分子生物学实验报告

1、华中科技大学生命科学与技术学院分子生物学实验报告 专业 班级 姓名 学号 日期 成绩 实验一 质粒的小剂量提取碱裂解法实验原理：质粒(Plasmid)是独立于细菌染色体外的，能自主复制且稳定遗传的遗传因子，是一种环状的双链DNA分子，大小为1-200千碱基对(kb)，存在于细菌、放线菌、真菌以及一些动植物细胞中，在细菌细胞中最多，在细胞中一般以游离超螺旋状存在。质粒具有自主复制性、不相容性、多拷 贝性、转移性、选择性遗传标记、质粒DNA链上有1到几个限制性内切酶单一识别位点等特点。它可独立游离于细胞质内，也可以整合到细菌染色体中，它离开宿主细胞就不能存活，而它控制的许多生物学功能也是对宿主细胞

2、的补偿。质粒型载体一般只能携带10kb以下的DNA片段，适用于构建原核生物基因文库，cDNA库和次级克隆。质粒DNA可通过转化引入寄主菌。在细胞中有两种状态，一是“严谨型”；二是“松驰型”。 1.严谨型：这些质粒的复制是在寄主细胞严格控制之下的，与寄主细胞的复制偶联同步。所以，往往在一个细胞中只有一份或几份拷贝；2.松驰型：这些质粒的复制是在寄主细胞的松弛控制之下的，每个细胞中含有10-200份拷贝，如果用一定的药物处理抑制寄主蛋白质的合成还会使质粒拷贝数增至几千份。如较早的质粒pBR322即属于松弛型质粒，要经过氯霉素处理才能达到更高拷贝数。质粒的提取有多种方法。本实验采用碱裂解法 进行质粒

3、的小量制备。碱裂解法是常用的质粒的小剂量提取法，它的原理是：在碱性条件下，染色体DNA和质粒DNA都发生变性，但质粒DNA的超螺旋共价闭合环状结构的两条互补链不会完全分离，当用酸性的高盐缓冲液将pH中和至中性时，变性的质粒DNA又恢复到原来的构型并溶解在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构。通过离心，缠结的染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。上清液中的质粒DNA因不溶于70的乙醇，可在加入乙醇后通过离心得到质粒DNA沉淀实验目的：1、掌握碱裂解法提取质粒的基本原理。2、掌握碱裂解法的实验操作及各种试剂的配制方法及作用。3、学习质粒的基本结

4、构实验试剂与器材：（一）实验试剂：1、LB培养基蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，NaCl 10g/L，待用纯水完全溶解后，用1N NaOH调pH至7.3左右，15Ibf/in2高压蒸气灭菌20分钟。固体培养基则添加15g/L琼脂。2、卡纳霉素：100mg/ml，工作液为100ug/ml。3、溶液（pH8.0）：取1.982 g葡萄糖、4 ml EDTA（0.5 mol/L，pH8.0）、5 mlTris-Cl（1mol/L，pH8.0），加双蒸水定容至200 ml，高压灭菌20 分钟，于4保存。 （50 mmol/L葡萄糖，25mmol/LTris-HCl，10mmol/L EDTA。灭

5、菌后存放。）4、 溶液：取2 ml NaOH（10 mol/L稀释）、10 ml SDS（10%），加双蒸水定容至100 ml，室温使用，现配现用。 （0.2mol/L NaOH， 1% SDS（m/V） 5、 溶液：29.4 g乙酸钾，11.5 ml冰乙酸，加双蒸水定容至100 ml。 （5mol/L 乙酸钾 60ml，冰乙酸11.5 ml，水28.5ml。所配成的浓度中钾的浓度为3mol/L，乙酸根的浓度为5mol/L。保存于4度，用时置于冰浴中。）6、酚/氯仿/异戊醇液(V/V/V25/24/1)：配制时，先将氯仿中加入异戊醇，使其体积比为24:1，再将Tris平衡酚与之等体积混合，4保

6、存，1月内有效。7、TE缓冲液(pH8.0)：10mol/L Tris-HCl(pH8.0)；1mmol/L EDAT8、RNase 1mg/ml：称10mg RNase于Eppendorf管中，溶于1ml 10mmol/L Tris-HCl(pH7.5)、15mmol/L NaCl溶液中，于100加热15分钟，缓慢冷却至室温，此液为10mg/ml RNase浓度，应用时稀释至1mg/ml。9、70乙醇、无水乙醇10、分别含有pEGFP-C1质粒以及CMV-UXT质粒的大肠杆菌DH5（二）实验仪器： 37度恒温培养箱、恒温摇床、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、台式高速离心机、台式小型振荡器、水浴锅

7、、EP管(1.5mL微量离心管)、移液枪(10uLlmL)、吸头、制冰机、冰盒。实验过程：1、将含有pEGFP-C1质粒及CMV-UXT质粒的大肠杆菌DH510l分别接种到10ml含卡纳霉素(终浓度100g /ml)的LB培养液中，37振摇过液。2、取1.3ml菌液转入Eppendorf管中，12000rpm离心1分钟，除去上清（可以再加1.5ml菌液离心，以提高细菌细胞的数量）。尽可能吸干培养基。3、将细菌沉淀重悬于100l用冰预冷的溶液（已加入RNase，终浓度1mg/ml）中，旋涡振荡混匀。4、加200l新配制的溶液，盖紧管口，反复颠倒数次，使溶液在粘稠的细菌裂解物中分散均匀，随后置冰浴

8、中3-5分钟。6、用台式高速离心机12000rpm 离心5分钟，将上清转入另一Eppendorf管中。如上清液浑浊则需重新离心一次。7、加入与上清等体积酚/氯仿/异戊醇，旋涡振荡混匀后，12000rpm离心5分钟，小心吸取上清液，转移至另一1.5mL Ep管中，注意勿将两液相中间的白色蛋白薄层吸出。8、向上清液加入2倍体积无水乙醇，上下颠倒混匀（可以震荡），室温放置min。用离心机于12000rpm离心5min。小心吸去上清液，将离心管倒置于一张纸巾上，以使所有液体流出。9、用0.5mL 70乙醇洗涤沉淀一次，上下颠倒混匀，12000rpm离心3min，除尽乙醇，室温自然干燥(将离心管倒置于一

9、张纸巾上，约10-15分钟)，备用。10、用30-50ul TE或去离子水溶解质粒DNA。11、用核酸测定仪分析DNA的质与量。实验结果及分析：注意事项:1.步骤2中,一次加1.5ml于1.5mlEP管中会有点多,故加1.3ml或1.4ml,后期如若觉得细胞较少,可再次加菌液离心;2.步骤4禁止剧烈震荡是为防止溶解细胞的同时基因组被破坏降解成小片段，影响后面对质粒的提取，防止最后得到的质粒里有大量杂质污染轻轻上下颠倒五到六次，澄清即可加溶液III3.考虑离心机加速阶段占用一定时间，离心时间可适当加长，离心效果不佳可再次离心实验二 PCR扩增目的片段实验原理：PCR是聚合酶链式反应的简称，指在引

10、物指导下由酶催化的对特定模板（克隆或基因组DNA）的扩增反应，是模拟体内DNA复制过程，在体外特异性扩增DNA片段的一种技术，在分子生物学中有广泛的应用，包括用于DNA作图、DNA测序、分子系统遗传学等。 PCR基本原理是以单链DNA为模板，4种dNTP为底物，在模板3末端有引物存在的情况下，用酶进行互补链的延伸，多次反复的循环能使微量的模板DNA得到极大程度的扩增。在微量离心管中，加入与待扩增的DNA片段两端已知序列分别互补的两个引物、适量的缓冲液、微量的DNA膜板、四种dNTP溶液、耐热Taq DNA聚合酶、Mg2+ 等。反应时先将上述溶液加热，使模板DNA在高温下变性，双链解开为单链状态

11、；然后降低溶液温度，使合成引物在低温下与其靶序列配对，形成部分双链，称为退火；再将温度升至合适温度，在Taq DNA聚合酶的催化下，以dNTP为原料，引物沿53方向延伸，形成新的DNA片段，该片段又可作为下一轮反应的模板，如此重复改变温度，由高温变性、低温复性和适温延伸组成一个周期，反复循环，使目的基因得以迅速扩增。琼脂糖电泳：琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。其分析原理与其他支持物电泳最主要区别是：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。琼脂糖凝胶具有网络结构，物质分子通过时会受到阻力，大分子物质在涌动时受到的阻力大，因此在凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量

12、，而且还取决于分子大小，这就大大提高了分辨能力。但由于其孔径相当大，对大多数蛋白质来说其分子筛效应微不足道，现广泛应用于核酸的研究中。蛋白质和核酸会根据pH不同带有不同电荷，在电场中受力大小不同，因此跑的速度不同，根据这个原理可将其分开。电泳缓冲液的pH在69之间，离子强度0.020.05为最适。常用1%的琼脂糖作为电泳支持物。琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段，其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低，但它制备容易，分离范围广。普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2-20kb，利用脉冲电泳，可分离高达107bp的DNA片段。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。DNA分子在高于

13、等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速率向正极方向移动。实验目的：1、 掌握PCR基本原理2、 掌握PCR反应体系设计方法3、 掌握PCR基本实验步骤4、 掌握琼脂糖凝胶电泳原理及实验试剂与器材：试剂：模板、引物F、引物R、dNTP、Taq酶、10×Buffer（含Mg2+）、ddH2O、TAE缓冲液、仪器：PCR扩增仪、EP管、移液枪(1uL10uL)、吸头、制冰机、冰盒、电泳仪、电泳盒，凝胶电泳成像系统实验过程：1、 了解PCR各组成成分的原始浓度，并根据PCR的总体积，计

14、算各组成成分的用量，并记入下表；PCR成分原始浓度终浓度使用量各成分多少对PCR的可能影响模板400ng/ul1ul模板量较少,扩增产物强度相应减弱；当模板量较多,会出现大片段扩增产物的缺失或无扩增产物,且点样孔至泳道会出现相应增强的弥散背景引物F10uM100-500-1000nmol/L1.5ul引物浓度在一定范围内时，扩增结果基本一致;但随着引物浓度的逐渐增加,开始出现弥散背景增强的趋势,并且有些扩增带发生减弱或缺失引物R10uM100-500-1000nmol/L1.5ul同上dNTP2.5mM/each20-200umol/L0.6ul一定浓度范围内，随着浓度的减小,扩增带明显减少或

15、扩增强度减弱,当浓度某值时,扩增产物丰富、清晰、带浓,扩增片段产率与浓度呈正相关Taq酶5U/ul2.5-5U/100ul0.9ul随着聚合酶浓度的增高,扩增产物量呈增多趋势但弥散背景也相应增强10×Buffer（含Mg2+）10×1x3ulMg2+浓度过小时,无扩增产物; Mg2+浓度在适当范围时,随着Mg2+浓度的增加,扩增产物带型基本一致ddH2O21.5ul总体积30ul2、设计PCR的阴性对照组与阳性对照组，并计算各组相关成分的用量，并写在实验报告中；3、取冰块，在冰上按照计算好的用量进行PCR各个成分的加样（注意加样顺序！注意不要将样品加到管壁上！）；4、上机，

16、记下PCR程序的各个参数；5、琼脂糖电泳检测PCR结果：、制胶（1%琼脂糖）称取DNA电泳用琼脂糖放入100ml三角烧瓶中，加1×TAE缓冲液，将烧瓶置微波炉或电炉上加热煮沸，直至琼脂糖完全溶解。待凝胶溶液冷却至60左右时，混匀后趁热将凝胶溶液倒入插好适当梳齿的电泳板上。室温下待凝胶完全凝固(约需30分钟)，拔出梳齿，将凝胶连同制胶板一起放入电泳槽中。注意，上样孔在电泳槽负极一端。、电泳向电泳槽中加1xTAE缓冲液至刚没过凝胶表面。取三支Eppendorf管，标号，如下表准备电泳样品。12345分子量标准PCR产物1PCR产物2提取的质粒1提取的质粒2样品5l9l9l9l9l10&#

17、215;上样缓冲液-1l1l1l1l混匀后，依次全部加入点样孔中，注意加样器吸头不可插入过深，一般刚刚与加样孔口相切，以免刺穿凝胶，导致样品外溢。接通电源，调节电压至80V，电泳约1小时左右，将凝胶板取出。在凝胶成像系统下观察记录结果。实验结果及分析：图1条带从左至右依次为Marker、pEGFP-C1质粒、UXT质粒、PCR扩增阴性、PCR扩增实验结果分析：1、第1条带：Marker跑出来比较清楚，说明胶、缓冲液等条件较合适2、第2、3条带：质粒拖尾扩散可能是提取不彻底，有残留蛋白影响了其运动（蛋白质提取步骤为实验一第7步，可能是蛋白层不慎吸出）。上样量过大，加样时间过长等也会造成拖尾现象（

18、但基于Marker正常，排除这些原因）。第2条带孔处有扩散，应该是点样时戳破了一点凝胶孔所致。3、第4、5条带：前面跑的最快的分子量最小，应该是引物二聚体，由于其量少，故颜色也要暗一些。后面两条带应该是扩增出来的质粒，颜色比较亮，说明质粒浓度较大。甚至超出了显色范围而出现了红色。注意事项：1、 TE缓冲液不需要加太多，刚好没过凝胶表面就好，否则点样的时候枪头找凝胶孔的时候看着比较困难2、 点样迅速，要稳，点完样后不应放置过长时间才电泳，防止样品扩散。 实验三 DNA重组目的片段与载体片段的连接实验原理：DNA重组是将外源DNA与载体分子连接，这样重新组合的DNA叫做重组体或重组子。DNA重组的

19、方法主要有粘端连接法和平端连接法。 重组的DNA分子是在DNA连接酶的作用下，有Mg2+、ATP存在的连接缓冲系统中，将分别经酶切的载体分子与外源DNA分子进行连接。常用的DNA连接酶是T4噬菌体DNA连接酶，它不但能使粘性末端的DNA分子连在一起，而且能使平末端的双链DNA分子连接起来，但这种连接的效率比粘性末端的连接效率低，一般可通过提高T4噬菌体DNA连接酶浓度或增加DNA浓度来提高平末端的连接效率。实验目的：掌握DNA重组技术的原理及基本操作实验试剂与器材：试剂：Buffer DE-A、Buffer DE-B、异丙醇、Buffer W1、Buffer W2、无菌水、10xBuffer、

20、Marker、T4DNA连接酶、EcoRI 、BamHI器材：1.5 ml离心管 、离心机 、水浴锅 、DNA 制备管 、2 ml离心管、PCR仪实验过程：(一) 酶切按照下表添加试剂后轻敲管底使其混匀，置离心机中离心数秒后置于37水浴锅中保温1.5半小时后取出并逐个加入上样缓冲液，即可终止酶切反应以及用于电泳。胶回收DNA自提质粒10×BufferEcoRIBamHI水A（插入片段）-15ul3ul2ul2ul8ulB（载体片段）-3ul3ul2ul2ul20ul(二) 电泳：结果见图2(三) 胶回收DNA片段1、在紫外灯下切下含有目的DNA 的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽凝胶表面液体并

21、切碎。计算凝胶重量（提前记录1.5 ml 离心管重量），该重量作为一个凝胶体积（如100 mg=100 ul体积）。2、加入3 个凝胶体积（1%凝胶）的Buffer DE-A，混合均匀后于75°C 加热（低熔点琼脂糖凝胶于40°C 加热），间断混合（每2-3 min），直至凝胶块完全熔化（约6-8 min）。* Buffer DE-A 为红色溶液。在熔化凝胶的过程中，可以帮助观察凝胶是否完全熔化。3、加0.5 个Buffer DE-A 体积的Buffer DE-B，混合均匀。当分离的DNA 片段小于400bp 时，需再加入1 个凝胶体积的异丙醇。* 加Buffer DE-B

22、 后混合物颜色变为黄色，充分混匀以保证形成均一的黄色溶液。4、吸取步骤3 中的混合液，转移到DNA 制备管（置于2 ml（试剂盒内提供）离心管）中，12,000×g离心1 min。弃滤液。5、将制备管置回2 ml 离心管，加500 l Buffer W1，12,000×g 离心30 s，弃滤液。6、将制备管置回2 ml 离心管，加700 l Buffer W2，12,000×g 离心30 s，弃滤液。以同样的方法再用700 l Buffer W2 洗涤一次12,000×g 离心1 min。* 确认在Buffer W2 concentrate 中已按试剂瓶

23、上的指定体积加入无水乙醇。* 两次使用Buffer W2 冲洗能确保盐份被完全清除，消除对后续实验的影响。7、将制备管置回2 ml 离心管中，12,000×g 离心1 min。8、将制备管置于洁净的1.5 ml 离心管(试剂盒内提供)中，在制备膜中央加30l Eluent 或去离子水，室温静置1 min。12,000×g 离心1 min 洗脱DNA。* 将Eluent 或去离子水加热至65将提高洗脱效率。9、 制备管及柱子的回收：加700ul去离子水，12,000×g 离心1 min，弃滤液，反复3次，标记好，备用。10、 可以用琼脂糖电泳检测回收片段或核酸测定仪

24、测量。(四) 酶连、PCR扩增连接反应参照体系：10×T4 DNA连接缓冲液 1L*酶切后的载体片段 2L*酶切后的目的基因 6LT4DNA连接酶 1L 总体积 10L放入PCR仪中，16， 3小时。实验结果及分析：图2条带从左至右依次为Marker、载体片段、插入片段结果分析：1、 第2条带出现杂带，应该是酶切时间过长切出了其他片段所导致，毕竟切出的杂片段是少的，所以其亮度较低。2、 根据条带与Marker的对比，可以知道我们需要的是上图红色方框所标示部分。分子量大，为载体片段，总重290mg；分子量小，为目的基因片段，总重190mg。注意事项：1、 所切载体片段量较多，应分次离心

25、2、 第7步中，在第6步之后并未加入液体洗涕，但并不是没有离心的必要；离心是除去残留的肉眼不宜看出的液体3、 胶回收过程注意防护紫外线实验四 感受态细胞的制作与重组质粒的转化实验原理：带有外源DNA片段的重组体分子在体外构建成后，需要导入适当的宿主细胞内进行繁殖或表达出具有一定生物活性的蛋白。能够作为重组体转化的受体，主要有动物细胞、植物细胞、微生物细胞等。导入受体细胞的途径重要有转化（转染），显微注射和电穿孔等多种不同的方式。可以根据不同的受体选择不同的导入方式。一般情况下，细菌一类的原核生物和酵母这样的低等真核细胞可用转化方式导入，而高等动植物细胞则需采用显微注射或电穿孔来进行。 细菌表面

26、通过CaCl2 处理后，局部失去细胞壁或细胞壁溶解，DNA分子能够通过质膜进入细胞。其进入细胞的方式是完整的双链DNA分子首先吸附到细胞表面，双链DNA分子解链变成单链，单链DNA分子一条进入受体细胞内，另一条被降解。进入细胞内的单链DNA则复制成双链环状DNA，随同复制子同时复制，并被转录翻译。实验目的：1、掌握制作感受态细胞的原理和方法2、掌握外源DNA转入细胞的的原理及操作实验试剂与器材：试剂：LB液体培养基、0.1mol/LCaCl2 、甘油、冰、 器材：50ml离心管、离心机、无菌吸头、EP管、水浴锅、摇床、涂布棒、酒精灯、培养皿实验过程：1.受体菌培养：1)无菌接种环刮取冻存于-7

27、0的大肠杆菌菌种DH5，划线接种于不含抗生素的LB固体培养基上，37培养16h左右。2)挑取一单个菌落，接种于3ml 不含抗生素的LB液体培养基中，37下振荡培养过夜。2感受态细胞制备（CaCl2法）：准备冰浴，将0.1mol/LCaCl2预冷。1)吸取0.5ml菌液接种于37预热的25mlLB液体培养基（装入50ml离心管）中（1：50的比例），37振荡培养2.53h（后一个小时随时观察细菌生长情况，A600值约为0.4）。2)将处于对数生长期的菌液置于冰上，冰浴30min，冷却至0。3)4，5000r/min离心10min。4)弃上清，倒置离心管，使残留液体流尽。5)使细菌悬于10ml预冷

28、的0.1mol/LCaCl2溶液中，冰浴15min。6)4下，5000r/min 离心10min。7)弃上清，每个管加425ul冰预冷的0.1mol/LCaCl2重悬细胞，再加入75ul甘油，混匀。8)用无菌吸头将感受态细胞分装于无菌离心管中，50l/每管，贮存于-70。9)当天将制备好的感受态菌置于液氮中过夜，第二天可将之取出，在-70中保存，半年内使用。3、转化： 准备冰浴，42水浴1)取连接产物10l加入50l感受态细胞混匀，冰浴30分钟。同时完成对照组DNA的转化，即：标准质粒（1ul，约1000ng）的转化。2)将EP管转移到42水浴中热休克90秒后，迅速置冰浴中冷却5分钟。3)加入

29、300l LB液体培养基（无抗生素），37下以100 rpm轻摇45分钟。4)取300l菌液涂于含卡纳霉素的LB平板上。对照组依次操作。培养16h，观察结果。 16h小时后观察平板，判断感受态的效益；判断连接反应是否成功。实验结果及分析：实验组图3阳性对照组图4阴性对照组图5结果分析：1、 阴性对照组没有长杂菌，说明实验过程中没有杂菌污染2、 阳性对照组长出菌落，说明感受态细胞制作及细胞生理状态正常3、 实验组几乎未长出菌落，联合阳性对照组和阴性对照组的结果分析可知，最大可能是重组质粒制作不成功。可能是质粒添加量过少所致。思考题：1. 请写出碱裂解制备质粒中各个主要试剂的用途。答:卡那霉素：抗

30、生素，防止杂菌污染 溶液I：维持溶液pH，因此选用适当浓度和适当pH值的Tris-CI溶液。葡萄糖：使悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子底部。EDTA：Cat+和Mgt+等二价金属离子的鳌合剂，可以抑制DNase的活性和微生物生长。溶液II：NaOH：溶解细胞SDS：碱性，但若只用SDS，达不到彻底溶解细胞的作用，主要为下一步做铺垫。溶液III：SDS在高盐浓度下发生沉淀，同时SDS能与蛋白质结合，平均两个氨基酸上结合一个SDS分子，所以沉淀也将溶液中的大部分蛋白质沉淀下来。溶液中的K+置换了SDS中的Na+而形成了不溶性的PDS，高浓度的盐使沉淀更完全。同时，由于基因组DNA很长，容易被PD

31、S共沉淀。2M的醋酸：中和NaOH，因为长时间的碱性条件会打断DNA。基因组DNA一旦发生断裂，小于100 kb的片断，就不容易与PDS共沉淀。酚/氯仿/异戊醇：PDS的沉淀并不能将所有的蛋白质沉淀，酚可以使蛋白质变性，作用大于氯仿，但水饱和酚的比重略比水重，碰到高浓度的盐溶液，离心后酚相会跑到上层，不利于含质粒的水相的回收。加入氯仿后可以增加其比重，使得酚/氯仿始终在下层，方便水相的回收。还有，酚与水有很大的互溶性，如果单独用酚抽提后会有大量的酚溶解到水相中，而酚会抑制很多酶反应(比如限制性酶切反应)，因此如果单独用酚抽提后一定要用氯仿抽提一次将水相中的酚去除。而用酚/氯仿混合液进行抽提，跑

32、到水相中的酚则少得多，微量的酚在乙醇沉淀时就会被除干净而不必担心酶切等反应不能正常进行。异戊醇的添加，主要可以使离心后上下层的界面更加清晰，方便水相的回收。 无水乙醇：沉淀DNA 79%乙醇：去盐；DNA不能过度失水，否则变形，难恢复，难再溶。2. 请列举估计/测定DNA浓度/纯度的几种办法。答: 分光光度法：DNA或RNA链上碱基的苯环结构在紫光区具有较强吸收，其吸收峰在260nm处。当DNA样品中含有蛋白质、酚或其他小分子污染物时，会影响DNA吸光度的准确测定。一般情况下同时检测同一样品的OD260、OD280和OD230，计算其比值来衡量样品的纯度。琼脂糖电泳测量法 ：质粒DNA及