沙星10W1213 16>17>16W4利副平5WJL617 19>20W1万古畫素30W910 113=12>32W4矢.葩何理解MIC值及嚙敏褚皋7每种药物均提供定性和定量两种结果。定性:（S）表示该药物对该细菌有抑制或杀灭作用。使用常规剂量可以达到有效的治疗效果。中介（中度敏感，I）表示细菌对该药物治疗的敏感性低于敏感 菌株，必须加大剂量以达到更高的血药浓度才能在特定的生理部 位获得有效的临床效力；对于使用剂量有严格限制的药物则必须 重复测试以确定敏感还是耐药。耐药（R）表示药物常规剂量所达到的药物浓度不能抑制或杀死 细菌，即使加大剂

8、量也不能达到治疗效果或者超过了人体的正常 耐受水平。定量：MIC （最低抑菌浓度）表示在体外达到抑制细菌生长所需要的最 低的药物浓度。临床治疗要求的血药浓度一般为MIC值（gg/ml的4-8倍。对于不同部位的不同药物，其浓度可能更高或更低。 应具体情况具体分析，不可一概而论。12妥期使用抗笛素的病人疝祓恙祥做崎敏试验7长期使用抗生素的病人尤其是住院病人应该经常做药敏试 验。所谓的长期，并不是一个很长的时间概念，住院病人每隔 3-4天就需要做一次细菌学检查。对于ICU病房的病人，可能每 天都要做细菌学检查。因为这些病人多数免疫力较差，容易受 条件致病菌的侵犯，而且反复发作。此外病原菌常呈多重耐药

9、 性，产超广谱0-内酰胺酶的G-杆菌（ESBL）以及耐甲氧西林葡 萄球菌（MRSA和MRSCN）、产AmpC酶的阴沟肠杆菌、铜绿假单胞 菌在ICU病房最为常见。对于长期使用抗生素的病人，其感染有 以下儿个特点；1 长期使用说生素的病人，不同时期（即使在很短的时间内） 感染的病原歯种类可能不同,耐药性因此也不相同。2、同一株细菌，在长时间用药时，仅需要3-4天就可以从对某 种药物敏感发展为耐药。3长期使用抗生素容易诱发细菌产生L型变异。常规培养阴性 时，进行L型细菌培养能够提高检出率。13佃斎L型一佃腌璨掀陷佃斎形成务件细胞壁中肽聚糖结构受理化或生物因素的直 '夂体IT接破坏或合成抑制而

10、形成。生物学特性：形态多形性；染色革兰阴性；培养高渗培养套；菌落疝煎蛋样球菌L型回复后消毒与灭菌技术基本概念灭菌一杀灭或除去所有微生物的繁殖体和芽胞。消毒一杀灭或除去病原微生物。防腐一抑制微生物的生长与繁殖。抑菌剂或防腐剂。除菌:用冲洗、过滤等机械手段除去微生物的方法化疗：用对病原菌有毒力但对机体无害的化学物质杀灭或抑制 机体内病原微生物的方法15物理法常用消毒灭菌的方法化学法辐射消毒法热力消毒法生物 净化法电离辐射法 I电子灭菌灯法日光曝晒法干热法湿热法擦拭法 喷雾法烤箱法L燃烧法 高压蒸汽灭菌漓煮沸消毒法操作规程A将物品刷洗干净，全部浸没在水中，或在水中加入碳酸氢钠配成*1% 2%的浓度，

11、可将沸点提高到105°C.还可去污防锈。A加热煮沸。A水沸后开始计时510 min,如中途加入物品 ,则在第二次水沸后重新计时。A关闭热源，用无菌持物钳取出消毒物品。r i干热灭菌法焚烧一一最彻底的灭菌方法烧灼一直接用火焰灭菌方法ir<如接种环、试管口、三角瓶口 干烤加热160-170°C 2h玻璃器皿、陶瓷红外线一一热效应，与干烤类似灭菌效果：可杀死营养体和芽胞2.湿热灭菌法高压蒸汽灭菌法（热压灭菌法）最有效的湿热灭菌法121 °C 15-20mi m （杀芽胞）煮沸港毒法水煮100 °C 5mim（杀繁殖体）-2h（杀芽胞）流通蒸汽消毒法水蒸汽

12、100 °C 15-30m i m （杀繁殖体）间歇蒸汽灭菌法反复多次流动蒸汽间歇加热灭菌（杀芽胞）巴氏消毒法较低的温度61 °C 30mim/71 °C 30s （杀致病菌）压力蒸汽灭菌的效果监测物理监测法用150°C或200°C的留点温度计。使用前将温度计汞柱甩至50°C以下，放入包裹内，灭菌后检査其读数是否达到灭菌温度化学监测法 主要是通过化学指示剂的化学反应，灭菌后呈现的颜色变化来辨别是否达到灭菌的要求。临床常用的化学指示卡与化学指示胶带 ,化学指示卡放在包的中央，化学指示胶带粘贴在包的外面。生物监测法 是最可靠的监测法，利用

13、对热耐受力较强的非致病性嗜热脂肪杆菌芽范作为指示剂,制成每片含106个嗜热脂肪杆菌芽抱的菌纸周,片，使用时将10片菌纸片分别放于灭菌器四角及中央，待灭菌完毕，用 无菌蹑取出后.再放人培养基内，在56C温箱中培养48h至1周，若全 部菌纸片无细菌生长则表示灭菌合格。消毒与灭菌技术辐射灭菌法一非电离辐射：紫外线最佳杀菌波长为250270nm杀菌机理：干扰DNA的复制与转录特点：紫外线穿透力较弱适应范围：紫外线消毒适用于空气消毒与物品表面的消毒。消毒与灭菌技术滤过除菌法滤膜与细菌滤过除菌法消毒与灭菌技术化学消毒剂作用机制促进菌体蛋白质变性凝（酚、醇、醛、酸碱类等）干扰细菌酶系统和代谢（氧化剂、重金属

14、盐类等损伤细菌细胞膜，增加其通透性（表面活性剂、脂溶剂等）菌体成分氧化、水解或结构改变（氧化剂、卤素、醛、酚等）消毒剂类别名称浓度（）用途重金属朴红汞2皮用E、膜、小创I®消霉硫柳汞0.01生堪9制品防腐皮肤、尿道、水果、蔬菜消毒高猛酸钾氧化剂过氧化氢皮肤、粘膜、创伤消毒醇类过氧乙酸塑料、玻璃、人造纤维消毒碘液2.5皮肤消毒乙醇70 75皮肤、体温计消毒0.20.5石炭酸35地面、器皿表面和排泄物消毒酚类来苏同上、也常用于手及皮肤消毒表面活性剂新洁尔灭手术器械消毒1:4 1:8排泄物、地面消毒酸碱类生石灰染料表浅创伤消毒化学消毒剂的使用方法A浸泡法侵泡法是将物品洗净、擦干后，浸没在消毒液中进行消毒灭菌的方法。A擦拭法 擦拭法是用消毒剂直接擦拭人体或物品表如皮肤、桌椅等，达到消毒灭菌的方法。喷雾法喷雾法是利用喷雾器将消毒剂变成微粒气