微生物实验室培养

1、 微生物的培养和应用微生物的培养和应用课题课题1 1 微生物的实验室培养微生物的实验室培养SARS病毒病毒 禽流感病毒禽流感病毒真菌真菌酵母菌酵母菌酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌青霉青霉请判断： 1.微生物都是原核生物微生物都是原核生物 （ ） 2.微生物肉眼都看不见微生物肉眼都看不见 （ ）微生物微生物包括哪五类包括哪五类：真菌真菌原生动物原生动物 原核原核 原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界真核真核一 培养基及无菌技术 1.培养基可以分为哪些类型？ 2.培养基的基本营养成分分别是什么？ 3.无菌技术的方法包含哪些内容？一、培养基一、培养基1 1、概念：、概念： 人们按照微生物对人们按照

2、微生物对营养物质营养物质的不同需求，的不同需求，配置出供其配置出供其生长繁殖生长繁殖的营养基质。的营养基质。 一般都含有一般都含有 四类物质，四类物质，此外还要满足微生物生长对此外还要满足微生物生长对 、 以及以及 的的要求。要求。 2 2、营养成分：、营养成分：碳源、氮源、水、无机盐碳源、氮源、水、无机盐 pH pH 特殊营养物质特殊营养物质 O O2 2 3 3、分类：、分类： 按照物理性质划分培养基按照物理性质划分培养基 固体培养基固体培养基半固体培养基半固体培养基液体培养基液体培养基主要用于微生物主要用于微生物的的分离分离、鉴定鉴定等等主要用于观察微生物主要用于观察微生物的运动、保藏菌

3、种等的运动、保藏菌种等主要用于工业生产主要用于工业生产培养基的种类培养基的种类 按用途划分按用途划分基础培养基：基础培养基：鉴别鉴别培养基培养基: :含有一般微生物生长繁殖所需的基本营含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物质的培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）养物质的培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）用来将某种或某类微生物从混杂的微生物用来将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来的培养基。在培养基中群体中分离出来的培养基。在培养基中加加入特殊营养物质或化学物质入特殊营养物质或化学物质，有利于特定有利于特定微生物的生长，同时抑制其它微生物的生微生物的生长，同时抑制其它微生物的生长长。如。如 的培养基的

4、培养基。选择选择培养基培养基: :用于鉴别不同类型微生物的培养基。微用于鉴别不同类型微生物的培养基。微生物产生某种代谢产物，与培养基中的生物产生某种代谢产物，与培养基中的特殊化学物质发生特殊化学物质发生特定的化学反应特定的化学反应，产，产生明显的特征变化。生明显的特征变化。以尿素为唯一氮源、以尿素为唯一氮源、选择培养基加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基: : 分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基: : 分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基: : 分离固氮菌分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有

5、机物的无碳培养基: : 分离自养型微生物分离自养型微生物 例例1关微生物营养物质的叙述中，正确的是关微生物营养物质的叙述中，正确的是: A.是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源 B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量 C.除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量二、无菌技术二、无菌技术（1 1）对实验操作的）对实验操作的空间、操作者的衣着和手空间、操作者的衣着和手，进行，进行 。（2 2）将用于微生物培养的）将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基器皿、接种用具和培养基等器具进行等器具进行 . .（3 3）为避免周

6、围环境中微生物的污染，）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作实验操作应在应在酒精灯火焰酒精灯火焰 附近进行附近进行。（4 4）实验操作时应）实验操作时应避免避免已经灭菌处理的材料用具已经灭菌处理的材料用具与周围的物品与周围的物品 相接触相接触。 清洁和清洁和消毒消毒灭菌灭菌目的：防止实验室的培养物目的：防止实验室的培养物 ；同时避免操作者自身被微生物感染。同时避免操作者自身被微生物感染。 被其他微生物污染被其他微生物污染消毒消毒灭菌灭菌概念概念指使用指使用较为温和较为温和的物理或化的物理或化学方法仅杀死物体表面或内学方法仅杀死物体表面或内部部的的 微生物微生物( (不包括不包括 ) )指使用

7、指使用强烈强烈的理化因素的理化因素杀死物体内外杀死物体内外 微生微生物，包括物，包括 。常用常用方法方法适用适用对象对象操作空间、液体、双手等操作空间、液体、双手等接种环、接种针、玻璃接种环、接种针、玻璃器皿，培养基等器皿，培养基等部分部分芽孢和孢子芽孢和孢子所有所有芽孢和孢子芽孢和孢子煮沸消毒法、煮沸消毒法、 巴氏消毒法巴氏消毒法 化学药剂消毒法、化学药剂消毒法、 紫外线紫外线消毒法消毒法灼烧灭菌、灼烧灭菌、 干热灭菌干热灭菌 高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌煮沸煮沸消毒消毒法：法：巴氏消毒法：巴氏消毒法：化学药剂：化学药剂：紫外线：紫外线：针对不耐高温的液体针对不耐高温的液体接种室、超净工作台接种

8、室、超净工作台培养皿培养皿.吸管等玻璃器皿吸管等玻璃器皿耐高温、需保持干燥耐高温、需保持干燥灼烧灭菌：灼烧灭菌：干热灭菌：干热灭菌：高压蒸汽灭菌：高压蒸汽灭菌：接种环等金属工具接种环等金属工具实验操作者的双手实验操作者的双手培养基培养基1 1、消毒方法、消毒方法2、灭菌方法、灭菌方法 例例2下面对发酵工程中灭菌的理解下面对发酵工程中灭菌的理解的是的是: A.防止杂菌污染防止杂菌污染 B.消灭杂菌消灭杂菌 C.培养基和发酵设备都必须灭菌培养基和发酵设备都必须灭菌 D.灭菌必须在接种前灭菌必须在接种前计算计算称量称量溶化溶化灭菌灭菌倒平板倒平板三、微生物培养的实验操作三、微生物培养的实验操作1、制

9、备培养基、制备培养基制备培养基制备培养基纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌1.1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到5050左右时，才能用来倒平板。左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？你用什么办法来估计培养基的温度？用手触摸，刚刚不烫手时用手触摸，刚刚不烫手时2.2.为什么需要使锥形瓶的为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰瓶口通过火焰？灼烧灭菌，防止瓶口的微生物的污染灼烧灭菌，防止瓶口的微生物的污染有关问题有关问题防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。3.3.为什么将为什么将平板倒置平板倒置？4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基

10、溅在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？培养微生物吗？为什么？ 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。培养微生物。2、纯化大肠杆菌、纯化大肠杆菌平板划线法平板划线法: :稀释涂布平板法稀释涂布平板法: :(1)(1)接接种种方方法法.连续划线，连续划线，.逐步稀释逐步稀释.梯度稀释，梯度稀释，.分别涂布分别涂布.将接种环放在火将接种环放在火焰上灼烧，直到焰上灼烧，直到接

11、种环接种环_在在_旁冷旁冷却接种环，并却接种环，并打开棉塞打开棉塞 将试管口通过火焰将试管口通过火焰 .将已将已_的接种环伸的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液入菌液中蘸取一环菌液 左手将皿盖打开一条缝隙，右手左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，板内，划划_条平行线，条平行线，盖上皿盖。注意盖上皿盖。注意不要划破培养基不要划破培养基。.将试管通过火将试管通过火焰，并塞上棉塞焰，并塞上棉塞 火焰火焰冷却冷却三至五三至五灼烧接种环，待其冷却后，从灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的第一区域划线的_开始开始往第二区域内划线。重复以上往第二区域内划线

12、。重复以上操作，在三、四、五区域内划操作，在三、四、五区域内划线。注意线。注意不要将最后一区的划不要将最后一区的划线与第一区相连线与第一区相连。末端末端烧红烧红将平板将平板_放放入培养箱中培养。入培养箱中培养。 倒置倒置 1).1).为什么在操作的第一步以及每次划线之为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？需要灼烧接种环吗？为什么？ 答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧每次划

13、线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。避免细菌污染环境和感染操作者。 2).2).在灼烧接种环之后，为什么要等其在灼烧接种环之后，为什么要等

14、其冷却后再进行划线？冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3).3).在作第二次以及其后的划线操作时，在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。的菌落。将涂布器浸将涂布器浸在盛有酒

15、精在盛有酒精的烧杯中的烧杯中 取少量稀释液滴取少量稀释液滴加到培养基表面加到培养基表面 待酒精燃尽后待酒精燃尽后冷却冷却8 810s 10s 将沾有少量酒将沾有少量酒精的涂布器在精的涂布器在火焰上引燃火焰上引燃灼灼烧烧用涂布器将菌液均匀地用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使布时可转动培养皿，使涂布均匀涂布均匀稀稀释释涂涂布布平平板板法法(3)(3)菌种培养：菌种培养：将接种的培养基（至少将接种的培养基（至少3 3个）和一个未个）和一个未接种的培养基接种的培养基倒置放入倒置放入3737的恒温箱中。的恒温箱中。(4)(4)实验结果观察实验结果观察: :

16、未接种的培养基表面是否有菌落生长？未接种的培养基表面是否有菌落生长？ 菌落的形态、大小、颜色？菌落的形态、大小、颜色？(5)(5)菌株的保存方法菌株的保存方法4 4冰箱保藏冰箱保藏甘油管藏（甘油管藏（-20-20）临时保存：临时保存：长期保存：长期保存：固体斜面固体斜面纯化大肠杆菌的实验是否需要设置对照实验？纯化大肠杆菌的实验是否需要设置对照实验？ 1. 用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时时() 可以用相同的培养基可以用相同的培养基 都需要使用接种针进行接种都需要使用接种针进行接种 都需要在酒精灯火焰旁进行接种都需要在酒精灯火焰旁进行接种 都可以

17、用来计数活菌都可以用来计数活菌 A.B.C.D.C编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gH H2 2OO100ml100ml2 2右表是某微生物培右表是某微生物培养基成分，请据此回答：养基成分，请据此回答：（1 1）右表培养基可培）右表培养基可培养的微生物类型是养的微生物类型是 （2 2）若不慎将过量）若不慎将过量NaClNaCl加入培养基中。加入培养基中。如不想浪费此

18、培养基，如不想浪费此培养基，可再加入可再加入 . .用于培养用于培养 金黄色葡萄金黄色葡萄球菌球菌. 自养型微生物自养型微生物 含碳有机物含碳有机物 （3 3）若除去成分）若除去成分，加入（，加入（CHCH2 2OO），该培养基），该培养基可用于培养可用于培养 。（4 4）表中营养成分共有）表中营养成分共有 类。类。（5 5）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是装前，要进行的是 。（6 6）右表中各成分重量确定的原则）右表中各成分重量确定的原则是是 。（7 7）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分是

19、成分是 。固氮微生物固氮微生物 3 调整调整pHpH 依微生物的生长需要确定依微生物的生长需要确定 琼脂（或凝固剂琼脂（或凝固剂） 四、课题成果评价四、课题成果评价 （一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温1 12 d2 d后无菌落生长，后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。 （二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落

20、的特点，则说明接种操作是符合要求的；如并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。达到要求，需要分析原因，再次练习。 （三）是否进行了及时细致的观察与记录（三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养培养12 h12 h与与24 h24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要

21、是培养学生良好的科学态度与习惯。变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。本课题知识小结本课题知识小结: :1 1、器具的灭菌、器具的灭菌2 2、培养基的配制、培养基的配制3 3、培养基的灭菌、培养基的灭菌4 4、倒平板、倒平板5 5、微生物接种、微生物接种6 6、恒温箱中培养、恒温箱中培养7 7、菌种的保存、菌种的保存课题课题2 2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、筛选菌株一、筛选菌株无机盐无机盐碳源碳源氮源氮源凝固剂凝固剂尿素是唯一氮源的选择培养基尿素是唯一氮源的选择培养基二、统计菌落数目二、统计菌落数目用什么方法统计？用什么方法统计？稀释涂

22、布平板法稀释涂布平板法显微镜直接计数显微镜直接计数一般选择菌落数在一般选择菌落数在 的平板进行计数。的平板进行计数。统计菌落数往往比活菌的实际数目统计菌落数往往比活菌的实际数目 。 30-300低低（酵母菌）血球板计数法（酵母菌）血球板计数法 2.2.计算公式计算公式 每克样品中的菌落数每克样品中的菌落数（C CV V）M M，其中，其中C C代表代表某一稀释度下平板上生长的某一稀释度下平板上生长的平均菌落数平均菌落数，V V代表涂布代表涂布平板时所用的稀释液的体积（平板时所用的稀释液的体积（mLmL），），M M代表稀释倍数。代表稀释倍数。 稀释涂布平板法稀释涂布平板法统计菌落数目统计菌落数

23、目1.1.理论依据：理论依据：恰当的稀释度恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键。是成功地统计菌落数目的关键。为了保证结果准确，通常将为了保证结果准确，通常将几个稀释度几个稀释度下的菌液都下的菌液都涂布在平板上，培养后再选择菌落数在涂布在平板上，培养后再选择菌落数在3030300300的平的平板进行计数。板进行计数。三、设置对照三、设置对照目的：目的：排除无关变量（非测试因素）的影响，排除无关变量（非测试因素）的影响，提高实验结果的可信度。提高实验结果的可信度。(1)(1)空白对照：空白对照：培养基是否有杂菌污染培养基是否有杂菌污染(2)(2)牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基对照：牛肉膏蛋白胨培

24、养基和选择培养基对照： 选择培养基是否有选择作用选择培养基是否有选择作用。 选择培养基上的菌落数较少。选择培养基上的菌落数较少。四、实验设计四、实验设计土壤土壤取样取样制备培养基制备培养基样品样品稀释稀释涂布涂布培养培养观察观察统计统计 1. 1.取样时，一般要铲去表层土。取样时，一般要铲去表层土。 2.2.分别制备分别制备 的的选择性培养基和选择性培养基和牛肉膏牛肉膏蛋白胨培养基蛋白胨培养基（判断选择培养基是筛选出分解尿素的细菌）（判断选择培养基是筛选出分解尿素的细菌） 3.3.不同的微生物要采用不同的稀释度。不同的微生物要采用不同的稀释度。 4.4.每个稀释度需倒每个稀释度需倒6 6个平板

25、：个平板： 4 4个选择性培养基，个选择性培养基，3 3个涂布，个涂布，1 1个空白；个空白； 2 2个牛肉膏蛋白胨培养基，一个涂布，一个空白。个牛肉膏蛋白胨培养基，一个涂布，一个空白。以尿素为唯一氮源以尿素为唯一氮源 将待测样品经一系列将待测样品经一系列1010倍稀释，然后选择倍稀释，然后选择三个稀释度三个稀释度的菌液，的菌液，分别取分别取0.1 0.1 mLmL接种到已制备好的平板上，将接种到已制备好的平板上，将同一稀释度同一稀释度加到加到三三个或三个以上的平板上；个或三个以上的平板上；培养后，培养后，计算出同一稀释度菌落平均计算出同一稀释度菌落平均数数。三重复组三重复组求平均值求平均值使

26、结果更使结果更准确准确五、实验结果的分析、评价五、实验结果的分析、评价(1)(1)空白对照：空白对照：是否有杂菌污染是否有杂菌污染(2)(2)牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基对照：牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基对照： 选择培养基是否有选择作用。选择培养基是否有选择作用。 选择培养基上的选择培养基上的菌落数较少菌落数较少。 结果：结果： 酚红指示剂变酚红指示剂变_，初步鉴定该细菌能够分解尿素初步鉴定该细菌能够分解尿素 操作：操作：在以在以_为唯一氮源的培养基中为唯一氮源的培养基中加入加入 。尿素尿素（鉴别培养基）（鉴别培养基）红色红色六、实验结果的鉴定六、实验结果的鉴定酚红指示剂酚红指示剂菌落细菌

27、的菌落特征细菌的菌落特征因种而异因种而异 课题课题2 2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、筛选菌株一、筛选菌株无机盐无机盐碳源碳源氮源氮源凝固剂凝固剂尿素是唯一氮源的选择培养基尿素是唯一氮源的选择培养基二、统计菌落数目二、统计菌落数目用什么方法统计？用什么方法统计？稀释涂布平板法稀释涂布平板法显微镜直接计数显微镜直接计数一般选择菌落数在一般选择菌落数在 的平板进行计数。的平板进行计数。统计菌落数往往比活菌的实际数目统计菌落数往往比活菌的实际数目 。 30-300低低（酵母菌）血球板计数法（酵母菌）血球板计数法 2.2.计算公式计算公式 每克样品中的菌落数每克

28、样品中的菌落数（C CV V）M M，其中，其中C C代表代表某一稀释度下平板上生长的某一稀释度下平板上生长的平均菌落数平均菌落数，V V代表涂布代表涂布平板时所用的稀释液的体积（平板时所用的稀释液的体积（mLmL），），M M代表稀释倍数。代表稀释倍数。 稀释涂布平板法稀释涂布平板法统计菌落数目统计菌落数目1.1.理论依据：理论依据：恰当的稀释度恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键。是成功地统计菌落数目的关键。为了保证结果准确，通常将为了保证结果准确，通常将几个稀释度几个稀释度下的菌液都下的菌液都涂布在平板上，培养后再选择菌落数在涂布在平板上，培养后再选择菌落数在3030300300的平的

29、平板进行计数。板进行计数。三、设置对照三、设置对照目的：目的：排除无关变量（非测试因素）的影响，排除无关变量（非测试因素）的影响，提高实验结果的可信度。提高实验结果的可信度。(1)(1)空白对照：空白对照：培养基是否有杂菌污染培养基是否有杂菌污染(2)(2)牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基对照：牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基对照： 选择培养基是否有选择作用选择培养基是否有选择作用。 选择培养基上的菌落数较少。选择培养基上的菌落数较少。四、实验设计四、实验设计土壤土壤取样取样制备培养基制备培养基样品样品稀释稀释涂布涂布培养培养观察观察统计统计 1. 1.取样时，一般要铲去表层土。取样时，一般要铲去

30、表层土。 2.2.分别制备分别制备 的的选择性培养基和选择性培养基和牛肉膏牛肉膏蛋白胨培养基蛋白胨培养基（判断选择培养基是筛选出分解尿素的细菌）（判断选择培养基是筛选出分解尿素的细菌） 3.3.不同的微生物要采用不同的稀释度。不同的微生物要采用不同的稀释度。 4.4.每个稀释度需倒每个稀释度需倒6 6个平板：个平板： 4 4个选择性培养基，个选择性培养基，3 3个涂布，个涂布，1 1个空白；个空白； 2 2个牛肉膏蛋白胨培养基，一个涂布，一个空白。个牛肉膏蛋白胨培养基，一个涂布，一个空白。以尿素为唯一氮源以尿素为唯一氮源 将待测样品经一系列将待测样品经一系列1010倍稀释，然后选择倍稀释，然后选择三个稀释度三个稀释度的菌液，的菌液，分别取分别取0.1 0.1 mLmL接种到已制备好的平板上，将接种到已制备好的平板上，将同一稀释度同一稀释度加到加到三三个或三个以上的平板上；个或三个以上的平板上；培养后，培养后，计算出同一稀释度菌落平均计算出同一稀释度菌落平均数数。三重复组三重复组求平均值求平均值使结果更使结果更准确准确五、实验结果的分析、评价五、实验结果的分析、评价(1)(1)空白对照：空白对照