分枝杆菌-梭菌属讲述

1、 主讲教师：陈思佳主讲教师：陈思佳 医学微生物学教研室医学微生物学教研室哈尔滨医科大学哈尔滨医科大学 结核分枝杆菌结核分枝杆菌 形态、染色及培养特性 抵抗力和变异性 致病物资及特点 所致疾病 免疫性及超敏反应 郭霍现象 结核菌素试验 卡介苗 治疗和预防原则 麻风分枝杆菌麻风分枝杆菌 形态染色特点 致病特点及分型 防治原则 非结核分枝杆菌非结核分枝杆菌 非结核分枝杆菌的分组及致病性 主要内容主要内容分枝杆菌属（分枝杆菌属（Mycobacterium）共同特性共同特性 细长略带弯曲的杆菌 生长速度慢 无鞭毛、无芽孢、不产生内外毒素 细胞壁含有丰富的脂质成分（分枝菌酸） 致病性与菌体成分相关 抗酸杆

2、菌（acid-fast bacillus）分枝杆菌属分枝杆菌属 分类结核分枝杆菌复合群 结核分枝杆菌 牛型分枝杆菌 非洲分枝杆菌 田鼠分枝杆菌麻风分枝杆菌 非结核分枝杆菌 o根据生长速度n 快生长菌n 慢生长菌 第一节第一节 结核分枝杆菌结核分枝杆菌Mycobacterium tuberculosis(TB)流行病学流行病学 结核病的病原菌 1882年德国细菌学家 Koch 证明 全球性卫生问题 是艾滋病高发区人群的首要死因 世界防治结核病日 3月24日结核病的国际形势结核病的国际形势 WHO统计 世界1/3的人口感染结核 世界范围每年死亡人数为200万人 140万（2010年） 90%以上在

3、发展中国家 每年新病例为800万-1000万人 我国结核病人450万人，每年死亡人数约25万生物学形状生物学形状 形态染色 培养特性 抵抗力 变异性形态与染色形态与染色 细长略弯, 分枝状杆菌 无芽胞无鞭毛, 无内外毒素 抗酸染色阳性(Zeihl-Neelsen acid-fast stain)齐-尼氏抗酸染色法 Ziehl-Neelsen method for acid fast bacterian涂片、固定、干燥n初染：石炭酸复红n脱色：3%的盐酸酒精n复染：美篮染液n干燥、镜检培养特性培养特性 专性需氧，最适pH6.5-6.8 生长缓慢：代时18h 营养要求高 罗氏培养基：甘油、天门冬素

4、、蛋黄、马铃薯、无机盐类、孔雀蓝 液体培养基 吐温-80 (Tween 80)抵抗力抵抗力 Resistant to 干燥酸碱碱性染料青霉素等 o Sensitivity n 紫外线n 酒精n 湿热n 抗结核药物n 异烟肼n 利福平等变异性变异性 形态 L型 Much 颗粒 菌落 耐药性 毒力变异卡介菌卡介菌-卡介苗（卡介苗（Bacilli Calmette-Gurin，BCG）是毒力变异株，将有毒的牛型结核分枝杆菌培养于含甘油、胆汁、马铃薯的培养基中，经230次传代，历史13年而获得的减毒活菌株，目前广泛应用于结核病的预防致病性致病性致病物质1.类脂2.蛋白质3.多糖致病物质致病物质 类脂（

5、lipid） 分枝菌酸（mycolic acid）.抗酸染色特性 索状因子（cord factor).慢性肉芽肿 磷脂（phosphatide）.结核结节，干酪样坏死 蜡质D（wax-D）迟发型超敏反应 硫酸脑苷酯（sulfatide）.细胞内寄生 蛋白质结核结节形成、全身中毒 多糖（polysaccharide）.胞内寄生所致疾病所致疾病 感染类型肺部感染：肺结核（原发感染、继发感染）肺外感染 传播途径呼吸道消化道破损皮肤黏膜等侵犯多种组织器官多发生于儿童 原发综合征原发综合征原发结核原发结核原发综合征：原发灶、淋巴管炎、肺门淋巴结肿大原发综合征：原发灶、淋巴管炎、肺门淋巴结肿大原原发发型型

6、肺肺结结核核正正肺结核肺结核-继发感染：成人多发继发感染：成人多发诱发因素 原发病灶中潜伏的结核分枝杆菌引起 外界的结核分枝杆菌再次入侵感染特点 病灶局限，不累及临近淋巴组织 易发生慢性肉芽肿和干酪样坏死和空洞肺结核肺结核-继发感染继发感染病程呈慢性渐进性，伴有乏力、体重减轻、咳嗽、盗汗、病程呈慢性渐进性，伴有乏力、体重减轻、咳嗽、盗汗、午后潮热、胸痛等。病灶多局限呈干酪样结节，若结节破午后潮热、胸痛等。病灶多局限呈干酪样结节，若结节破溃，则可形成空洞，传染性强。溃，则可形成空洞，传染性强。右右上上干干酪酪样样肺肺结结核核右右下下干干酪酪样样肺肺结结核核右下干酪性肺炎并空洞形成肺外感染肺外感染

7、 免疫力低下患者 形成全身粟粒性结核或播散性结核 临床表现临床表现 咳嗽，咳痰(血痰） 全身倦怠感 微热 盗汗 胸痛 食欲低下 体重减少感染结核菌的过程 感染不发病（既往感染）初次感染发病 原发感染抵抗力下降时发病 继发感染 成人多发数月-2年之内发病 儿童多见80%-90%80%-90%5%-10%5%-10%5%-10%5%-10%免疫机制：免疫机制：主要是细胞免疫主要是细胞免疫 感染免疫、有菌免疫（infection immunity ） 感染TB或接种BCG后，机体可产生对该菌特异性免疫力，维持依赖于TB在体内的存在 细胞免疫 迟发型超敏反应结核菌初次感染（10-14d)既往感染(1-

8、2d)皮下注射红肿、溃疡、坏死红肿、浅表溃烂淋巴结肿大 全身播散死亡 病灶局限无播散，无死亡获得免疫力郭霍现象郭霍现象结核菌素试验结核菌素试验 结核菌素试剂旧结核菌素（old tuberculin，OT)纯蛋白衍化物 (purified protein derivative，PPD)结核菌素试验结核菌素试验 方法 取两种PPD 5单位注入两前臂皮内 4872小时后观察红肿直径 结果 阴性：5mm 阳性：5mm 强阳性：15mm结核菌素试验结果、临床意义阳性阳性强阳性强阳性 阴性阴性硬结、红肿直径515mm之间既往感染过结核分枝杆菌卡介苗接种成功硬结直径超过15mm以上表明可能有活动性结核，应进

9、一步检查注射部位有针眼大的红点或稍有红肿，硬结直径小于5mm原发感染的早期严重结核病或其他传染病（麻疹）老年人免疫力低下病人微生物学检查微生物学检查 标本取材和处理 涂片染色镜检：抗酸染色 须与非结核分枝杆菌进行鉴别加热法：非结核分枝杆菌加热2分钟即失去抗酸性，而结核分支杆菌则不然 结核菌素皮肤试验：检测潜伏结核感染的唯一的方法 细菌学基因诊断：PCR 动物试验结核分枝杆菌痰标本抗酸染色结核分枝杆菌尿标本抗酸染色荧光金胺染色结核分枝杆菌结核病快速诊断方法结核病快速诊断方法 全自动核酸扩增试验（NAAT）被世界卫生组织认可 约100分钟内可为多名病人做出准确诊断 特异性防治特异性防治 卡介苗预防

10、接种对象：新生儿和结核菌素试验阴性的儿童免疫时间：35年 药物治疗五项原则早期、联合、规则、足量、全程第二节第二节 麻风分枝杆菌麻风分枝杆菌Mycobacterium leprae麻风分枝杆菌（麻风分枝杆菌（M. leprae） 麻风病的病原菌 慢性传染病 主要侵及皮肤、粘膜和神经 引起关节的畸形性病变 世界各地均有报道 主要分布在亚、非洲 拉丁美洲生物学形状形态与染色形态与染色 细长略弯曲 无芽胞，无荚膜，无鞭毛 抗酸染色阳性 典型的胞内寄生菌 麻风细胞 抵抗力抗干燥：可存活7天低温环境生存良好紫外线及加热敏感培养特性培养特性 不能在人工培养基中生长 小鼠足垫：传代 动物模型：犰狳（arma

11、dillo)致病性 易感人群： 人 传播途径： 密切接触和呼吸道传播 潜伏期： 平均2-5年 发病慢、病程长 麻风分为3种类型 瘤型麻风 结核样型 界线类、未定类瘤型麻风瘤型麻风 传染性强 病情严重 侵犯部位 皮肤和粘膜 神经 眼睛及内脏 镜检病变部位 麻风细胞 肉芽肿结核样型结核样型n 传染性小n 侵犯部位u皮肤u外周神经u很少累及内脏Mycobacterium leprae结核样型麻风皮肤损害界线类麻风引起的手变形微生物学诊断微生物学诊断 显微镜检查，抗酸染色 PCR：尚在研究阶段麻风细胞抗酸染色麻风分枝杆菌组织切片（Triff染色）防治原则防治原则 特异的预防 尚无有效的菌苗 早期发现、

12、早治疗 目前多采用二三种药联合治疗 氨苯砜（dapsone，DDS）Lepromatous Leprosy Pre- and Post-Treatment非结核分枝杆菌非结核分枝杆菌 除人型结核分枝杆菌、牛型结核分枝杆菌与麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌菌群 海分支杆菌 ( M. marinum ) 耻垢杆菌 ( M. smegmatis ) 多存在于自然界，是条件致病菌 与结核分支杆菌鉴别小结小结 生物学性状形态大小、培养、染色特点及抵抗力 致病性致病物质及引起的疾病郭霍现象、结核菌素实验及判定标准 微生物学检查抗酸染色及快速检测方法（核酸检测） 治疗与预防：BCG问题问题 简述结核分枝杆菌的主要

13、生物学特性 简述结核菌素试验原理、结果判断及意义 简述结核病的预防及抗结核药物的治疗原则 何为卡介苗？简述卡介苗在实际工作中的应用及对其效果的评价 简述麻风分枝杆菌的生物学特性及致病特点参考文献参考文献普通高等教育 “十一五”国家规划教材医学微生物学(第二版)谷鸿喜主编，北京大学医学出版社 2009年7月普通高等教育 “十一五”国家规划教材医学微生物学(第六版)李凡主编，高等教育出版社 2011年5月WHO：/en/US CDC: NIH: China CDC: http:/China Min

14、istry of Health: http:/维基百科： 第第十九章十九章 梭菌属梭菌属Clostridium医学微生物学教研室医学微生物学教研室哈尔滨医科大学哈尔滨医科大学主要内容主要内容 破伤风梭菌破伤风梭菌 芽胞及抵抗力 破伤风痉挛毒素 致病机制 所致疾病 特异性防治 产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌 形态及培养特点 致病物质 所致疾病 微生物检查法 肉毒梭菌肉毒梭菌 形态特点 肉毒毒素 致病机制 肉毒中毒 毒素检测 艰难梭菌艰难梭菌 毒素及致病性（Clostridium） 一群专性厌氧、革兰阳性的粗大杆菌一群专性厌氧、革兰阳性的粗大杆菌 形成形成芽

15、胞芽胞，细菌膨胀呈梭形，细菌膨胀呈梭形 产生外毒素产生外毒素 广泛分布于自然界广泛分布于自然界 破伤风梭菌破伤风破伤风梭菌破伤风 产气荚膜梭菌气性坏疽产气荚膜梭菌气性坏疽 肉毒梭菌肉毒中毒肉毒梭菌肉毒中毒 艰难梭菌假膜性结肠炎、抗生素相关腹泻艰难梭菌假膜性结肠炎、抗生素相关腹泻(C.tetani) 形态与染色形态与染色 G+ ,1 mx5 m ，粗大杆菌，粗大杆菌 芽胞位于顶端，菌体呈鼓槌状芽胞位于顶端，菌体呈鼓槌状 芽胞抵抗力强芽胞抵抗力强n 专性厌氧专性厌氧n 周身鞭毛周身鞭毛破伤风梭菌破伤风梭菌 感染途径感染途径 创伤、不洁接生创伤、不洁接生 疾病疾病 引起破伤风、新生儿破伤风引起破伤风

16、、新生儿破伤风 感染条件感染条件厌氧微环境厌氧微环境 伤口深而窄伤口深而窄 混有泥土、异物混有泥土、异物 局部组织缺血或同时伴有需氧菌混合感染局部组织缺血或同时伴有需氧菌混合感染 致病物质致病物质 破伤风痉挛毒素（破伤风痉挛毒素（tetanospasmin） 强毒性蛋白质强毒性蛋白质 对人的致死量是对人的致死量是1 g 轻链具有毒性作用轻链具有毒性作用 重链能与神经细胞表面受体神经节重链能与神经细胞表面受体神经节苷脂结合苷脂结合 0.3%甲醛作用甲醛作用4周后脱毒成为类毒素周后脱毒成为类毒素破伤风痉挛毒素对脑干神经和脊髓前角细胞有高度亲和力破伤风痉挛毒素对脑干神经和脊髓前角细胞有高度亲和力局部

17、感染局部感染毒素毒素脊髓前角神经细胞脊髓前角神经细胞与神经节苷脂结合与神经节苷脂结合阻止抑制突触阻止抑制突触释放介质释放介质( (甘甘) )兴奋性增高兴奋性增高全身肌肉痉挛全身肌肉痉挛血、淋巴血、淋巴外周神经间隙外周神经间隙 嚼肌痉挛，牙关紧闭和嚼肌痉挛，牙关紧闭和吞咽困难。吞咽困难。躯干及四肢肌肉强直，躯干及四肢肌肉强直，角弓反张体征。角弓反张体征。膈肌痉挛、呼吸困难窒膈肌痉挛、呼吸困难窒息而死。息而死。 免疫性免疫性 破伤风免疫是典型的抗毒素免疫破伤风免疫是典型的抗毒素免疫 微量毒素即发病，且与神经迅速结合，微量毒素即发病，且与神经迅速结合，不能引起有效免疫应答不能引起有效免疫应答 有效地

18、获得抗毒素的途径是：有效地获得抗毒素的途径是： 主动免疫：注射类毒素主动免疫：注射类毒素 被动免疫：注入大剂量抗毒素被动免疫：注入大剂量抗毒素 临床诊断主要结合创伤史和特有体征临床诊断主要结合创伤史和特有体征 微生物学检查对早期诊断意义不大微生物学检查对早期诊断意义不大 必要时可取伤口渗出物涂片染色镜检及厌必要时可取伤口渗出物涂片染色镜检及厌氧菌培养，并以培养物滤液做动物试验，氧菌培养，并以培养物滤液做动物试验，以确定有无毒素产生以确定有无毒素产生 人工主动免疫人工主动免疫 制剂：精制破伤风类毒素制剂：精制破伤风类毒素 对象：婴幼儿、部队战士、建筑工人及其他易受伤人群对象：婴幼儿、部队战士、建

19、筑工人及其他易受伤人群 方法：基础免疫方法：基础免疫1年后加强免疫年后加强免疫 对对36个月儿童可采用白百破（个月儿童可采用白百破（DPT）三联疫苗）三联疫苗 人工被动免疫人工被动免疫 制剂：注射破伤风抗毒素（制剂：注射破伤风抗毒素（TAT） 用途：用途： 紧急预防紧急预防 1500-3000u 特异治疗特异治疗 早期、大量注射破伤风抗毒素早期、大量注射破伤风抗毒素 注意事项：注射前应做皮肤过敏试验，脱敏疗法注意事项：注射前应做皮肤过敏试验，脱敏疗法 抗生素的使用抗生素的使用 大量青霉素或甲硝唑大量青霉素或甲硝唑 革兰阳性大杆菌革兰阳性大杆菌 卵圆形芽胞卵圆形芽胞 荚膜荚膜 无鞭毛无鞭毛 厌氧

20、培养：繁殖极快厌氧培养：繁殖极快 分解乳糖产气多分解乳糖产气多 凝固酪蛋白凝固酪蛋白 A-E 5型型 A型常见型常见汹涌发酵实验 多种毒素和酶多种毒素和酶 ：-毒素毒素 气性坏疽气性坏疽（gas gangrene） 局部组织坏死、水肿、气肿、局部组织坏死、水肿、气肿、 肿胀剧痛，触摸有捻发感肿胀剧痛，触摸有捻发感 特殊的臭味特殊的臭味 全身中毒全身中毒 食物中毒：食物中毒： A型产肠毒素型产肠毒素 直接涂片镜检直接涂片镜检 分离培养与动物实验分离培养与动物实验 血平板或疱肉培养基血平板或疱肉培养基 厌氧培养厌氧培养 涂片镜检涂片镜检 生化鉴定生化鉴定 取细菌培养液给小鼠或家兔静脉注射取细菌培养液给小鼠或家兔静脉注射 及时处理伤口及时处理伤口 扩创、清创、手术器械灭菌扩创、清创、手术器械灭菌 早期可用多价抗毒素血清早期可用多价抗毒素血清 抗生素使用抗生素使用（C.botulinum） 革兰阳性粗大杆菌革兰阳性粗大杆菌 周鞭毛周鞭毛 无荚膜无荚膜 椭