实验七植物染色体标本的制备与观察

1、实验七 植物染色体标本的制备与观察一、实验目的一、实验目的1.1.学习植物染色体制片的基本原理和方法。学习植物染色体制片的基本原理和方法。2.2.了解细胞周期过程中染色体的动态变化。了解细胞周期过程中染色体的动态变化。二、实验原理二、实验原理n 常规压片染色体常不能完全散开常规压片染色体常不能完全散开, ,容易重叠、变形容易重叠、变形、断裂，影响显带结果，核型分析较困难。、断裂，影响显带结果，核型分析较困难。n 2020世纪世纪7070年代以来，参照动物染色体标本制备技年代以来，参照动物染色体标本制备技术，对植物细胞去壁、低渗、火焰干燥方法，取术，对植物细胞去壁、低渗、火焰干燥方法，取得了很好

2、的结果。但操作繁琐，费用较贵。得了很好的结果。但操作繁琐，费用较贵。n 分散良好的标本片用于染色体计数、组型分析、分散良好的标本片用于染色体计数、组型分析、显带、显微操作、原位杂交等分子细胞遗传学研显带、显微操作、原位杂交等分子细胞遗传学研究领域。究领域。n 染色体组在细胞分裂中期的表型称为染色体组型染色体组在细胞分裂中期的表型称为染色体组型或称核型，包括染色体数目、形态、大小、着丝或称核型，包括染色体数目、形态、大小、着丝点位置及副缢痕及随体的有无等特征。点位置及副缢痕及随体的有无等特征。n 染色体组型分析就是通过对染色体标本或其照片染色体组型分析就是通过对染色体标本或其照片进行测量、对比分

3、析、配对、分组、排列，对组进行测量、对比分析、配对、分组、排列，对组内各染色体的形态进行测量、描述，从而阐明生内各染色体的形态进行测量、描述，从而阐明生物染色体组成的过程。物染色体组成的过程。三、实验材料三、实验材料 n 器具：恒温培养箱，显微镜器具：恒温培养箱，显微镜n 试剂：试剂：0.10.1秋水仙素溶液秋水仙素溶液，CarnoyCarnoy固定液固定液，1mol/L HCL, 1mol/L HCL, 亚硫酸水溶液（漂洗液），亚硫酸水溶液（漂洗液），纤维素酶纤维素酶，果胶酶，果胶酶，改良苯酚品红染色液改良苯酚品红染色液（Carbor fuchsinCarbor fuchsin，），）n 材

4、料：常用分生区组织，如根尖、茎尖和嫩叶做材材料：常用分生区组织，如根尖、茎尖和嫩叶做材料。料。本次试验选用：小麦根尖。本次试验选用：小麦根尖。四、实验方法四、实验方法一）一） 根尖培养和预处理根尖培养和预处理n 取材：将小麦放在取材：将小麦放在2525温箱中发芽，待根长到温箱中发芽，待根长到12cm12cm左右，窃取左右，窃取0.5cm0.5cm长的根尖部分。长的根尖部分。n 前处理：剪下根尖用前处理：剪下根尖用0.10.1秋水仙素秋水仙素溶液处理溶液处理3 34h4h。也可。也可将剪下的根尖放在将剪下的根尖放在03蒸馏水中，置蒸馏水中，置冰箱中冰箱中24小时，使分裂的细胞尽可能集中于分裂小时

5、，使分裂的细胞尽可能集中于分裂中期。中期。n 固定：用水洗净处理过的根尖，经固定：用水洗净处理过的根尖，经CarnoyCarnoy固定固定224小时。换入小时。换入70%的酒精，使细胞的分裂活动处的酒精，使细胞的分裂活动处于停滞状态。于停滞状态。n 制片：有多种方法制片：有多种方法切片、压片、滴片等。切片、压片、滴片等。n 解离：取出根尖解离：取出根尖放入放入1mol/L HCl（58-60 解离解离对比）解离对比）解离14-15min，软化去除细胞壁及，软化去除细胞壁及果胶物果胶物质，使细胞易于分散。质，使细胞易于分散。n 染色：倒去热染色：倒去热HCl后，用改良苯酚品红染色液染后，用改良苯

6、酚品红染色液染色色510min。n 漂洗：吸去染色液，用漂洗液换洗漂洗：吸去染色液，用漂洗液换洗2-3次，每次次，每次1-2分钟。分钟。n 酶解：在载玻片上切取根尖着色深的部分，浸入酶解：在载玻片上切取根尖着色深的部分，浸入小酒杯内小酒杯内1-2第混合酶液中，室温下酶解第混合酶液中，室温下酶解40min左左右或在右或在28 温箱中酶解温箱中酶解20min左右。左右。n 洗涤：吸去酶液，加蒸馏水，用吸管换洗几次，洗涤：吸去酶液，加蒸馏水，用吸管换洗几次，吸去残留的煤业后加入吸去残留的煤业后加入45%的醋酸。的醋酸。n 压片：用吸管从醋酸中吸去材料，置于干净的载压片：用吸管从醋酸中吸去材料，置于干

7、净的载玻片上，保留少许醋酸，盖上盖玻片，覆以吸水玻片上，保留少许醋酸，盖上盖玻片，覆以吸水纸，轻轻敲打盖片，使细胞和染色体分散。纸，轻轻敲打盖片，使细胞和染色体分散。n 镜检镜检1 1分裂细胞观察分裂细胞观察四：实验观察结果四：实验观察结果 低倍镜找分裂细胞区,高倍镜观察染色体形态。估计染色体数目。 2 2分裂时期分裂时期及染色体形态及染色体形态观察观察 尽量寻找下列分裂期染色体图像。前 期中 期 后 期末 期洋葱根尖细胞染色体百合根尖细胞染色体绿豆根尖细胞染色体3. 3. 典型染色体标本进行显微照相五、实验报告五、实验报告n实验目的实验目的n实验用品实验用品n实验原理实验原理n实验方法实验方法n思考题思考题六、思考题六、思考题n简述前处理过程中加入秋水仙素的的作用，以简述前处理过程中加入秋水仙素的