反相高效液相色谱法测定夏枯草中两种三萜酸的含量(精)

1、反相高效液相色谱法测定夏枯草中两种三萜酸的含 08-05-28 16:45:00 作者：邹盛勤，蒋柏泉，陈 编辑：studa20 LM 釦【关键词】 夏枯草；,乌索酸；,齐墩果酸；,反相高效液相色谱法 摘要：目的建立同时测定夏枯草中乌索酸及齐墩果酸含量的方法。方法采 用反相高效液相色谱法。色谱柱为 Nucleodur C18 柱(4.6 mm X 250 mm 5 卩 m),流动相为甲醇：水(86 : 14),流速为 0.8 ml/min，检测波长为 210 nm 柱温 25 C。结果乌索酸进样量在 0.425 23.826 8 卩 g,齐墩果酸进样 量在 0.127 21.144 8 卩 g

2、 范围内，线性关系良好，乌索酸、齐墩果酸的加 样平均回收率分别为 98.0 %和 98.7 %，RSD分别为 1.0 %和 1.4 %。结论方法 简单准确，重现性好，适用于夏枯草药材的质量控制。 关键词：夏枯草； 乌索酸； 齐墩果酸； 反相高效液相色谱法 Determ in ati on of Two Triterpe ne Acids in Prun ella vulgaris L. by RP-HPLC Abstract : ObjectiveTo develop a new method for simultaneous determ in ati on of ursolic acid

3、and olea nolic acid in Prun ella vulgaris L. MethodsThe high performanee liquid chromatography was used . The column was Nucleodur C18 (4.6 mm X 250 mm 5 卩 m) column，the mobile phase con sisted of metha nol - water (86 : 14) , the flow rate was 0.8 ml/m in and the detect ion wavele ngth was set at 2

4、10 nm. ResultsThe lin ear range with good lin earity of ursolic acid was betwee n 0.425 2 3.826 8 卩 g and with the oleanolic acid was between 0.127 2 1.144 8 卩 g. The average recovery of ursolic acid was 98.0 % with relative standard deviation (RSD )of 1.0 % and the oleanolic acid was 98.7 % with RS

5、D of 1.4 %.ConclusionThe method is simple, accurate, reliable and can be used for quality con trol of Prun ella vulgaris L . Key words : Prunella vulgaris L; Ursolic acid; Oleanolic acid; RP-HPLC 夏枯草 Prunella vulgaris L. 是唇形科夏枯草属植物，为中医临床常用中 药，始载于神农本草经，主产于河南、安徽、江苏、浙江等地，以干燥果 穗或全草入药，味辛苦、性寒，具有清肝、明目、散结、消

6、肿、止痛之功效， 用于目赤肿痛、羞明流泪、头痛眩晕、瘰疬、瘿瘤、乳痈肿痛等 1。现代临 床多用于治疗甲状腺肿大、淋巴结核、乳腺增生、高血压病、肺结核、急性黄 疸型传染性肝炎等疾病。夏枯草中含有三萜及其苷类、苯丙素类、甾醇及其苷 类、黄酮类、香豆素类、有机酸类、挥发油等多种活性化学成分 24,其 中乌索酸和齐墩果酸为夏枯草的主要活性成分 56。目前夏枯草中两种三萜 酸含量的测定，文献报道主要采用薄层色谱法、气相色谱法、紫外分光光度法 和毛细管胶束电动色谱法 710。本实验建立高效液相色谱法同时测定了夏 枯草中乌索酸和齐墩果酸的含量，旨在为控制夏枯草内在质量提供依据。 1 仪器与材料 1.1 仪器

7、 Waters515 高效液相色谱仪， 2296 光电二极管矩阵检测 器，77251 进样阀，Empowe 中文色谱工作站；KS-1500 超声清洗器（宁波科声 仪器厂），CP225D 准微量天平（德国 Sartorius 公司），UPWS-I-10T 纯水机 （杭州永洁达膜分离设备厂），FW10C 高速万能粉碎机（天津市泰斯特仪器有 限公司）。 1.2 试剂与材料 甲醇为色谱纯（上海陆忠试剂厂），水为高纯水，乙 醇为分析纯（ 95 %，江西同盟试剂厂），乌索酸、齐墩果酸对照品（中国药品 生物制品检定所提供，批号分别为： 110742-200314， 110709-200311 ），夏枯 草（

8、市售）。 2 方法与结果 2.1 色谱条件和系统适应性色谱柱为 Nucleodur C18 柱（4.6 mm X 250 mm 5 卩 m），带保护柱，流动相为甲醇-水（86:14），流速为 0.8 ml/min，检 测波长 210 nm,柱温 25E， 外标法定量分析， 乌索酸和齐墩果酸理论塔板数均 大于 10 000。对照品及夏枯草样品的 HPLC 色谱见图 1。 a 对照品 b 夏枯草样品 1.齐墩果酸 2.乌索酸 图 1 对照品和夏枯草样品的 HPLC 色谱图（略） 2.2 溶液的配制 2.2.1 对照品储备液精密称取干燥至恒重的乌索酸对照品 21.26 mg， 齐墩果酸对照品 6.3

9、6 mg，置于 10 ml 容量瓶中，加入适量甲醇溶解，定容， 摇匀，作为乌索酸和齐墩果酸对照品储备液，备用。 2.2.2 夏枯草样品溶液将药材夏枯草在 80 T下恒温干燥 12 h，取适 量夏枯草于高速万能粉碎机中粉碎，备用。精密称取夏枯草粉末约 2 g ，置具 塞三角烧瓶中，加入 95 %乙醇溶液 30 ml，超声提取 120 min，放冷，滤过， 滤渣再加入少量乙醇，超声洗涤 2 次，合并滤液至 50 ml 容量瓶中，乙醇定 容，摇匀，得样品溶液。 2.3 标准曲线的绘制精密吸取乌索酸和齐墩果酸对照品储备液 1 ml 至 10 ml 容量瓶中，甲醇定容，摇匀，制成含乌索酸 0.212 6 mg/ml ，齐墩果酸 0.063 6 mg/ml的对照品混合溶液。分别吸取 2，6，10，14，18 卩 l，按 2.1 色谱条件进样测定峰面积，以峰面积（卩 V? s）为纵坐标，进样量（卩 g） 为横坐标，进行线性拟合，得乌索酸回归方程为 丫=5.18X1O5XM.35 X 103, r=0.999 84 ;齐墩果酸回归方程为 丫 = 3.28 X 105 X-1.90 X 103, r=0.999 60,表明当乌索酸进样量在0.425 23.826