常用缓冲液配置

1、实验室常用缓冲液配置方案1)1 M Tris-HCI ,组份浓度：1 M Tris-HCI配制量：1 L配制方法：1. 称量121.1 g Tris 置于1 L烧杯中。2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值PH值浓HCl约 70ml约 60ml约 42ml4. 将溶液定容至1 L。5. 咼温咼压火菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1C,溶液的pH值大约降低个单位。2)10 x TE Buffer ,组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA

2、配制量：1 L配制方法：1.量取下列溶液，置于 1 L烧杯中。1M Tris HCl Buffer(，)100ml500mM EDTA20ml2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合3. 将溶液定容至1 L后，高温高压火菌。4. 室温保存。3) 1.5 M Tris-HCl组份浓度：1.5 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量181.7 g Tris 置于1 L烧杯中。2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 用浓盐酸调节 pH值至。4. 将溶液定容至1 L。5. 高温高压火菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH

3、值随温度的变化差异很大，温度每升高1C,溶液的pH值大约降低个单位。4) 3 M醋酸钠组份浓度：3M醋酸钠配制量：100ml配制方法：1. 称量40.8g NaAc- 3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月 40ml的去离子水搅拌溶解2. 加入冰醋酸调节 pH值至3. 加去离子水将溶液定容至100ml4咼温咼压火菌后，室温保存。5)PBS Buffer组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4配制量：1 L配制方法：1. 称量下列试剂，置于 1 L烧杯中。NaCl8gKCl0.2gNa2HPO41.42gKH2PO40

4、.27g2. 向烧杯中加入约 800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 滴加浓盐酸将 pH值调节至，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。4. 咼温咼压火菌后，室温保存。注意：上述 PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mMCaCl2和0.5 mMMgCl26) 10 M醋酸铵组份浓度：10 M醋酸铵配制量：100 ml配制方法：1. 称量g醋酸铵置于100200 ml烧杯中，加入约 30 ml的去离子水搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。3. 使用mm滤膜过滤除菌。4. 密封瓶口于室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。7) 苯酚/氯仿/

5、异戊醇(25 : 24 : 1)配制方法：1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇(25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中岀现的气泡。2. 配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿 /异戊醇(24 : 1 )混合均匀后，移入棕色 玻璃瓶中4C保存。8) 10% (W/V) SDS组份浓度：10 % (W/V)SDS配制量：100ml配制方法：1.称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中，加入约 80ml的去离子水，68C加入溶解2. 滴加浓盐酸调节 pH值至3. 将溶液定容至100ml后

6、，室温保存。9) 2 N NaOH组份浓度：2 N NaOH配制量：100 ml配制方法：1. 量取 80 ml去离子水置于100200 ml塑料烧杯中(NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻 璃烧杯炸裂)。2. 称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100 ml。4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。10) N HCl组份浓度：N HCI配制量：100 ml配制方法：1. 在ml的去离子水中加入 ml的浓盐酸(N)，均匀混合。2. 室温保存。11) 5 M NaCl组份浓度：5 M NaCl配制量：1 L配制方法：1

7、. 称取292.2 g NaCl置于1 L烧杯中，加入约 800 ml的去离子水后搅拌溶解2. 加去离子水将溶液定容至1 L后，适量分成小份。3. 咼温咼压火菌后，4C保存。11) 20% (W/V) Glucose组份浓度：20 % (W/V) Glucose配制量：100 ml配制方法：1. 称取20 g Glucose 置于100200 ml烧杯中，加入约 80 ml的去离子水后，搅拌溶解2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。3. 咼温咼压火菌后，4C保存。12) Solution 1(质粒提取用)组份浓度：25 mM Tris-HCl ( , 10 mM EDTA, 50 mM G

8、lucose配制量：1 L配制方法：1.量取下列溶液，置于 1 L烧杯中。1M Tris-HCl ()25ml0.5M EDTA ()20ml20% Glucose (1.11M)45mldH2O910ml2. 咼温咼压火菌后，4 C保存。3. 使用前每 50 ml 的 Solution I 中加入 2 ml 的 RNase A (20 mg/ml)13) Solution II(质粒提取用)组份浓度：200mM NaOH 1% (W/V)SDS配制量：500ml配制方法：1. 量取下列溶液，置于 500ml烧杯中10% SDS 50ml2N NaOH 50ml2. 加灭菌水定容至 500ml

9、，充分混匀3. 室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月 注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌14) Solution III(质粒提取用)组份浓度：3 M KOAc, 5 M CH3COOH配制量：500 ml配制方法：1.称量下列试剂，置于 500 ml烧杯中。KOAC?147g?CH3COOH2. 加入300 ml去离子水后搅拌溶解。3. 加去离子水将溶液定容至500 ml4. 咼温咼压火菌后，4C保存。15) 0.5 M EDTA组份浓度：0.5 M EDTA配制量：1 L配制方法：称取 g Na2EDTA 2H2O置于 1 L烧杯中。2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。3

10、. 用NaOH调节pH值至(约20 g NaOH)。注意：pH值至时，EDTA才能完全溶解。4. 加去离子水将溶液定容至1 L。5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。6. 室温保存。16) 1 M DTT组份浓度：1 M DTT配制量：20 ml配制方法：1. 称取g DTT，加入到50 ml塑料离心管内。2. 加20 ml的M NaOAc (，溶解后使用 mm滤器过滤除菌3.适量分成小份后，-20 C保存。17)10 mM ATP组份浓度： 10 mM ATP 配制量： 20 ml 配制方法：1. 称取121 mg Na2ATP 3H2O加入到 50 ml塑料离心管内。2. 加 20 ml 的

11、 25 mM Tris-HCl (，搅拌溶解。3. 适量分成小份后，-20 C保存。一. 常用贮液与溶液1mol/L亚精胺(Spermidine ):溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于 -20 C。1mol/L精胺(Spermine ):溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20 C。10mol/L 乙酸胺( ammonium acetate ):将 77.1g 乙酸胺溶解于水中，加水定容至 1L 后，用孔 径的滤膜过滤除菌。10mg/ml牛血清蛋白(BSA):加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶)于

12、水中(为减少变性， 须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白)，盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为 止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于 -20 C。1mol/L二硫苏糖醇(DTT):在二硫苏糖醇 5g的原装瓶中加水，分成小份贮存于-20 C。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加的水配制成 1mol/L 二硫苏糖醇溶液。8mol/L 乙酸钾( potassium acetate ):溶解 78.5g 乙酸钾于足量的水中，加水定容到 100ml。1mol/L氯化钾(KCl):溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L 乙酸钠( sod

13、ium acetate ):溶解 40.8g 的三水乙酸钠于约 90ml 水中，用冰乙酸调溶液 的pH至，再加水定容到100ml。L EDTA:配制等摩尔的 Na2EDTA和NaOH溶液(L)，混合后形成 EDTA的三钠盐。或称取 186.1g 的Na2EDTA2H2O和20g的NaOH并溶于水中，定容至 1L。1mol/L HEPES :将溶于约 90ml的水中，用 NaOH调pH (),然后用水定容至100ml。1mol/L HCl :加的浓盐酸至的水中。25mg/ml IPGT:溶解250mg的IPGT (异丙基硫代-B -D-半乳糖苷)于10ml水中，分成小份贮存 于-20 C。1mo

14、l/LMgCl2:溶解 20.3g MgCl2 - 6H2O 于足量的水中，定容到100ml。100mmol/L PMSF :溶解174mg的PMSF(苯甲基磺酰氟)于足量的异丙醇中，定容到 10ml。分成 小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于 -20 C。20mg/ml蛋白酶 K ( proteinase K ):将200mg的蛋白酶L加入到水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到 10ml，然后分装成小份贮存于 -20 C。10mg/mlRnase (无 DNase) ( DNase free RNase):溶解 10mg 的胰蛋白 RNA酶于 1ml 的 10mmol/

15、L 的乙酸钠水溶液中 (pH )。溶解后于水浴中煮沸 15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris HCl 调pH至，于-20 C贮存。(配制过程中要戴手套)5mol/L氯化钠(NaCl):溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。10N氢氧化钠（NaOH :溶解400g氢氧化钠颗粒于约 0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢 氧化钠完全溶解后用水定容至1L。10% SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含 0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1Lo2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol ）:溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水

16、中使终体积为100ml。100%三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入 100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全 溶解。（稀释液应在临用前配制）% X gal （5-溴-4-氯-3-吲哚一B -半乳糖苷）：溶解25mg的X gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF, 用铝箔包裹装液管，贮存于 -20 Co100X Denhardt 试剂（Denhardts regent ）成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量2%聚蔗糖（Ficoll ，400 型）2 %聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）2% BSA （组分 V）水2g2g2g加水至总体积为 100ml依照上表称取各组分，溶于水中定

17、容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20 C贮存。10X标准DNA连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端连接）成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量L Tris-HCl100mmol/L MgCl2100mmol/L DTT2mmol/L ATP5mmol/L盐酸亚精胺（可选） ml BSA （组分V）（可选） 水5ml 1mol/L 贮液1ml 1mol/L 贮液1ml 1mol/L 贮液200ul 100 mmol/L 贮液50ul 1 mmol/L 贮液10 mg/mL 贮液将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20 C o100 mmol/L d

18、NTP 溶液（dNTP solutions ）可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80 C可贮存至少 6个月10mmol/L dNTP 混合液成分及终浓度配制20ul溶液各成分的用量10mmol/L dATP10mmol/L dCTP10mmol/L dGTP10mmol/L dTTP水2ul 100mmol/L dATP贮液2ul 100mmol/L dCTP贮液2ul 100mmol/L dGTP贮液2ul 100mmol/L dTTP贮液12ul20% PEG 8000/2.5M NaCl成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量质量浓度为20%聚乙二醇L氯化钠水20g50ml

19、 5 mol/L 氯化钠 或14.6g 固体氯化钠补足100ml加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。20 X SSC成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量300mmol/L柠檬酸三钠（二水）88.2g3mol/L氯化钠175.3g水补足1L溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约 0.9L水中，加几滴10N NaOH溶液调pH为，用水补足体 积至1LoDEPC（焦碳酸二乙酯）处理水加100ul DEPC于100ml水中，使 DEPC的体积分数为。在 37C温浴至少12h，然后在15 psi 条件下高压灭菌 20min，以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反

20、应，不可用 DEPC处理Tris缓 冲液。甲酰胺（deionized formamide）直接购买或加 Dowex XG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。经 Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80 C贮存（防止氧化）。磷酸缓冲液（phosphate buffer ）按照下表所给定的体积，混合1 mol/L的磷酸二氢钠（单碱）和 1mol/L磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制 1 mol/L的磷酸二氢钠（NaH2PO4H2O贮液：溶解 138g 于足量水中，使终体积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠（Na

21、2HPO4贮液：溶解142g于足量水中使终体积为1Lo1mol/L磷酸二氢钠（ml）1mol/L磷酸氢二钠（ml）最终pH值877850815775735685625565510450390330280123150185225265315375435490550610670720TE （用于悬浮和贮存DNA成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量10mmol/L Tris HCl1mmol/L EDTA水1ml 1mol/L Tris-HCl(，25 C)200ul mol/L EDTA( pH )Tris 缓冲液(Tris-HCl buffer )将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中

22、，再根据所要求的pH （ 25C下）加一定量的浓盐酸（），用水调整终体积至1L。浓盐酸的体积（ml）pH14213846566676二. 电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液50x Tris -乙酸（TAE 缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量2mol/L Tris 碱1mol/L乙酸100 mmol/L EDTA水242gml的冰乙酸(mol/L )200ml 的 mol/L EDTA ( pH ) 补足1L5X Tris -硼酸（TBE缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量445 mmol/L Tris 碱445 mmol/L 硼酸盐10 mmol/L EDTA水54g27.5

23、g硼酸20 ml 的 mol/L EDTA ( pH ) 补足1L染料1%溴酚蓝（bromophenol blue ）加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。1 %二甲苯青 FF （xylene cyanole FF ）溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到 100ml。10mg/ml 的溴化乙锭（ethidium bromide ）小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于 4C贮存。凝胶上样液（gel loading solutions ）6X碱性凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成

24、分用量N氢氧化钠6 mmol/L EDTA18%聚蔗糖（400型）%溴甲酚绿%二甲苯青FF300ul 10N 氢氧化钠120ul L EDTA ()1.8g15mg25mg水补足到10ml6 x聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量%溴酚蓝%二甲苯青FF5 mmol/L EDTA15%聚蔗糖（400型） 水1 %溴酚蓝1 %二甲苯青FF100ul L EDTA ()1.5g补足到10ml6X溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量%溴酚蓝1 %溴酚蓝%二甲苯青FF1 %二甲苯青FF15%聚蔗糖（400型）1.5g水补足到1

25、0ml6X甘油凝胶上样液（4C贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量%溴酚蓝1 %溴酚蓝%二甲苯青FF1 %二甲苯青FF5 mmol/L EDTA100ul L EDTA ()50%甘油3ml水6x蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量%溴酚蓝1 %溴酚蓝%二甲苯青FF1 %二甲苯青FF5 mmol/L EDTA100ul L EDTA ()40%聚蔗糖4g水补足到10ml10x十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量%溴酚蓝%二甲苯青FF200 mmol/L EDTA % SDS50%甘油水20mg20mg4ml L E

26、DTA100ul 10 % SDS5ml补足到10ml三. 常用培养基1） LB培养基将下列组分溶解在 0.9L水中:蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10g如果需要用1N NaOH （1ml）调整pH至，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。SOB培养基将下列组分溶解在 0.9L水中：蛋白胨20g酵母提取物5g氯化钠0.5g1 mol/L 氯化钾用水补足体积到1L。分成100ml的小份，咼压火菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。2）SOC培养基成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，

27、除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加 2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水 补足到100ml，用的滤膜过滤除菌）。3）TB培养基将下列组分溶解在 0.9L水中:蛋白胨12g酵母提取物24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。冷却到60C，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/ mol/L K2HPO4 的溶液（的KH2PO4和溶在足量的水中，使终体积为100ml。高压灭菌或用的滤膜过滤除菌）。4） 2XYT培养基将下列组分溶解在 0.9L水中:蛋白胨16g酵母提取物10g氯化钠4ml如果需要用1N NaOH （1ml）调整pH至，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L。5） YPD培养基将下列组分溶解在 0.9L水中:蛋白胨20g酵母提取物10g葡萄糖20g用水补足体积为1L后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加